牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究

牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究 河南农业大学 硕士学位论文牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究 姓名:陈江凌 申请学位级别:硕士 专业:动物遗传育种与繁殖 指导教师:王新庄 20080601河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺 学位论 牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究 学位 文目 硕士 级别 学生 学科 动物遗传育种与繁 导师 陈江凌 王新庄„ 姓名 专业 殖 姓名 学位论文 否 如需保密，解密时间 年月 日 是否保密 独创性声明 本人呈交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果，除了文中 特别加以标注和致谢的地方外，文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果，也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材 料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献 均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意。研究生签名:陈江凌:夏导师签名:,吲肛日期:,陇年占月咖 日期易埽年石月菇日 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本人完全了解河南农业大学关于保存、使用学位论文的，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存提交论文的印刷本和电子版本，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意河南农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 本人完全了解《河南农业大学知识产权保护办法》的有关规定，在毕业离开河南农业大学后，就在校期间从事的科研工作发表的所有论文，第一署名单位为河南农业大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河南农业大学所有，否则，承担相应的法律责任。 ,,(。——, ～注:保密学位论文在解密后适用于奎雾轵韶 号。(:,,研究生签名:陈江厦导师签名:之吖风学院领导签名:宣长串, 、 』 ? 日期:,,坝绊‖月乏鲡 日期:乙，阵夕月,日 日期:可:癣,月,,日 致谢 谨向为培养我付出无限心血及汗水的导师王新庄教授致以最衷心的感谢。感谢导师王新庄研究员在我三年的求学生涯中对我的关怀和谆谆教诲。他严谨的治学精神、渊博的学识、开阔的思路、对待工作认真负责的态度使我终生受益，是我一生学习的典范。师母张德芳女士在我的学习和生活方面给予了无微不至的关怀和帮助，深表感谢。 ? 感谢赵卫东教授、高腾云教授、康相涛教授、任广志副教授、黄艳群副教授、郑振宇副教授、李春丽副教授、孙桂荣老师等老师在研究生学习、论文开题及试验中所提供的宝贵建议和指导。 感谢高腾云教授在学习工作、论文撰写等方面给予的悉心帮助和指导。感谢河南省肉牛技术研究中心牛辉、肖杰同志在生活和试验过程中所提供的热心帮助。感谢徐照学研究员、安志兴副教授、林峰副教授对论文的细心评阅和提高的宝贵意见。 