仔猪脾虚状态下SOD活力变化规律及加味四君子汤对其调整作用的试验观察

仔猪脾虚状态下SOD活力变化规律及加味四君子汤对其调整作用的试验观察 仔猪脾虚状态下SOD活力变化规律及加味 四君子汤对其调整作用的试验观察 中国兽医杂志2007年(第43卷)第5期41 仔猪脾虚状态下SOD活力变化规律及加味四君子汤 对其调整作用的试验观察 虞红,李英伦 (四川农业大学动物科技学院,四川雅安625014) 中图分类号:$853.5文献标识码:B文章编号:0529—6005(2007)05—0041—02 现代兽医学认为脾是体内最大的淋巴器官,位 于血液循环径路上,还有造血,贮血,滤过血液,以及 参与机体免疫活动等功能l_1].而中兽医则认为脾的 经脉络于胃,与胃相里,开窍于口.其主要生理功 能为主运化,统血,主肌肉及四肢l_2].中西兽医脾的 概念,功能,范围并不一致,存有较大分歧,至今未达 成共识.近年来,学者们临床与实验相结合,借鉴现 代科技知识和方法,对中兽医脾的本质有了更为深 入的认识.初步认为,中兽医脾系统涉及现代医学的 消化吸收,运动,能量转化,内分泌,免疫,微量元素, 血液流变学,血液循环诸方面.对脾病证之一的脾 (气)虚证也进行了较多的探索,研究表明,脾虚证是 一 种以胃肠道消化吸收功能低下,胃肠运动机能紊 乱为主,涉及植物神经,内分泌,免疫,血液,水液代 谢等多系统功能障碍的综合症候群l_3],其中不乏研 究表明脾虚证与自由基关系密切_4]. 自由基是细胞代谢过程中产生的强氧化性基 团,这种基团为有害物质,可激发机体中不饱和脂肪 酸双键均裂,引起脂质过氧化[6],使生物膜及亚细胞 结构受到损伤.超氧化物歧化酶(Superoxidedismu— tase,SOD)能清除自由基,保护机体免受其害.曲长 江[4],王晓明[5的研究表明,脾虚动物的SOD活性 下降,证明脂质过氧化损伤和抗氧化酶活性降低是 脾虚的病理基础之一_7]. 四君子汤是中医学”益气健脾”治则和治疗”脾 虚证”的经典方和代表方,能改善脾虚状态.为此,本 研究通过测定SOD活性在12h内的动态变化,探讨 实验性脾虚证仔猪与自由基代谢的关系,并揭示加 味四君子汤在体内的抗氧化作用和清除自由基的生 物学效应. 1材料与方法 1.1药物利血平注射液(广东邦民制药有限公 司,含利血平1mg/ml(0.5ml:0.5mg),批号: 6O4392),党参,丹参,茯苓,白术和甘草(购于四川雅 安中药材公司),加味四君子汤(党参:茯苓:白 术;丹参:甘草为9:6:6:6:1,制成100%的水 煎液,保存于4?冰箱备用.SOD测定试剂盒,购于 收稿日期:2005—04—12 作者简介:虞红(1979一),男,硕士,从事兽医药理及毒理学研究 通讯作者:李英伦,E—mail:liyinglun01@163.com 南京建成生物研究所.批号:20040621.肝素钠(上 海伯奥生物科技有限公司). 1.2器材可见分光光度计(带1CITI光径比色 杯).DSHZ一300多用途水浴恒温振荡器,江苏太仓 市实验设备厂生产;VXH一3微型旋涡混合器,上海 跃进医疗器材一厂生产. 1.3实验动物与分组18头健康杂交仔猪(购于 本校动物营养所),9头母猪,9头公猪,体重范围 (17.5?1.56)kg.试验前按常规饲养1周,饲料为自 配仔猪全价料,不含抗菌药物.到试验时临床观察表 现健康.试验前24h及试验期间禁食,仅自由饮水. 将实验动物随机分成3组,每组6头,即健康组, 脾虚组和加味四君子汤反证组.造模时间为2周.正 常对照组:每天上午每头颈部肌肉注射o.5ml生理 盐水,并灌服l10ml生理盐水,按常规饲养.脾虚 组:采用颈部肌肉注射利血平加饥饱失常法造模,即 每天上午每头颈部肌肉注射o.5mg(0.5m1)利血平 注射液,并且采取隔日交替不喂与喂饱的方法使其 脾虚,3天后出现报道相似症状_8].