【doc】HPLC—DAD法测定阿莫西林舒巴坦匹酯分散片中舒巴坦匹酯含量及有关物质

【doc】HPLC—DAD法测定阿莫西林舒巴坦匹酯分散片中舒巴坦匹酯含量及有关物质 HPLC—DAD法测定阿莫西林舒巴坦匹酯 分散片中舒巴坦匹酯含量及有关物质 HPLC—DAD法测定阿莫西林舒巴坦匹酯分散片中舒巴坦匹酯含量及有关物质 傅小雅(海南省药品检验所,海口市570216) 中图分类号R927.2:R944.4文献标识码A文章编号i001—0408(2008)13i011—02 摘要目的:建立以高效液相色谱一二极管阵列检测法测定阿莫西林舒巴坦匹酯分 散片中舒巴坦匹酯及有关物质含量的方法. 方法:色谱柱为HypersllBDS,流动相为磷酸二氢钾溶液一乙腈(40:60),检测器为二 极管阵列检测器,检测波长为204nm,扫描 范围为300190nm,流速为1.0mL?min一,进样量为10f*L.结果:舒巴坦匹酯检测浓 度的线性范围为119.83,1198.3肛g? mL.(r=0.9999);平均回收率为98.7%(RSD=0.65%);有关物质的含量为1.02%, 1.10%.结论:本方法简便,准确,可用于 该制剂的质量控制. 关键词高效液相色谱一二极管阵列检测法;阿莫西林舒巴坦匹酯分散片;含量测定; 有关物质 DeterminationofSulbactamPivoxilandtheRelatedSubstancesinAmoxicillinSulbactamPi voxilDis. persibleTabletsbyHPLC—DAD FUXiao—ya(HainanInstituteforDrugControl,Haikou570216,China) ABSTRACToBJECTIVE:ToestablishanHPLC— DADmethodforthedeterminationofsulbactampivoxilandtherelated substnacesinamoxicillinsulbactampivoxildispersibletablets.METHODS:Thechromato graphiccolumnwasHypersilBDS withmobilephaseconsistedofpotassiumdihydrogenphosphatesolution:acetonitrile(40:6 0)ataflowrateof1.0mL?min-1. Thedetectorwasdiodearraydetector(DAD)atadetectionwavelengthof204nmandspectru mrangeof300,190nm.The injectionvolumewas10,uL.RESULTS:Thelinearrangeofsulbactampivoxilwas119.83,1198.3g?mL(r=0.9999), withanaveragerecoveryrateof98.7%(RSD=0.65%).Thecontentoftherelatedsubstancesw as1.02%,1.10%.CoN— CLUSIoN:Themethodissimpleandaccurate,anditcanbeusedforthequailtycontrolofamox icillinsulbactampivoxil dispersibletablets. KEYWoRDSHPLCDAD;Amoxicillinsulbactampivoxildispersibletablets;Contentdeter mination;Relatedsubstances 阿莫西林舒巴坦匹酯是由阿莫西林和舒巴坦匹酯等摩尔 共价结合形成】.阿莫西林为广谱的B内酰胺类青霉素,舒巴 坦匹酯在体内被水解为舒巴坦后发挥作用,可使阿莫西林免受 酶的水解灭活,有效杀灭细菌.本研究采用高效液相色谱(HPLC) 法对该制剂中的舒巴坦匹酯的含量和有关物质进行检测,使用 的检测器为光电二极管阵列检测器(DAD),此种检测器不必停 流,可跟随色谱峰扫描,从而观察色谱柱流出组分的每个瞬问 的动态光谱吸收图,可用于色谱峰的鉴定及纯度检查.DAD的 扫描速度快,并可绘制三维色谱,其在寻找药物代谢物等微量 组分,鉴定具有紫外吸收性化合物等方面尤其有用. 