感谢师姐郑培栋、夏霞在学习和试验期间给予的热心帮助和悉心指导，感谢西北农林科技大学的研究生丁向彬、王轶敏、李义书、冯勋伟、白昌明在实验和生活方面的帮助。感谢河南农业大学牧医工程学院草食家畜研究室的老师和同学们给与我的支持和帮助。 感谢我的家人一直以来给予我的关心和支持。感谢所有关心我的老师、同学、亲人和朋友们～ 陈江凌 ,,,,(, 河南农业大学硕士学位论文 摘 要 本研究利用屠宰牛的卵巢，先用抽吸法收集卵巢表面直径为,，,一,,,卵泡液，然后，用切割法获取卵巢表面直径,,,以下的小腔卵泡卵母细胞。对获得的,、,级小腔卵泡卵母细胞进行体外成熟培养、体外受精培养和受精卵的体外培养的研究。实验结果如下: ,(本研究探讨了牛卵巢保存温度以及育成牛和经产牛卵巢对牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:卵巢保存温度在,,,,,?时， 可用卵母细胞数和成熟的小腔卵泡卵母细胞数均较多;经产牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟效果好于育成牛。 ,(比较不同的激素组合(,,,,,,、,,,,,,,和,,,,,,,,)对牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:对照组,牛小腔卵泡卵母细胞的成熟率最低(,(,,,)，且与第,、,、,相比均差异显著(,,,(,,);第,组卵母细胞的成熟率最高(,,(,,,,)，但与第,、,两组牛小腔卵泡卵母细胞的成熟率间差异不显著(,,,(,,)。 ,(在成熟培养液中分别添加,,、,,、,,,和,,,的,,,。结果表明:在成熟培养液中添加适量的,,,显著促进牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟(,(，,(,,)，其中添加,,,(,,,)的,,,组的牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟率最高，添加,,,(,,,)的,,,组次之，但两者间差异不显著(,,,(,,)。 ,(添加,(,,、,(,,,,,,,,的,,(巯基乙醇均能促进牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟 (,,,(,,)，但添加,(,,,,,,,,,的,,(巯基乙醇组显著抑制牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟率 (,,,(,,)，以,(,,,,,,,,,的,(巯基乙醇组牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟率最高。 ,(比较不同的直径的卵泡液对牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:与对照组,相比，第,组在培养液中添加直径?, ,,,,的卵泡卵泡液，卵母细胞的成熟率降低，但二者差异不显著(,,,(,,);第,组在培养液中添加直径,,,,,的卵泡卵泡液显著促进牛小腔卵泡卵母细胞的成熟(,,,(,,)，卵母细胞的成熟率最高。 ,(比较在体外成熟培养液中分别添加不同浓度的,，,和(或)胰岛素对牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:在体外成熟培养液中同时添加,，,和胰岛素的，(,组牛小腔卵泡卵母细胞的体外成熟率最高(,,(,,,)，而单独添加胰岛素的，,,组牛小腔卵泡卵母细胞的体外成熟率最低(,,(,,,);，(,组与，,,组间牛小腔卵泡卵母细胞的成熟率差异显著(,,,(,,)，但与对照组，(,以及其它各组间成熟率均差异不显著(,,,(,,)。 ,(比较了上浮法和,,,;,,,密度梯度离心法两种精子离心对卵泡卵母细胞体外受精的影响，结果表明:,,,;,,,密度梯度离心法预处理的精子卵泡卵母细胞的卵裂率(,,(,,,)高于上浮法(,,(,,,)，但两者间没有显著的差异(,,,(,,)。 ,(与对照组相比，和输卵管上皮细胞单层共培养系统的卵泡卵母细胞的卵裂率虽然高一些，但二者间卵裂率没有显著的差异(,,,(,,)。 关键词:牛;小腔卵泡卵母细胞;体外培养;体外成熟;体外受精 牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究 ,(文献综述卵母细胞体外成熟和体外受精的研究进展 牛卵巢卵泡卵母细胞体外培养成熟技术(，, ,,,,, ,,,,,,,,,,，?,)是随着上世纪动物胚胎体外生产(，, ,,,,, ,,,,,;,,,,，?,)技术的产生和发展而兴旺起来的，是牛体外受精技术和胚胎工程的基础环节之一。早在二十世纪四十年代，,,,;,,等(,,,,)就从兔卵巢卵泡中分离出卵母细胞，经实验室培养完成减数分裂达到成熟【,】(,,,,,,,等(,,,,)通过研究小鼠、绵羊、牛、猪、猕猴和人卵母细胞的体外成熟发现，卵母细胞离开卵泡环境后的自发核成熟是哺乳动物的一种普遍现象【,,。,,,;,,,等(,,,,,)获得了首例体外成熟牛卵泡卵母细胞经体内受精后出生的后代，卵母细胞的体外成熟和体外受精后的发育潜能才逐步得到认可,,。美国学者,,,;,,,,等(,,,,)成功报道了世界首例体内成 熟的卵母细胞经，,,的犊牛诞生【,,。,,,,,,,,等(,,,,)分离培养牛小腔卵泡卵丘卵母细胞复合体(,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,，,,,)，通过体外成熟(，,,)，体外受精(,,,)获得了后代，说明牛小腔卵泡卵母细胞具有体外发育的能力【,】。,,,,;,,,, ,,,,,,等(,,,,)用,(,”,?,(,,,的牛卵泡卵母细胞在无血清的培养液中体外培养获得受精能力〔,,。卢晟盛等(,,,,)比较研究了不同培养时间对黄牛小腔卵泡卵母细胞的影响，研究表明,,,和,,,都无法使大部分黄牛小腔卵泡卵母细胞达到成剿不。目前，卵母细胞的体外成熟和体外受精技术，己被广泛应用于科学研究、畜牧生产和医学生殖工程中，有着广阔的应用前景。一方面，现有的牛卵母细胞体外成熟技术体系将被作为用为胚胎规模化生产的一部分，广泛应用于畜牧业生产中，特别是在奶牛与肉牛的扩繁与母畜资源利用方面发挥巨大作用;另一方面，牛卵母细胞体外成熟技术作为高新胚胎生物技术研究的基础之一，其发展必将对配子发生、生殖调控、体外受精的研究起到促进的作用。,(,卵母细胞体外成熟 卵母细胞体外成熟培养技术与体外受精、受精卵体外培养、胚胎冷冻技术结合起来，在优良母畜种质资源保存与珍惜物种保护上具有重大意义。在牛一生中，每个卵巢周期变化都有大量不同发育阶段的卵泡卵母细胞。早期学者们对大腔卵泡卵母细胞的体外成熟、受精等作了大量的研究，取得了显著成效，体外成熟率、受精率和,,,,细胞发育率均在,,,以上，桑椹胚和囊胚分别达到了,,,、,,,的发育率。近年来，小腔卵泡卵母细胞的发育和成熟越来越受到人们的关注。小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究，不仅可以充分挖掘母畜的繁殖潜能，为胚胎移植、性别鉴定和核移植等生物工程提供大量优质的卵母细胞，而且可以缩短动物遗传育种与繁殖的世代间隔，这可以给种畜特别是奶牛带来重要的经济效益。,(,(,卵泡的生长和发育及其和卵母细胞的关系 卵泡发育(,,,,,;,, ,,,,欤澹穑恚澹睿簦?侵嘎雅萦稍 悸雅莘? 跫堵雅荨?渭堵雅荨? 堵雅莺统墒炻雅莸纳 砉 獭,跫堵雅荨?渭堵雅荨? 堵雅莸墓餐 氐闶巧 し? 欤 饕 硐衷谙赴 至蜒杆伲 寤 飨栽龃螅 页中 奔涑ぁ,ǔ, 馊 嗦雅莩莆 ぢ雅荨?, 河南农业大学硕士学位论文哺乳动物在一个情期，只有一定数量的卵泡发育到成熟卵泡并排卵，排卵多少与动物的种类密切有关。