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【doc】细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的建立

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【doc】细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的建立【doc】细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的建立 细胞增殖法检测单核,巨噬细胞ADCC效 应方法的建立 /_7 细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的建立 黄瑾马忠森林树青(白求恩医科大学第二临床学院呼吸内科,长春130041) 王塑白求恩医科大学第二临床学院胸外科,长春3o04R.弓一弓弓l, 中国图书分类号R392-33 摘要目的:为了建立一种供临床实验室厂.泛应用的检测单核,巨噬细胞ADcc效应的实验方法.方法:选择CTLL2细 胞作为靶细胞,制备出兔抗CrLL2细胞特异性抗血清.用单梭细...
【doc】细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的建立
【doc】细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应的建立 细胞增殖法检测单核,巨噬细胞ADCC效 应方法的建立 /_7 细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应方法的建立 黄瑾马忠森林树青(白求恩医科大学第二临床学院呼吸内科,长春130041) 王塑白求恩医科大学第二临床学院胸外科,长春3o04R.弓一弓弓l, 中国图书分类号R392-33 摘要目的:为了建立一种供临床实验室厂.泛应用的检测单核,巨噬细胞ADcc效应的实验方法.方法:选择CTLL2细 胞作为靶细胞,制备出兔抗CrLL2细胞特异性抗血清.用单梭细胞作为效应细胞,通过cIu2细胞增殖结果检测单核细胞AD. cc效应,并与传统检测方法I-UdR释放试验进行比较.结果:该方法较同位索试验方法更敏感.结论:细胞增殖法检测单核 detectingtheADCCeffectofmono- HUANG 五,MAZhong-Sen,Lh'Vsh~-@aeta1.TheSecondClinicalCollegeo/Nomw,nBethw~eUn i.rcrsofMedical Sciences,Ch,mgch~130041 Abstra~Objective:TocfeaIeamethodofdetectingtheADCCeffectofmonocyte/macmphag einclinicallaboratory.Methods:C3IL2 llswasselectedastargetcellstopreparethespecificmafiserumofrabbitMomoeyt~actaseffec sde— tcellsTheADCCeffectofmonocyte? teL*ted曲sei嘴theproliferationofCILL2tees.ThlsileWnfh0d鹞a,o0mp舡ed血thenad0?almech0dofI-"iR兜leasi培0帮c Results:~emethodof训proliferafiouismosensitivethanthat0fisotopereleasingtest.Condum~on:Usingcellpmllfe rafionmethodtode- teettheADCCeffectofrnonoevteisstableandacum【e. KeywordsM【啪删macADCCCellproliferation 单核,巨噬细胞ADCC效应是重要免疫学功能 之一,在抗感染,抗肿瘤及抗寄生虫等方面均具有重 要作用,与许多疾病的发生和发展密切相关,.传 统方法多用同位素释放法检测单核,巨噬细胞_^,Dcc 效应,困同位素半衰期短不易保存且易污染等缺点, 限制其临床的应用研究,因此本实验建立了细胞增 殖法用于检测单核,巨噬细胞ADCC效应 1材料与方法 1.1细胞株,试剂与动物CllL2细胞由本实验室 长期传代培养;~hIL-2为卫生部长春生物制品所产 品;酶标羊抗兔kG为北京军科院产品;I-UDR为 北京原子能研究所产品;CBWR/B兔为本校动物中 心提供单核细胞取自健康人外周血.兔抗CTLI2 细胞抗血清由本室制备. 1.2方法 1.2.1兔抗CqIL2细胞抗血清制备方法参照文 献[6]. 1.2.2免疫兔血清抗体特异性测定将CTLL2细 作者简介:黄瑾男.39岁副教授 胞固定,分3管,浓度为lX1ml,,分别加入免疫 兔血清(工作效价为1:20),正常兔血清对照及空白 对照,最后加酶标羊抗兔I,用含有OPD的磷酸, 柠檬酸缓冲液显色,用酶标仪测0D49~值. 1.2.3效应细胞的制备无菌取人静脉血提取PB— MC,调细胞浓度为1x1ml,取1d倾人直径35 1TIll塑料细胞培养平皿内,37oCCO2孵箱中静置9o min,洗去非贴壁细胞,贴壁细胞为单核细胞,贴壁前 后分别计数PBMC数,差值为单核细胞数. 1.2.4实验分组及结果测定?单核细胞ADCC效 应实验组:内有单核细胞,CTLI2细胞和免疫兔血清, 效,靶细胞数比值为2:1,血清工作效价为1:5oo0. ?单核细胞非特异杀伤对照组:内有单核细胞和 c11I2细胞,效,靶细胞数比值为2:l.?