甘油对户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验的影响

甘油对户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验的影响 甘油对户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验 的影响 中华临床免疫和变态反应杂志 CHINESEJ0URNAL0FALLERGY&CUNICALIMMUN0L0GY 甘油对户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验的影响? 孙劲旅,任华丽,卢朝辉 (中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院变态反应科,北京100730) ? 基础研究? 摘要:目的探讨甘油对户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验的影响.方法按1:10(W/V)比例制备户尘螨 过敏原提取液原液.户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验:取5,7周龄BALB/c小鼠35只,分成5组,每组7只. 在每组小鼠腹腔内分别注射0.5rnl不同液体,具体如下:A组含0.4%苯酚的户尘螨过敏原提取液原液(3rn1)+甘 油(3rn1);B组含户尘螨过敏原提取液原液(3rn1)+生理盐水(3rn1);C组含甘油(3rn1)+生理盐水(3rn1);D 组含0.4%苯酚的生理盐水(6m1);E组含生理盐水(6m1).结果A组和C组内所有小鼠均在注射后10分钟左 右出现活动减少,竖尾,15,18分钟全身躁动,抖动,打滚,20,25分钟小鼠死亡.B,D和E组小鼠腹腔注射后 活动正常,观察7天均存活.A组和C组死亡的小鼠立即进行病理解剖,结果显示腹腔内大量腹水,肠管水肿;肺 组织高度淤血,肺泡壁增厚增宽,肺泡壁及肺间质毛细血管高度扩张,肺间质可见多量淋巴细胞浸润.小肠壁疏 松,水肿.黏膜上皮变性,坏死,脱落.肝,脾,肾组织未见特殊改变.B,D和E组小鼠的肺,肝,脾,肾组织未见 特殊改变.结论小鼠户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验应该使用不含有50%甘油的户尘螨过敏原点刺液原液. 关键词:甘油;急性毒性实验;户尘螨;过敏原浸液 中图分类号:R593.1文献标识码:A文章编号:1673.8705(2o08)01-0011-03 InfluenceGlycerinonMiceAcuteToxicityTestofDermatophagoides PterronyssinusSkinPrickTestSolution? SUNJin—ln.RENHua-li.LUZhao—hui (DepartmentofAllergy,PekingUnionMedicalCollegeHospital,ChineseAcademyofMe dicalSciencesand PekingUnionMedicalCollege,Beijing100730,China) ObjectiveToidentifypotentialinfluenceofglycerinonmouseacutetoxicitytestofDermatophagoides Der.pterronyssinusskinpricktest(SPT)solution.MethodsStockextractofDer.pterronyssinusSPT solutionwaspreparedintheratioof1:10(W/V)withextractsolutionwithoutpheno1.Stockextractwas sterilizedwith0.4umfilters.ThirtyfiveBALB/cmiceweredividedinto5groupswithabdominalcavity injectionof0.5m1.GroupA:stockextractwith0.4%phenol(3m1)+glycerin(3m1);groupB:stock extract(3m1)+0.9%sodiumchlorideinjection(NS)(3m1);groupC:glycerin(3m1)+NS(3m1); groupD:NSwith0.4%phenol(6m1);groupE:NS(6m1).Autopsywasdoneforeachgroup.Results AllthemiceinGroupAandCshowndecreasedactivitiesandtheirtailscockedupinabout10minutes afterinjection.Then,theydithered,androlledabout.AllmiceingroupAandCdiedwithin25 minutes.Autopsywasdoneimmediately,gutedemaandascitescouldbefound.Pulmonarycongestionwas showncomplicatedwiththickeningofalveolarwall,congestionofcapillaryandlymphocytesinfiltrationin ?基金项目:国家自然科学基金(30671943)和国家863(2003AA2Z3502);第 一,二作者对本文贡献相同;{首都医科大学宣武医院 风湿变态科.北京100053:{{中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院病理 科,北京100730;#通信作者电子邮件:sunjl5C~ahoo.com VoI2No.1ll 中华临床免疫和变态反应杂志 pulmonaryinterstitialtissue.Intestinalwallshownedema,mucosaepitheliadegeneration,necrosisand excoriation.Noabnormalchangewasshowninliver,spleenandkidney.AllmiceinGroupB,DandE shownnormalactivitiesandthebiopsywasdoneafteroneweek.Noabnormalphenomenawasseenin lung,liver,spleenandkidney.ConclussionStockextractofDer.pterronyssinuswithoutglycerinshould beusedinmiceacutetoxicitytestofDer.pterronyssinusSPTsolution. Keywords:glycerin;acutetoxicitytest;Dermatophagoidespterronyssinus;allergenextract ChinJAllergyClinImmunol,2008,2(1):11—13 过敏性疾病的发病率目前在全球范围内呈增高 趋势,皮肤点刺实验是诊断过敏性疾病的重要方 式.