牛、马、人一般一次排卵一个，而猪属于多胎动物，一次性可以排卵,,”?,,个。牛排卵卵泡的直径约为,,,,,，接近排卵时，卵丘细胞脱离卵泡壁，与卵母细胞一起漂浮于卵泡液中。排卵时，以卵丘卵母细胞复合体(;,,,,,, ,,;,,, ;,,,,,,，,,,)的形式排出。,(,(,(,原始卵泡阶段 原始卵泡又分为静止和启动生长的原始卵泡。它位于卵巢皮质的最外层，密度较高，成簇存在，,〕。原始卵泡是一个初级卵母细胞和包围在其周围一层纺锤体原始颗粒细胞组成，单层原始颗粒细胞把卵母细胞和基膜分开。卵母细胞质膜表面光滑，质膜和颗粒细胞膜之间有桥粒连接。原始卵泡直径约为,,,,,,,,,,，种属间差异不大。性成熟时卵泡数目比出生时减少很多，牛大约有,,,,,,个(,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,，,,,,)〔,,。,(,(,(,初级卵泡阶段 初级卵泡位于卵巢皮质中层，血管稀少的部位。初级卵泡发育伴随着卵母细胞的体积增大，在这一时期卵母细胞和颗粒细胞间的间隙连接形成。间隙连接开放时可以允许分子质量小于,,,,,,的营养成分，如单糖和氨基酸(,,,,,,, ,, ,,，,,,,)〔,,,，在具有通讯能力的细胞之间进行物质交换。信号传递分子(如;,，、;,,,和?,)等也通过间隙连接从卵泡细胞进入卵母细胞。此时期，线粒体主要分布在核周围，为圆形，嵴很少或没有。高尔基复合体散在于线粒体之间，有的与内质网相连。当颗粒细胞变为两层时，开始出现透明带，微绒毛伸向透明带。在颗粒细胞增生的同时，从卵巢基质细胞和前颗粒细胞中分化出卵泡膜细胞，形成卵泡膜(,,,,(,)，包括卵泡内膜(,,,,, ,,,;,)和卵泡外膜(,,,,,, ,,,;,)【,,】。,(,(,(,次级卵泡阶段 次级卵泡又称有腔卵泡。次级卵泡向卵巢皮质内层移动，皮质内层血管丰富，可能为卵泡生长提供营养物质及多种因子嗍。这一时期颗粒细胞经历由简单的立方上皮到分层的或假分层的柱状上皮的转变，并且开始表达,,,和,,受体。卵泡腔出现时，卵母细胞透明带增厚，微绒毛多且长，颗粒细胞突起的末端膨大部分与卵质膜凹陷形成桥粒。牛卵泡腔约在卵泡直径,(,,,(,,,时出现(,,,,,,, ;, ,,，,,,,)【,,,，小腔卵泡卵母细胞已经达到其生长的最大体积，直径为, ,,,,,,,,,。牛的卵泡生长分化因子一,和骨形成蛋白一,,在卵泡从初级向次级的转变过程中起着至关重要的作用。,(,(,(,三级卵泡阶段 三级卵泡阶段卵泡细胞分泌的液体进入卵泡细胞和卵母细胞间隙，形成卵泡腔。随着卵泡腔的增大，卵母细胞被挤到一边，并被一团颗粒细胞包围，形成突出于卵泡腔中的半岛称为卵丘(;,,,,,,)。其余的颗粒细胞则紧贴在卵泡腔周围，形成卵泡壁层的颗粒细胞。至此，卵泡细胞分成两部分，包围在卵母细胞周围的卵泡细胞——卵丘细胞和颗粒细胞。直径,,,的牛卵母细胞透明带内的微绒毛缩短变粗，随着卵泡体积变大，微绒毛逐渐从透明带退化。 , 牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究,(,(,(,格拉夫卵泡阶段 格拉夫卵泡是三级卵泡进一步发育至成熟前的卵泡，属于三级卵泡，包括成熟卵泡。一个完整的成熟卵泡由卵泡外膜、卵泡内膜、基底膜、颗粒细胞层、卵丘卵母细胞复合体、卵泡腔、卵泡液组成。在格拉夫卵泡中，颗粒细胞和卵母细胞形成合胞体，颗粒细胞按空间可以分为四个亚型:壁层颗粒细胞腔、周围颗粒细胞、卵丘颗粒细胞和放射冠颗粒细胞。成熟卵泡(,,,,,, ,,,,,;,,)初级卵母细胞完成第一次成熟分裂，停止于分裂中期，待卵排出及受精后才能完成。卵泡液增多，致使卵泡体积剧增，卵泡移向并突出卵巢表面，形成成熟卵泡。