腹泻,便溏或便 软,肛周污秽,继则出现纳呆,四肢无力,活动减少, 毛色枯槁或竖毛,喜卧,贪睡,行动缓慢,反应迟钝等 症状.加味四君子汤反证组:每天上午每头颈部肌肉 注射o.5mg(0.5m1)利血平注射液,并且采取隔日 不喂与喂饱的方法使其脾虚,同时每头每天灌服加 味四君子汤110ml. 1.4血样采集造模成功后,三组动物都禁食不禁 水24h.试验时猪仰卧保定.分别在0h(健康组,脾 虚组灌服110ml生理盐水;反证组灌服加味四君子 汤110m1),0.25h,0.5h,1h,1.5h,2h,2.5h, 3h,4h,5h,6h,7h,8h,10h,12h从前腔静脉采 血2ml,制备血清,置4C冰箱保存待测SOD活力. 1.5SOD活力的测定(黄嘌呤氧化酶法)与计算 通过预试确定加样量后,按SOD试剂盒的说明进行 操作,计算出SOD活力:SOD活力(Nu/m1)=[(对 照管吸光度一测定管吸光度)/对照管吸光度]/50% ×稀释倍数. 2结果 2.1脾虚状态下SoD值从表1可以看出仔猪脾虚 状态下各个时间点SOD值明显低于健康组.健康组 仔猪12h内各个时间点SOD平均值为(128.04? 42中国兽医杂志2007年(第43卷)第5期ChineseJournalofVeterinaryMedicine 7.40),脾虚组仔猪12h内各个时间点SOD平均值为 (93.29?6.14),二者之间差异极显着(P<0.01). 表1健康组,脾虚组,四君子汤反证组仔猪SOD活力比较 采m时间健康组sOD活力脾虚组sOD活力反证组sOD活力 (h)(Nu/m1)(Nu/m1)(Nu/m1) 0139.24士11.7099.18士6.351l5.88士2O.9l 0.25.132.74?6.7793.73士13.16ll3.33?12.2O 0.5l33.12?14.3599.58?+7.73ll1.74?l5.44 1l38.37?7.2791.27?l2.32l16.97士7.3 1.5l25.99士8.O886.73士8.42ll6.37士l4.8lA 2l27.57士l1.4595.40士9.89ll6.14士l6.26 2.5l36.12士4.89lO6.77?+l5.17l2O.48士l6.1l 3l26.96士l0.2699.47士9.94l23.47士l4.86 4ll9.84士l5.9392.15士l7.10ll3.10士l4.2lA 5l3l_04士l3.7088.23士24.78ll6.34士l1.65A 6l25.Ol?l2.5690.82士2O.18l24.13士l2.00 7’l31.27士l1.5888.82?l7.27ll8.69士l5.68 8l17.95士9.1387.79士l7.28ll4.O5士l5.48 l0l16.43士8.3695.79士6.52ll5.36士l2.84 l2l18.9l士l1.2283.65士l2.26ll6.78士l5.90 注:1.两组之间差异显着用不相同字母表示,差异不显着用相同 字母表示.2.大写字母A,B,c表示差异极显着,P<O.O1. 2.2健康组与脾虚组SOD值12h内变化从表2 可以看出,健康组仔猪0,4h(即8点到l2点)的 SOD平均值高于健康组仔猪5,12h(即l3点到20 点)的SOD平均值,差异显着(P<0.05);脾虚组仔 猪0,4h(UP8点到l2点)的SOD平均值高于脾虚组 仔猪5,12h(即13点到2O点)的SOD平均值,差异 极显着(P<0.01). 2.3四君子汤能纠正脾虚仔猪SOD值12h内变化 表2可以看出,投服加味四君子汤的反证组仔猪 0,4h(即8点到l2点)的SOD平均值与其5,12h (即l3点到20点)的SOD平均值相比,差异不显着 (P>0.05).说明加味四君子汤能纠正脾虚仔猪 SOD值12h内变化下降的趋势. 表2不同时间段SOD平均值比较 注:*表示差异显着,P<O.05;**表示差异极显着,P<O.O1. 