针灸-足三里--关元-穴对阳虚大鼠免疫功能影响的比较研究

针灸-足三里--关元-穴对阳虚大鼠免疫功能影响的比较研究 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 针灸-足三里--关元-穴对阳虚大鼠免疫功能影响的比较研究 针灸"足三里""关元"穴对阳虚大鼠免疫功能影响的比较研究 (湖北中医学院针灸骨伤系,武汉430061) 采用针刺、艾灸、针加灸不同的治疗方法,选用"足三里 摘 要 "、"关元"两个强壮穴位,选择介导机体免疫的T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞为指标,以实验性"阳虚"大鼠为受试对象,对不同针灸疗法、不同穴位进行比较研究。结果表明:针灸可调节机体低下的免疫功能,且针加灸的作用优于单纯的针或灸的治疗;"足三里"穴的作用优于"关元"穴。 主题词 阳虚/针灸疗法 阳虚/免疫学 免疫系统/针灸效应 穴,足三里 穴,关元 本项研究从"证"这一中医整体思维出发,选择具有"免疫监视"性的免疫指标(T淋巴细胞亚群、体外抗体形成细胞)作为观察指标,进行针刺、艾灸、针加灸不同治疗方法及"足三里""关元"两个强壮穴位的比较研究。现报道如下。 1 材料和方法 1.1 实验动物,Wister大鼠80只,6,7周龄,200,250 g,雌雄兼用。同济医科大学动物部提供。 1.2 主要药品、试剂及工作液,醋酸氢化泼尼松悬液(AHP):原液125 mg/5 ml,(江苏制药厂产品);APAAP法免疫组化试剂盒(T-Subset-Rit)、淋巴细胞分层液(Ficoll-Urographin)(北京邦定泰克生物技术有限公司提供);5%和15%新鲜绵羊红血球(SEBC)(同济医大免疫学教研室提供);豚鼠新鲜血清-补体、1%肝素、pH 7.2 Hanks液、磷酸盐缓冲液等自行配制。 1.3 主要仪器设备,Olympus生物显微镜,国营华东电子管厂产酶标仪,北京产水平离心机,Sony恒温培养箱,低温电冰箱等。 1.4 实验方法 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 1.4.1 "阳虚"大鼠动物模型的建立^[1] Wistar大鼠每日每鼠大腿肌肉注射AHP 3 mg/100 g体重,连续5天。大鼠出现拱背、蜷曲、肢尾冷、挤卧在一起、神疲,反应迟钝、被毛疏松、失去光泽、消瘦、少食等腰膝酸软(游泳存活时间缩短)畏寒肢冷、精神不振、脱毛虚损状。根据中医阳虚证辨证参考标准^[2], 类似"阳虚"状态。 1.4.2 分组 未造模前从80只大鼠中,随机抽取10只作为正常生理组(A组)。余70只造模成功后,随机分为7个组,每组10只。分别为:模型对照组(B组),针刺"关元"组(C组)、艾灸"关元"组(D组)、针刺"足三里"组(E组)、艾灸"足三里"组(F组)、针灸"关元"组(G组)、针灸"足三里"组(H组)。 1.4.3 观察指标及检测方法 T淋巴细胞亚群:APAAP法即碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联免疫酶染色法^[3]。此法目前已广泛应用于淋巴细胞分化抗原的研究。其特点是将第一抗体--小鼠抗大鼠T亚群单克隆抗体与待测抗原结合,以第二抗体--羊抗鼠IgG二抗起桥抗体作用,即其中一个Fab段连接第一抗体,另一个Fab段连接APAAP复合物,再通过复合物中的碱性磷酸酶催化其底物显色来显示抗原的存在。其法的关键是外周血单个核细胞(PBMC)的分离:采血前大鼠空腹12 h后摘眼球采血。取肝素0.2 ml抗凝血2 ml,用PBS稀释3倍,加入到含有3 ml淋巴细胞分离液的试管上层,血液沿管壁缓缓加入,使两液间保持清晰界面。离心(2000 r/min)15 min。吸取血浆和分离液之间的单个核细胞层,加5倍PBS混匀,离心(1000 r/min)5 min,去掉上清沉淀即为单个核细胞。体外抗体形成细胞,,[3]:QHS法即定量溶血分光光度测定法。此法是根据溶血空斑试验的原理衍化而来,可用以测定由一定数量的B细胞产生和分泌的抗体裂解红细胞后释放的血红蛋白(以OD值表示),以反应机体体液免疫功能。其法的关键是免疫大鼠及脾细胞悬液的制备:用5%SRBC 2 ml注射大鼠腹腔,4天后拉脱大鼠颈椎处死,取出脾脏放在已加入8 ml左右Hanks液的平皿中,用100目的不锈网研磨后,经尼龙布过滤后放入试管中,离心(1000 r/min)10 min洗2次。将沉淀的脾细胞重悬于Hanks液中细胞计数后配成1×10,7 /ml细胞浓度。 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 1.4.4 治疗方法 参照华兴邦等的动物腧穴标准定位法^[4],选择"足三里"穴(左右交替使用)和"关元"穴。C、E二组采用28号1.5寸毫针常规进针,进针后平补平泻,每5 min行针1次,留针15 min;D、F二组采用自制的直径0.8 cm,长5 cm艾灸于穴位上施温和灸,灸15 min;G、H二组针刺同时艾灸(操作同前),持续15 min。