点刺实验属于体内实验,所用的过敏原点刺液 在进行临床应用前需经过急性毒性实验证明其安全 性.户尘螨(Dermatophagoidespterronyssinus)过敏 原是最常见的过敏原之一,本研究主要分析影响户 尘螨过敏原点刺液急性毒性实验的因素. 材料和方法 实验动物及主要试剂 普通级BALB/c小鼠35只,5,7周龄,雄性, 体重17,22kg,由中国医学科学院实验动物研究 所提供,合格证号:SCXK京2004—0001.户尘螨 . 过敏原提取液原液按1:10(W/V)比例制备;甘 油:北京第二制药厂;0.4%苯酚:北京化学试剂 公司. 实验方法 将实验小鼠分为过敏原点刺液全部成分组(A 组),仅含过敏原点刺液原液组(B组),仅含甘油组 (C组),仅含苯酚组(D组)及生理盐水空白对照 组(E组),分别进行急性毒性实验.具体如下: ,每组7只.在每 将35只实验小鼠随机分成5组 组小鼠腹腔内注射不同液体,A组:含0.4%苯酚 的户尘螨过敏原提取液原液(3m1)+甘油(3m1); :户尘螨过敏原提取液原液(3m1)+生理盐 B组 水(3m1);C组:甘油(3m1)+生理盐水(3m1); D组:含0.4%苯酚的生理盐水(6m1);E组:生 理盐水(6m1).上述各组均喂饲料,自由饮 水,死亡的小鼠立即送病理科进行病理解剖,余小 鼠观察7天后处死送病理科进行病理解剖. 病理制片 对死亡小鼠行大体解剖,取肝,肺,肾,脾 l2March2008 脏,用10%甲醛固定,以最大切面取材,常规石蜡 包埋切片,HE染色,普通光学显微镜观察. 结果 A组和C组内所有小鼠均在注射后10分钟左 右出现活动减少,竖尾,15,18分钟全身躁动,抖 动,打滚,20,25分钟小鼠死亡.B,D和E组小 鼠腹腔注射后活动正常,观察7天均存活.A组和 C组死亡的小鼠立即送病理科进行病理解剖,结果 显示腹腔内大量腹水,肠管水肿,与B,D和E组 相比,A组和C组死亡的小鼠肺组织高度淤血,肺 泡壁增厚增宽,肺泡壁及肺问质毛细血管高度扩 张,肺问质可见多量淋巴细胞浸润(图1,2);A 组和C组小肠壁疏松,水肿,黏膜上皮变性,坏 死,脱落(图3,4).各组肝,脾,肾组织未见特 殊改变 讨论 过敏原浸液fallergenextract)是由可以使人体 发生过敏反应的材料(即过敏原原料)制备而成的 生物制剂,临床用于速发型变态过敏反应疾病的特 异性诊断和治疗?],根据用途不同可制备为过敏原 点刺液,过敏原皮试液,脱敏制剂.需要长期保存 的过敏原浸液及过敏原点刺液可以添加50%的甘 油.以起到稳定效价的作用.可使过敏原浸液中的 ,3年不变性.由于甘油刺激性大, 蛋白质保持2 用于皮内实验易出现假阳性,用于脱敏治疗可加重 注射疼痛,故一般不用于皮内试验和脱敏治疗. 无菌和无毒是一种合格的过敏原点刺液必备的 条件.检测一种过敏原点刺液是否符合上述规定可 应用急性毒性实验.本研究根据常规方法对制备的 甘油对户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验的影响 户尘螨过敏原点刺液进行急性毒性实验时,发现小 鼠全部死亡,遂对影响过敏原点刺液急性毒性实验 的因素进行了分析.根据过敏原点刺液的组成成分 为过敏原点刺液原液,50%甘油,0.4%苯酚.本研 究将实验小鼠分为过敏原点刺液全部成分组,仅含 过敏原点刺液原液,仅含甘油,仅含苯酚及生理盐 水空白对照组.分别进行急性毒性实验.结果显 示,含甘油组小鼠在注射药物后,2025分钟死 亡.病理解剖显示腹腔内大量腹水,肠管水肿.病 理检查显示含甘油组死亡的小鼠肺组织高度淤血, 肺泡壁增厚增宽,肺泡壁及肺间质毛细血管高度扩 张,肺间质可见多量淋巴细胞浸润.小肠壁疏松, 水肿,黏膜上皮变性,坏死,脱落.肝,脾,肾组 织未见特殊改变.其原因可能为甘油在腹腔内造成 高渗环境,引起小肠黏膜变性坏死,肠壁疏松,水 肿和肺循环的衰竭.不含甘油组小鼠腹腔注射后活 动正常,观察7天均存活,小鼠的肺,肝,脾,肾 组织未见特殊改变. 本研究表明.如果使用含50%甘油的户尘螨过 敏原点刺液进行小鼠急性毒性实验,则这些小鼠会 全部死亡,从而产生户尘螨过敏原点刺液不合格的 错误结论.正确的方法应该是使用户尘螨过敏原提 取液原液,在添加甘油保存剂前进行急性毒性实 验.以免得出不正确的结论. (本文图1,4见插图第1页) 参考文献 [1]叶世泰.变态反应学[M].北京:科学出版社,1998: 715.725. [2]乔秉善.变态反应学实验技术[M].第2版.北京:中 国协和医科大学出版社,2002:35.36. (2007.12.25收稿) VoI2No.113 中华临床免疫和变态反应杂志 CHINESEJOURNALOFALLERGY&CLINICALIMMUN0L0GY 甘油对户尘螨过敏原点刺液急性毒性实验的影响 图1 Fig1 肺组织高度淤血,肺泡壁增厚增宽,肺泡 壁及肺间质毛细血管高度扩张,肺间质可 见多量淋巴细胞浸润fHE染色) Pulmonarycongestionwasseen,togetherwith thickeningofalveolarwall,congestionofcapi— llaryandlymphocytesinfiltrationinpulmonary interstitialtissue(HEstain) .??, : , ,??’ }’ ?名. i? .... c 图3 Fig3 ‘ ; 小肠壁疏松,水肿,黏膜上皮变性,坏死, 脱落fHE染色) Intestinalwallshowededema,mucosaepithelia degeneration,necrosisandexcoriation(HEstain) (正文见第11页) 图2正常肺组织,未见明确病变(HE染色) Fig2Noabnormalchangewasseeninnormallung tissue(HEstain) 图4正常小肠组织,未见明确病变(HE染色) Fig4Noabnormalchangewasseeninnormalin— testinaltissue(HEstain) VoI2No1I