1仪器与试药 LC一2010CHT高效液相色谱仪及SPDM20A光电二 极管阵列检测器(日本岛津公司). 阿莫西林对照品(中国药品生物制品检定所,批号: 130409—200609,含量:86.6%);舒巴坦匹酯对照品(批号: 0706001,含量:99.6%(以舒巴坦计为66.87%)),阿莫西林舒 …+一一一+ 高速离心微滤法分离纳米粒与游离药物的不足之处在于 经过高速离心以及微孑L滤膜过滤后,仍然有很小一部分的纳米 粒存在于滤液里,从而使得测定的游离卡马西平浓度偏高,测 定包封率稍低于实际值. 参考文献 [1】洪钢,章江生,王琳辉.抗癫痫药物研究进展[J】.中国 临床药理学与治疗学,2005,10(11):1201. - 2主管药师.研究方向:抗生素检验.电话:0898—66832937.E mail:xiaoya0898@126.com 中国药房2008年第l9卷第l3期 巴坦匹酯分散片(批号:060701,060702,060703),舒巴坦匹酯 原料(批号:060601),辅料(批号:060701)均由海口市制药厂有 限公司提供;乙腈为色谱纯,磷酸二氢钾,磷酸均为分析纯,水 为二次蒸馏水. 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:HypersilBDS(250Him×4.6mi31,5m);流动 相:磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾3.06g,加水900mL溶解 后,用磷酸调节pH至3.0,再加水稀释至1000mL,混匀)一 乙腈(40:60);检测器:DAD;检测波长:204nm;扫描范围: 300--190nm;流速:1.0mL?min;进样量:10L.结果表 明,理论塔板数按舒巴坦匹酯峰计不低于1000,舒巴坦匹酯峰 与相邻杂质峰的分离度均大于1.5.色谱见图1. 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液:精密称取舒巴坦匹酯对照品适量(约相 当于舒巴坦50mg),置于50mL容量瓶中,加流动相溶解并稀 一…一…一一一…一…一… [2】金振波,孙文辉.癫痫病药物治疗新进展[J】.中国新药 杂志,2005,14(5):544. [3】侯冬枝,谢长生,朱长虹.固体脂质纳米粒的制备和载体 结构的研究进展及其应用[J】.中国医院药学杂志,2004, 24(1):43. [4】李新中,刘韶,雷鹏,等.薄膜一超声法制备黄芩苷 固体脂质纳米粒的工艺研究[J】.中国医学,2004,12 (5):21. (收稿日期:2007—06-26修回日期:2007—09-04) ChinaPharmacy2008Vo1.19No.13?1011 uV 2Oo00 1OOo0 O mAU 2o0O 1000 O 3 J uV 1000000 500000 O 0.05.010.OITIin A 4 .1 uV 5000000 2000000 O 1 005.0100rain B Z 图1高效液相色谱 ;B.舒巴坦匹酯对照品;C.样品;D.阿莫西林对照品;1. A.空白样品 舒巴坦匹酯;2.阿莫西林;3.辅料;4.阿莫西林+辅料 Fig1HPLC A.blanksample;B.sulbactampivoxilcontrol;C.testsample;D. amoxicillincontrol;1.sulbactampivoxil;2.amoxicillin;3.recipi— ent;4.amoxicillin+excipient 释制成浓度为1mg?mL的溶液,即得;精密称取阿莫西林 对照品适量,置于50mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释制成 浓度为0.25mg?mL的溶液,即得. 2.2.2样品溶液:取样品10片,研细,精密称取适量(约相当 于舒巴坦50mg),置于50mL容量瓶中,加流动相溶解并稀释 制成浓度为1mg?mL的溶液,即得. 2.2.3空白样品溶液:取按处方比例及制备工艺制备的不含 主药的空白辅料适量,按"2.2.2"项下方法制成溶液,即得. 2.3专属性试验 将样品进行60?水浴加热,酸,碱,氧化处理后,按"2.1" 项下色谱条件进样测定,记录色谱.