由原始卵泡发育至成熟卵泡需,,,,一,,,。孙青原等(,,,,)认为成熟卵母细胞微绒毛倒伏在卵表面上,,川。,(,(,(,卵泡的生长和卵母细胞的关系 卵泡的生长发育、闭锁与优势卵泡的选择，受垂体促性腺激素的调节与卵巢内各种因素所控制，又与卵母细胞的生长发育密切相关。卵泡细胞的主要作用是给卵母细胞提供营养物质，有的还提供卵母细胞外面的卵膜。最初卵母细胞和卵泡细胞之间的间隙较小，其中有从两者的表面伸出的微绒毛，两者的微绒毛有桥粒和间隙连接相连，卵泡细胞通过间隙连接向卵子输送物质。随着卵泡的发育，两者之间的间隙逐渐增大，在此间隙连接中充满致密的物质，这就是透明带。已知小鼠透明带完全是由卵母细胞分泌物形成的，在其他动物可能由卵泡细胞产生或由卵泡细胞与卵母细胞共同产生。有的动物卵泡细胞伸出一细胞质突起，由于这种突起的缩回，所以留下一个较大的空隙，昆虫和鱼的卵膜孔就是这样形成的。高立云等 (,,,,)研究发现，在整个卵泡发育过程中，卵泡与卵母细胞发育呈完全显著正相关，腔前卵泡时期，卵泡和其卵母细胞直径增 长幅度大体相等，而从有腔卵泡开始，卵泡生长速度远远大于其卵母细胞，透明带与卵母细胞发育呈不显著正相关【,,,。,(,(,卵泡卵母细胞发育成熟的形态学特征 卵泡卵母细胞发育是一个及其复杂的过程，伴随着一系列的生理生化变化和形态学上的结构变化，经过两次停滞阶段。在第一停滞阶段，成年哺乳动物的卵母细胞在卵巢中停滞在第一次减数分裂前期的双线期，也称生发泡(,,,,,,,, ,,,,;,,，,,)期;在第二停滞阶段，生发泡破裂并排出第一极体的第二次减数分裂中期(,，，期)，即成熟期。卵母细胞成熟的形态学变化特征主要包括以下几个方面:,(,(,(,生发泡破裂(,,,,) 生长期的卵母细胞核内核仁增大增多、合成活跃，细胞核膨大，处于减数分裂，偶线期的初级卵细胞核称为生发泡。生发泡是由核膜、灯刷染色体、核仁和核质组成的。核膜可以允许小分子量的蛋白质通过类核孔进入生发泡内。灯刷染色体富含,,,。核仁中含有大量,,,,和蛋白质，它们可以通过核孔进入细胞质，此外，核在核甘酸和辅酶的合成中也起着重要作用。核质含有大量的,,,和蛋白质，以核糖核蛋白颗粒的形式存在。生发泡的消失或破裂是减数分裂恢复的特征之一。生发泡破裂首先核膜弯曲。这些弯曲可能和染色体浓缩 , 河南农业大学硕士学位论文的开始相关。核膜破裂在,,内可以观察到，在兔和老鼠卵母细胞，大概,,核膜完全消失，这似乎和晚期的原核膜的形成有关。卵母细胞体外培养数小时后，成熟期的卵母细胞在外来信号的刺激下恢复减数分裂，在光镜下可见细胞核膜破裂，核仁消失，核内物质与卵质混合，此过程即为生发泡破裂。不同动物卵母细胞发生,,,,的时间并不一致，例如，牛需,,，猪需,,”,?,,,，山羊需,,。,(,(,(,染色体凝集 减数分裂期间，卵母细胞染色体经历中期，、后期，和末期，，排出第一极体后停滞于中期?。双线期染色体扩散，进而显著凝集在核膜内缘，与核膜分解同步进行。此期染色质变为异染色质并包含很致密的颗粒，加剧了染色体凝集。,(,(,(,纺锤体形成 构成纺锤体的主要物质是邮,微管蛋白所组成的微管。纺锤体微管可分为:(,)起始于两极的发散到细胞质的星体微管，(,)起始于两极与染色体着丝粒连接的微管(着丝粒微管)， (,)起始于两极呈反向平行排列或与染色体臂相互作用的微斜,,】。在生发泡破裂和染色体凝集期间，着丝粒与微管及微管组织中心结合。微管自此中心伸出，到达核基质，着丝粒与每对同源染色体的染色单体相连。小鼠卵母细胞在培养,,后出现形态明显的减数分裂纺锤体，,,后十分清晰。与其它许多细胞不同，小鼠卵母细胞纺锤体的两极无中心粒，仅由许多束环状的中心粒物质组成。此物质与形成的纺锤体两极在前期相连，在中期高度磷酸化并凝聚，在末期消失。培养,,,,,后, ，纺锤体显著增大，如桶状【峋。纺锤体两极距离约为,,,,，宽约,,,,,。纺锤体的一极在细胞皮层附近，由线粒体、囊泡和颗粒组成的浓密区围绕纺锤体。