红细胞压积参考方法的建立及应用研究

红细胞压积参考方法的建立及应用研究 ?--—— 634?--—— 文章编号:1007一4287(2007)05—063-4—04 ChinJLabDia,Mav,2007,V0】l1,No.5 红细胞压积参考方法的建立及应用研究 ,白丽霞 彭黎明,杨佳 (1.北京大学深圳医院检验科,广东深圳518036;2.四川省人民医院检验科) 摘要:目的建立红细胞压积(pcv)检测参考方法一微量压积法.方法按照NCCLS指南建立PCV检测的微量 压积法,同时对该方法的检测性能进行系统评价,并且将sE950o和1800i与其检测结果进行比较.结果微量压积 法最佳离心时间为4.5分钟.毛细管间的容积无差异(P>0.05),PCV读数误差?0.002,测定PCV高,中,低值标本的 批内,批间及总重复性的变异系数(cv)均<1%.溶血,脂血,黄疸及血小板对PCV检测基本无干扰(P>0.05);将血细 胞分析仪SE9500,1800i检测结果与其比较发现.其结果间具有良好的相关性(r>0.975,P<0.001o结论微量压积 法检测PCV简便,精密度高,结果准确,抗干扰能力强,可用于血细胞分析仪检测I-let的校准. 关键词:红细胞压积;微量压积法;参考方法 中图分类号:R446.11文献标识码:A StuayOnsetangupthereferencem~fllOdforthepackedcellvolumeanditsapplicationPENG Li-ming,YANG,BAILi- . (脚oflabMed,PekingUni,~yShenzhenHospital,Shenzhen518036,Ch/na) Abstract:ObjectiveTosetupthereferencemethodforthepackedcellvolume(PCV).MethodsThemicrohematoerit methodforPCVwasestablishedaccordingtotheNCCI.S'guidelineandtheperformanceofthemethodwasev~uated;meanwhilethe results0fhematocrit(Hot)detectedbySysmexSE9500and1800iwere洲删 withtheresultsofPCVobtainedbymicrohemat— ocritmethod.ResultsThemlnilllUnleentrifugafiontimewas4.5min.Therewasnodiffemn~amongthedimemiomofcapillary tubes(P>0.05).Thewithin-1.-i1/1,between-nmandoverallcoefficientofvariance(CV)waslessthan1%.Therewasminimalinter. ferenceforPLWathighconcentrationofHb(3g/L),triglyceride(TG=28.9mmol/L),bilirubin(DB:272.7mmol/L),andPLT (846XlO9/L)(P>0.05).CorrelafiOilbetweentheSE9500/1800iandreferencemethodWaSexcellent(r>0.975,P<0.001). Conelu~onThesefindingdemomtmtethatthemicrohematocritmethodforPCVissimple,precise,accurate,strongforanti—inteffer- enceanditcouldbeusedtocalibratetheHotforCBCanalyzer. Keys:packedcellvolume;micmhematocritmethod;refemncemethod 红细胞压积(PCV)作为l}缶床常用实验诊断指 标,对贫血及相关疾病的诊断和疗效监测有十分重 要的作用.目前,检测PCV的主要方法包括血细胞 分析仪所采用的电阻抗法,传统手工方法一温氏法 及微量压积法,后者因检测精密度高,结果准确及血 浆残留量小等,已被美国临床和实验室协会 (CLSI,以前称NCCLS)和国际血液学标准化委员会 (IcsH)分别推荐为PCV的参考方法和"替代参考方 法"[,.