含有艾灸的治疗组在穴处剪净毛,治疗时以大鼠相对安静为度。治疗于每日8?30,11?30、14?30,16?30进行,每日行1次,共14次为一个疗程。 1.4.5 实验数据的统计与处理 所有计量资料结果用均数?标准差(x?s)表示,统计学用t、F、q检验。 2 实验结果 2.1 造模前后大鼠免疫功能比较见表1。 从表1中实验数据显示,根据成组资料均数比较t检验求得t^CD3(10)=9.92,t^{,CD4( 10)}=8.73,t^CD8(10)=7.61,t^{0. 01}(10)=3.17,P<0.01,造模后大鼠免疫功能降低。说明了免疫 证明了造模成功。 功能低下是阳虚证的机制之一, 2.2 治疗后各组大鼠免疫功能的变化比较 见表2。 表2实验数据显示:各治疗组与模型组比较CD³、CD⁴、CD⁸、QHS水平增高,经t检验其差异有显著或非常显著性意义(P<0.05,P<0.01)。说明针灸治疗能调节低下的免疫功能。经F分析后:F^CD3=250.65、 F^CD4=211.35、 F^CD8=183.21,以r(组间)=7,r(组内)=72查方差分析F界值表,得P<0.01,说明各治疗组间CD³、CD⁴、CD,8有差别。进一步作q检验后C组与D组、E组与F组、G组与H组各指标间差异无显著性意义(P>0.05);G组、H组与C、D、E、F组分别两两比较,CD³、CD⁴、CD⁸间差异有非常显著性意义(P<0.01)。说明针刺与艾灸两种治疗方法对免疫功能的影响不如针加灸的作用。 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 2.3 治疗后含"足三里"穴与含"关元"穴治疗组免疫功能的变化情况 见表3。 从表3实验数据显示:含"足三里"穴组与含"关元"穴组比较,根据成对资料均数的t检验:t^CD3=2.167 t^CD4=2.205 t^CD8=2.063而查t界值表 t^0.05(29)=2.045,t^0.01(29)=2.462。故P<0.05,说明"足三里"穴对提高免疫功能的影响优于"关元"穴。 3 讨论 祖国医学认为阳虚是阳气偏衰、正气不足、阴阳失调,机体呈现机能衰退、代谢活动减弱、热量不足的病理状态。许多研究资料表明虚证与机体免疫功能低下有关。,在古代运用针灸治疗时,由于学术发展、师承、地区、特定环境、疗效等因素的影响形成了重针派、重灸派等诸流派,如东晋?葛洪、唐?王焘、南宋?窦材等认为"急症用灸""灸以扶阳",主张"唯取灸法""灼艾第一"。而元?窦汉卿、唐?甄权、宋?许希偏重用针,认为"拯救之法,妙用者针""必欲治病,莫如用针"。其实针刺和艾灸都属于外治范畴,二者虽然所用器材和操作方法不同,但都是通过腧穴作用于经络、脏腑,"通其经脉,调其血气",鼓舞机体正气,使阴阳调和,阴平阳秘,达到治疗的目的。长期以来,针和灸在治疗上常结合应用,本项实验结果亦表明针、灸、针加灸三种治疗方法均可调节机体的免疫功能,而针加灸的作用更佳。,"足三里""关元"二穴都是进行针灸治疗的常用要穴,本项实验结果表明,"足三里"穴对提高机体免疫功能方面明显优于"关元"穴。在本实验中,选用的是经注射AHP后的"阳虚"大鼠作为受试对象。现代医学认为AHP影响到了外周的二级免疫器官--脾脏,而脾脏是各种免疫细胞居住、增殖并进行免疫应答及产生免疫效应物质的重要基地。祖国医学认为"阳虚"的病变机理一般多以脾肾阳虚为主。因此,广而言之,对于"阳虚"的认识,祖国医学与现代医学在某方面有一致的见地。足三里为足阳明胃经之合穴,阳明经乃"两阳合照、阳气最盛"之经,"经能统穴"而"合治内腑",胃与脾互为表里,脾为后天之本,肾为先天之本,先天与后 更多专业、稀缺文档请访问——搜索此文档，访问上传用户主页～ 天又互为依赖与濡养。机体的虚衰,则脾、胃、肾的功能亦衰退。现代医学的临床与实践已证明针刺足三里穴能调整胃液分泌,增加正常人胃酸的排出量,对胃蠕动有明显的兴奋作用。所谓"三里有白术之强,桂附之热,参茸之功,硝黄之功",说明足三里有健运脾阳、培土化元、温中散寒之功,从而达到防病保健,提高机体的免疫功能。"关元"穴属任脉,为十二募穴之一,"任主胞胎"。从古代文献及现代临床与实践上看,"关元"穴多用于治疗泌尿、生殖、妇科疾患,其功效表现为调和气血和补肾固本。因此,根据中医基本理论,"阳虚"的病理机制,按"足三里""关元"各自的功能特点,本实验结果证明"足三里"穴提高机体免疫功能的效果优于"关元"穴。然其作用机理有待于进一步探讨。 4 参考文献 1 张伟荣,等.中医实验病理学.上海科学普及出版社,1995:55 2 沈自尹.中医虚证辨证参考标准.全国中西医结合虚证与老年病防治学术会议,1982 3 毕爱华,等.医学免疫学.北京:人民军医出版社,1995:318 4 华兴邦,等.大鼠穴位图谱的研制.实验动物与动物实验,1991;(1):1 (收稿日期:1999-10-27,齐淑兰发稿)