抗血清非 特异毒性对照组:内有免疫兔血清和CILL2细胞血 清工作效价为1:5000,细胞浓度为1.6xlo*?d,. ?C?细胞增殖标准对照组:只有C?细胞,其 浓度分别为0.2×1o*,0.4×1o*,0.8×lo*,l6×lo* ml,.上述各组均加入rhIL-2100u,Il1l,37oCc0,箱 中培养72h,将培养皿内细胞悬液移人试管中离心 吸去部分上清,混匀管内细胞悬液移至40孔酶标反 业 7 厂吻锤忱嘞硼 埋壁生茎塑量整查堂堂屋董型星生堡盛麴照蔓 微量溶血分光光度法测定抗体形成细胞. 之弓,2—5 墓—重(汕头大学医学院微生物学与免疫学教研室,汕头515031) 中国图书分类号11392.33 溶血分光光度测定(QHs)法是常用的抗体形成 细胞功能测定法,它具有灵敏,稳定,客观等优点. OHS全量法在试管内进行,抗体产生细胞,补体和 SRBC(绵羊红细胞)用量各为1.0ml,总体积3.Oml, 用量较大及检测不便是全量QHS法的不足之处. 我室将全量QHs法微量化(各种成分均为01m1), 反应在96孔板内进行,用酶标仪一次大量检 测,收到较好的效果,现报道如下. 1材料与方法 动物用昆明小鼠,每只用0.2mlSRBC(10%)腹 腔免疫,免疫后5d取脾脏制备单个细胞,用含 ca2,M离子的PBS调成一定细胞浓度,每孔O.1 ml加入96孔板,再加0.2%SRBC0.1?ll/孔,补体用 新鲜豚鼠血清(1:20稀释),每孔01m1,实验孔总体 积为0.3ml.同时设细胞阴性对照,补体对照,SR— BC对照及PBS空白对照(调零用).实验及对照均 设4个复孔.置37%温箱1h后,离心(2000r/min, 10耐n),取上清1501,置酶标分析仪(3550-UV型, BIO.PAD)测定其吸光值(A),检测波长415rllli(该酶 标分析仪无413lain滤光片配备). 作者简介:李康生,男,45岁,博士,副教授,硕士生导帅,主要从事神 经内分泌免疫调节研究 可以看出在低效应细胞及低靶细胞数量条件下,细 胞增殖法均较I-UdR释放法敏感,明细胞增殖法 检测M)CC效应更有可行性,因效应细胞数减少可 节约血量,减轻病人抽血时的心理负担,便于临床研 究应用.而靶细胞数目减少可以节省靶细胞扩大培 养所需要的时间和费用,便于随时检测. 因细胞增殖法检测单核/巨噬细胞ADCC效应 不仅与同位素释放法同样准确,稳定,而且避免了同 位素应用过程中许多弊端,具有费用低,敏感性高及 简便易行等优点.是一种适合广泛开展,应用的实验 方法. 4参考文献 1Tea'ddeAA,F~NorcG.Mc~ccyteineditedcy[栅cac?可 r【m.MelaeonmTea,19o/2;(545):303 2O~umiK,/qagaoJ,Yua豫Ha1.~iboa. vdnd?lcellmediatedc3,一 totoxic[t7饥hu?L岍eervicccellliner【le_180wtthhu?l叩 2结果 每次用SRBC免疫5d小鼠3只,制备单个脾细 胞,用微量QHS法测定小鼠脾细胞对SRBC初次抗 体产生情况.3次重复试验结果表明,微量法在4.0 ×l,6.25×lO'个脾细胞数量之间均有A值梯度 变化,其中细胞数量在4.0×l,Q.5×l之问时, 线性关系良好(细胞数量在40,20,1.0,05×1O6 时相应的A值分别为:实验1:0768,0.582,0.322, O.164;实验2:0.898,0.602,0.368,0.238;实验3: 0.820,0.5(B,0.308,0.170;复孔差值均小于10%. 补体对照A值小于O.082,SRBC对照A值小于 0.038). 3讨论 微量QHS法具有全量法敏感,稳定,客观等优 点,同时节省了实验材料(仅为全量法的1/10量) 微量法在微孔板内进行,用酶标分析仪可在1min 内读完整块板并打印出结果.我室测定结果表明, 微量QHs法是一种简便易行的细胞抗体产生能力 的测定方法. [收稿1998-01—20修回1998-05.03] (编辑徐杰) n舯lC咖erleft,1992;62c2):179 3Vlnw,,~VK,ShanmPKineft?theun?duringthe ofheBadcm~edoieinfectionaI】expenmerttnlstudy1讥RSoe TmpMedHys,1989;83(3):349 4nKC.GonlkB.Kmnm~lP.N~amalkiHercytotoxicityandantibody depe~entcelleytotoxieitytodnheq~esvLrLI!Ilnfdtargetcellsin ~rafinepregnancy.AmJtteowdImnmnolMicrobiol,1988;17t2):53 5MunnDH.CheungNK.Anlib~lyindependentphagocylosisofturr~ ceilsbyh?一moe~oevtederived,memvha~sc'alturedinrecin帅l mac?col,anstimulatingilia.or.CancerImmunotIrarntmother,1995: 4】(1):46 6扬景山主编.医学细胞化学与细胞生物技术.北京:北京医科大学 中国协和医科大学联合出版社.19qO:75 7黄瑾,安继红,薛晓梅MTr比色检测细胞增殖方法的改良及实 验影响因素观察.白求恩医科大学,1972:18(4):395 8强金山,李倍义,刘进AI)CC活性测定见:龚守良主编实用 基础医学实验技术长春:吉林科学技术出版杜,1990:196 [收稿1997-03—14三次修回1998-10-30] (编辑张慧)
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