3讨论 3.1上午SOD活力平均值高于下午SOD活力平均 值从能量代谢方面而论,细胞内线粒体ATP合成 不足,是虚证产生的内在机制之一,而ATP不足又 与自由基损害密切相关.在体内外环境发生改变的 某些情况下,机体内源性自由基清除剂(如SOD)的 含量或活性下降,或组织需氧与供氧的平衡失调,皆 可导致体内自由基的产生过剩,积累的自由基与线 粒体不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应,使膜双层 骨架结构遭到破坏,膜内氧化磷酸化与电子传递链 酶系活性下降,内膜嵴数目减少且排列稀疏.一方 面,可抑制自由基的继续大量产生,极力维持体内过 氧化与抗氧化之间的平衡关系;另一方面,使ATP 合成量降低,从而影响细胞正常的生理功能,并在整 体上有所偏重地表现出各种虚证证型.因此,内源性 自由基清除剂含量或活性下降可能是虚证产生的最 基本的微观机制].同时也表明SOD活力的高低与 动物机体的能量代谢水平成正相关. 由于上午的气温低于下午,为维持正常体温,动物 机体的能量代谢水平上午要高于下午.这可以解释健 康组,脾虚组仔猪0,4h(UP8点到12点)的SOD活力 高于其5,12h(即l3点到20点)的SOD活力. 3.2加味四君子汤能纠正整脾虚状态降低的SOD 活力四君子汤原方出自宋《太平惠民和剂局方》,为 “益气健脾”治则和治疗”脾虚证”的代表方和基础方. 四君子汤可使脾虚大鼠肝细胞线粒体嵴由消失到数 目增多,排列整齐.能减少骨骼肌结构异常的线粒体 数,提高ATP含量,对细胞能量代谢有明显的复健作 用口...四君子汤方中的党参,甘草具有提高SOD活力 的作用[1].加味药丹参[13]可以减轻线粒体膜脂质 过氧化,线粒体内钙超载,改善线粒体膜流动性,降 低通透性,维持线粒体结构完整性;保存与糖代谢有 关的酶类,如琥珀酸脱氢酶(SDH),苹果酸脱氢酶, 葡糖糖一6一磷酸脱氢酶,磷酸化酶等活性,促进缺血 缺氧早期三羧酸循环代谢;恢复线粒体内两条呼吸 链的重要组分一辅酶Q和SDH的活性;增强电子质 子偶联并增加ATP酶合成活性,降低ATP水解活 性,进一步促进氧化磷酸化,增加组织的能量代谢. 本次试验研究表明加味四君子汤在仔猪体内有 抗氧化作用和清除自由基的生物学效应,或许是其 改善仔猪脾虚状态的微观机制之一. 参考文献: [1]内蒙古农牧学院,安徽农学院.家畜解剖学及组织胚胎学(第2 版)[M].北京:农业出版社,1998.151. [2]北京农业大学.中兽医学(第2版)[M].北京:中国农业出版 社,1999.18,19. [3]吴咸中,高金亮.脾虚证的现代研究[M].天津:天津科技翻译 出版公司,1992.48. E4]曲长江.大黄泻下与劳倦过度单复因素造模脾虚小鼠过氧化与 抗氧化改变的比较研究[J].中国中西医结合消化杂志,2001,9 (4):2l3. [5]王晓明.脾为后天之本的分子生物学基础[J].辽宁中医杂志, l994,21(3):l39. [6]张静怡,司徒仲意.自由基与脂质过氧化作用[J].化学通报, l989,12:38—39. [7]杨靖.论脾虚与衰老[J].中国中医药信息杂志,2004,i(i1): l4l5. [8]赵钢,李志明.中医脾虚证动物模型实验研究的近2O年概况 口].医学综述,2000,6(1):43—45. [9]刘劲,曲长江.自由基与中医学的气,m,精[J].中国中医基础 医学杂志,i999,5(12):16-20. [1O]庞来祥.四君子汤药理作用的研究进展口].中医药信息,1991, 8(1):23. [11]朴奎善,韩春姬.轮叶党参对大鼠SOD活力和MDA含量的影 响口].中国中医药科技,1998,5(4):239. [12]董凯.甘草抗衰老作用的研究[J].牡丹江医学院,2004,25 (3):17—18. r13]沈映君.中药药理学[M].北京:人民卫生出版社,2000.661—671.