结果表明,上述破坏性试验 均产生降解产物,在该色谱条件下,主成分与降解产物均有良 好的分离. 2.4线性关系考察 精密称取舒巴坦匹酯对照品149.79rng,置于50mL容量 瓶中,加流动相稀释至刻度,精密量取上述溶液1.0,3.0,5.0, 7.0,10.0mL,置于25mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,按 "2.1"项下色谱条件进样测定.以浓度(C)为横坐标,峰面积 (A)为纵坐标进行线性回归,得回归方程A=7585.117C- 3314.64(r=0.9999,=5).结果,舒巴坦匹酯检测浓度的 线性范围为119.83,1198.3/lg?mL,. 2.5精密度试验 取同一批号样品(批号:060701)适量,共6份,按"2.8"项下 方法进行测定.结果,RSD=0.26%,表明该方法精密度较好. 2.6稳定性试验 取"2.2.2"项下的样品溶液分别于0,0.5,1,2,3,4h进样 测定,其RSD=0.67%,表明样品溶液在4h内稳定. 2.7回收率试验 取舒巴坦匹酯对照品及辅料适量,置于50mL容量瓶中, 按"2.8"项下方法制成浓度分别为0.32,0.40,0.48mg?mL 的溶液,按"2.1"项下色谱条件进样测定,并计算平均回收率, 结果见表1. 2.8样品含量及有关物质测定 取样品10片,研细,精密称取适量,加流动相溶解并稀释 1012?ChinaPharmacy2008Vo1.19No.13 表1回收率试验结果(n=9】 Tab1Resultsofrecoverytest(n=9】 制成含舒巴坦0.4mg?mL的溶液,精密量取10L进样测 定;另精密称取样品粉末适量,加流动相溶解并稀释制成含舒 巴坦1mg?mL的溶液,精密量取该溶液5mL,置于100 mL容量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为自身对照溶液.再取 自身对照溶液及样品溶液各10mL进样,记录色谱至主成分 峰保留时间的2倍,样品溶液的色谱如有杂质峰,量取各杂质 峰面积之和,不得大于自身对照溶液主峰面积的1.6倍.样品 含量及有关物质测定结果见表2. 表2样品含量及有关物质测定结果 Tab2Determinationresultsofthecontentofsamplesand therelatedsubstances 3讨论 3.1流动相的选择 阿莫西林舒巴坦匹酯片已收载于国家食品药品监督 局WS一517(X一440)一2001,参照上述标准中舒巴坦匹 酯含量测定的方法进行分散片的研究,流动相为甲醇一0.1% 冰醋酸(60:40),结果无法进行测定.参照注射用舒巴坦钠中 的含量测定的流动相,.1(0.005mol?L氢氧化四丁基铵溶 液(pH5.0)一乙腈(75:25),能有效地将主成分分开,但峰形 不对称.从上述色谱条件来看,采用乙腈作流动相的能有效分 开主成分,因此拟定了本文所采用的流动相. 3.2波长的选择 DAD可跟随色谱峰扫描,从而观察色谱柱流出组分的每 个瞬间的动态光谱吸收图.由"2.3"项下结果表明,因加热破坏 所产生的降解产物峰最多,故以加热破坏为例进行波长的选 择,即在300190nm波长内,杂质最大吸收均在200nm波 长附近,故选择204nm作为有关物质的检测波长. 3.3DAD验证峰纯度 根据加热破坏所产生的色谱行为,杂质1的峰纯度角为 0.999997,纯度阈值为0.988583,舒巴坦匹酯的峰纯度角为 1.000000,纯度阈值为0.999941,峰纯度角比纯度阈值大,表 明这些峰纯;阿莫西林的峰纯度角为0.999279,纯度阈值为 0.999430,峰纯度角比纯度阈值小,表明峰不纯. 参考文献 [11孙华.阿莫西林舒巴坦匹酯片人体药代动力学及相对 [2】 [31 生物利用度研究[J1.中国药房,2003,14(4):225. 国家药典委员会编.国家食品药品监督管理局国家药品 标准新药转正标准第33册[S1.2003:155. 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部)[S1. 2005年版.北京:化学工业出版社,2005:785. (收稿日期:2008—0卜14修回日期:2008—02—13) 中国药房2008年第19卷第13期