HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量

HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量 HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的 含量 !Q:! ScienceandTechno10gyInnovationHerald工程技术 HPLC法测定骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量? 谢仕伟 (东莞市食品药品检验所广东东莞5231O9) 摘要:目的:建立骨碎补配方颗粒中柚皮苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法定量柚皮苷,色谱柱:大连依利特C反相拄 (5umX250ramX4.6ram),流动相:甲醇一醋酸一水(35:4:65),拄温为35?,流速:1.OmL/min,检测波长:283nm.结果:HPLC图谱显示,色谱峰 形好,分离度高,阴性对照无干扰;供试品在24h内稳定(RSD=0.80%);该方法精密度高(RSD=0.31%),重复性良好(RSD:0.34%),平均 加样回收率为96.97%(RSD=0.76%).结论:所建立的方法适合作为骨碎补配方颗粒的含量测定方法. 关键词:骨碎补配方颗粒抽皮苷HPLC 中图分类号:R286文献标识码:A文章编号:1674—098x(2011)03(a)一0132—0I 骨碎补配方颗粒,为深圳三九医药股份 有限公司生产的其中一种配方颗粒剂,在国 内医院广泛应用.骨碎补,为水龙骨科植物 槲蕨Drynariafortunei(Kunze)J.Sm.的干燥根 茎,疗伤止痛,补肾强骨,外用消风祛斑,该 药材及其饮片的质量标准收载于《中国药 典》2Ol0年版一部"1.然而,骨碎补配方颗粒 剂却缺乏质量标准.因此,为有效地控制该 制剂的质量,本文采用高效液相色谱法 (HPLC)对骨碎补配方颗粒中的柚皮苷进行 含量测定.该方法操作简便,重现性好,专属 性强,灵敏度高,结果科学准确,适合作为该 品种的含量测定方法.具体研究如下. 1仪器与试药 高效液相色谱仪,电子天平,超声波清洗 器;骨碎补配方颗粒;柚皮苷对照品;甲醇为 色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱 大连依利特C18反相柱(5m×250mmX 4.6ram);流动相为甲醇一醋酸一水(35:4: 65);流速为1.0min/min;柱温为35?;检测 波长为283nm;进样量为10uL.在此条件 下,理论塔板数按柚皮苷峰计算不得低于 3000,柚皮苷峰与相邻的其池峰的分离度应 大于1.5.柚皮苷对照品,骨碎补配方颗粒 和阴性对照色谱图见图1. 2.2对照品溶液的制备 取柚皮苷对照品适量,精密称定,置棕 色瓶中,加甲醇制成每lml含60ug的溶液, 即得. 2.3供试品溶液的制备 取适量本品,研细,取约0.02g,精密称 定,置50ml容量瓶中,加入甲醇30ml,超声处 理(功率250W,频率40kHz)45min,放冷,加 甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得. 2.4精密度试验 取同一份供试品溶液,在上述色谱条 件下重复进样6次,测定,计算柚皮苷峰面 积的RSD为0.31%. 2.5专属性试验 取按处方比例及制法制备的缺骨碎补 的阴性样品,按供试品溶液的制备及测定 方法进行处理和测定. 2.6稳定性试验 取同一批号供试品溶液,自制备后,分 别在0,2,4,8,l2,24h进样,测定柚皮苷的 含量. 2.7重复性试验 取同一批号的骨碎补配方颗粒按2.3 项下供试品溶液制备方法平行制备6份,测 定柚皮苷的峰面积,计算. 2.8加样回收率试验 取同一供试品;柚皮苷含量为28.1mg/ 分别加入适量本品并精密称定,按 g)6份, 2.3N下供试品制备方法和2.1项下色谱条 件测定,计算.通过取样量(g),样品含量 (mg),对照品加入量分别为0.3992mg,总 含量(mg),回收率(%),RSD%=0.76%进行 试验.结果依次如下: l,0.01233g,0.3477mg,0.7348mg,97.0% 2,0.Ol192g,0.3361mg,0.7233mg,97.0% 3,0.01443g,0.4~9mg,0.7881mg,95.5% 4,0.01524g,0.4298mg,0.8187mg,97.4"/0 5,0.01421g,0.4~7mg,0.7890mg,97.3% 6,0.01325g,0.3736mg,0.7633mg,97.6% 2.9样品测定 分别取3批不同批号的骨碎补配方颗 粒,按2.2项下供试品制备方法和2.1项下 色谱条件进行测定,计算样品中柚皮苷的 含量. 3讨论 3.1提取方法的比较 笔者曾比较本文和中国药典2010年版 一 部收载的骨碎补材含量测定项下提取方 法…对柚皮苷含量测定结果的影响.结果 明,超声处理和加热回流两种方法无显着 性差异.另外,在超声处理时间的优化方 面,笔者曾比较了30min,45min和1h,最后 发现超声处理45min便能将样品中的柚皮 苷提取充分.故本文选用操作简单的超声 提取45min作为供试品制备方法. 3.2不同色谱柱的比较 笔者比较了3种不同品牌的色谱柱(戴 安Cl8,大连依力特Cl8和迪马Cl8)对柚皮 苷含量测定结果的影响,结果表明,不同色 谱柱的含量测定结果无显着性差异,该方 法耐用性良好(RSD%=0.54%). 参考文献 【1】国家药典委员会.中国人民共和国药典 [S].一部.北京:化学工业出版社,2010. 对照品(A),骨碎补配方颗粒(B)和阴性对照(C)的HPLC图谱 ?作者简介:谢仕伟(1981一),男,广东广州人,主管药师,中山大学硕士研究生,主要 研究方向为天然药物分析. 132科技创新导报ScienceandTechnologyInnovationHerald