在纺锤体锚定处无皮质颗粒，在膜下形成厚的肌动蛋白纤维带。当减数分裂发展到后期，纺锤体旋转,,。，这个运动似乎与微丝有关。值得提出的是，卵母细胞成熟过程在前中期需要,,，在减数分裂，期需,,，这或许反映了合成和装配纺锤体装置需较长时间【,,,。,(,(,(,极体排出 未成熟的卵母细胞，胞核在细胞的中央。在成熟过程中，核逐渐迁到动物极质膜下，且体积变大，此时即为生发泡(,,,,,,,, ,,,,;,,，,,)。一般而言，,,,,代表减数分裂的开始，伴随着减数分裂的进行，卵母细胞在动物极附近排出第一极体。极体排出时，同源染色体开始分离， 此时胞质为不均等分裂，两部分各含有一半染色体，第一极体还拥有线粒体、核糖体、皮质颗粒等许多细胞器。极体排出后卵母细胞位于第二次减数分裂的中期(,，，)，等待受精。卵巢表面卵泡卵母细胞经体外成熟培养，大部分都能达到核成熟，排出第一极体。,(,(,(,透明带软化 透明带是一层糖蛋白膜，它为卵子提供一层保护被，可阻止,,,,,以上的分子通过。更重要的是受精时它可结合并诱导精子发生顶体反应。在精卵融合后，透明带还可阻止多精受精。随着卵母细胞的体外成熟，透明带上精子受体(,,,、,,,、,,,)发生重排，透明带 , 牛小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究外层呈网状，其内层附着有已断裂的微绒毛和卵丘细胞胞质的突起，同时透明带交软,,,,。,(,(,(,卵丘细胞扩展 一般把卵丘细胞扩展和粘液化作为卵母细胞体外成熟的形态指标之一。卵丘细胞扩展的原因可能是因为,,,和,,,刺激产生并分泌透明质酸，后者使得卵丘细胞扩展并粘液化。,,,,,,和,,,,(,,,,)根据卵丘细胞扩展情况制定了牛卵母细胞体外成熟的判断标准:,级成熟卵为“卵丘细胞完全扩展”，卵丘细胞团至少向外扩展,倍于裸卵直径(,,,,(,,,);,级成熟卵为“卵丘细胞中等扩展”，卵丘细胞向外扩展约,倍于裸卵直径(,,,,,,);,级成熟卵为“卵丘细胞轻度扩展”，卵丘细胞仍紧紧地贴在透明带上【,,,,,〕。一般地，绝大多数模奔冻墒炻押投嗍 模布冻墒炻丫 捍锏匠墒熳刺 懦龅谝患 濉,保 保 陈涯赶赴 墒斓姆肿拥骺鼗 恚保 保 常 背墒煲种埔蜃?卵母细胞在卵泡环境中，它们并不能自发成熟分裂，而当卵母细胞从卵泡中取出以后，卵母细胞能够自发成熟。经过多年的研究发现，卵泡液中含有一种卵母细胞成熟抑制因子 (,,,,,; ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,，,,，)，这种抑制因子已经证明来源于颗粒细胞或卵泡壁细胞，如果在培养液中加入颗粒细胞或者颗粒细胞提取物质，均将抑制卵泡卵母细胞发生生发泡破裂(,,,,,,,, ,,,,;,, ,,,,,,,,,，,,,,)，这种抑制作用并不需要颗粒细胞和卵母细胞的直接接触，但是直接接触将提高,,工在两种细胞间的转移效应，其抑制作用无种属特异性。,,，维持卵母细胞停止在第一次减数分裂前期的双线期在卵母细胞，,,成熟中可以阻止其自发的减数分裂【,,】，它可以抑制,,,,而不能抑制裸卵，这可能是由于,,,分子量较小可以自由通过卵丘细胞和卵母细胞间的缝隙连接的缘故。但成熟分裂一旦启动,,，将不再起作用瞄】。,(,(,(,成熟促进因子 从,期体细胞以及正在进行减少数分裂的卵母细胞中提取出一种刺激,,,,的物质，称之为成熟促进因子(,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,，,,,)，也叫做,期的促进因子，它能促进卵母细胞由,,期向,期转变【,】。,,,是由两个亚基组成的蛋白质激素，这两个亚基包括催化亚基(,舭,)和调节亚基(;,;,,,,)。;,;,和;,;,,,,的变化直接影响至,,,,的活性。;,;,,,,族蛋白.