本研究旨在建立CLSI和ICSH推荐的微量 压积法(micmhematocritmethod),同时对其检测性能 进行系统评价,并将其检测结果与血细胞分析仪 SysmexSE95o0(简称sE95o0),Sysmex1800i(简称 l800i)所得红细胞比容(Hct)结果进行比较. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1标本141例健康成人男性78例,女性63 例,年龄为l8—59岁.及60例血液病患者的新鲜 (ChinJLabD,2OO7,11:0634) 静脉血(EDTA.K2抗凝),于6h内完成检测.其中, 对20例高值,20例中值,2o例低值标本同时以微量 压积法和SE9500检测;141例体检血标本同时以微 量压积法和1800i检测. 1.1.2主要仪器及试剂微量压积离心机S EDME1.J5和配套毛细管由Sigma公司提供.其中, SEDME1.15半径>8.0cm,30s内可达最大转速;能 维持离心机外周的RCF为14000Xg至少5min,离 心机转子温度<45c【=;毛细管长度75In/n4-0.5mm; 内径,管壁均符合美国材料实验协会(As1M)要求. 抗凝管含EDTA.1(2(1.5—2.2mg/m1)由广州阳普有 限公司提供.SE.9500和1800.i自动血细胞分析仪 及配套试剂由日本Sysmex公司提供. 2方法 2.1标本含量设微量压积法测PCV的灵敏度为 90%(P1),特异度为80%(p2),a=0.05(双侧),口= O.O8,按含量计算[]:n:[U2ctpl/2(1一 中国实验诊断学2007年5月第11卷第5期 Pl/2)]/计算得到nl=54,112=96,即阳性标本需54 例(本文为6o例),阴性标本需96例(本文为141 例). 2.2微量压积法(1)吸样及密封:将充分混匀的 抗凝血吸人长75mill毛细管的2/3—3/4,擦净毛细 管外部,水平放置毛细管.将毛细管干的一端,90 度垂直插入密封剂盘,轻轻旋转毛细管并将其从装 有封口剂盘取出,密封剂塞头应?4n1Hl.(2)离心: 血标本在吸样及密封后立即离心.离心时,配平吸 样毛细管,将封口端向外放人离心机,盖紧转子盖和 离心机;15000转速离心5min.(3)读数:在一次离 心完成后从离心机内移除毛细管并在放大镜下用专 用读数尺读出结果,细胞柱底面对着零刻度线上;10 min内读数,相同标本进行双份测定,其读数差应< 0.005.(4)计算:PCV=红细胞柱长(mm)/细胞加 ??——— 635??——— 上血浆的柱长(mm). 2.3血细胞自动分析Het以SE9500和1800i血 细胞分析仪严格按照厂商提供的操作说明书检测 Hct及各项CBC参数. 2.4统计学方法用SPSS10.0软件分析. 3结果 3.1微量压积法的建立及其性能评价 3.1.1离心时间的验证指对离心机转速,最大细 胞压缩和计时器准确性的验证.使用2份混匀新鲜 抗凝血,在测定开始两分钟,对2份标本进行平行测 定.然后,增加时间间隔到30s,双份PCV结 果,直到连续两次测定的PCV值相同.第2次测定 时间为最佳压积时间.验证时,至少需1个标本的 PCV值t>0.50.结果表明,最佳离心时间为4.5min (表1). 表1微量压积法检测PCv所需离心时间的验证 3.1.2毛细管容积验证将充分混匀的同1份静脉 血装入12支毛细管,分别以无色和有色密封剂各封 6支.离心5min,测量PCV值.结果表明,两组毛 细管PCV结果间无差异(P>0.05),结果极差仅为 0.002,SD和CV分别为0.0008和0.19%,显示毛细 管无斜度存在. 3.1.3读数误差采用两位操作人员双盲读数,分 别对10支毛细管进行读数.结果表明:肉眼读数误 差?0.002,可满足参考方法对读数误差的要求[1,2]. 3.1.4重复性?批内精密度:取高,中,低值标本 各1份连续检测20次.?批间精密度:取高,中,低 值标本各1份分别在0,1,2,3,4,5,6h检测,共7次. ?总重复性:随机选取20例标本,其范围为(Hot 0.183—0.452),其中高,低标本各5份,每份标本用 微量压积法平行检测2次.结果表明,无论是批内, 批间,总重复性,还是低,中,高值PCV,CV均<1% (表2). 3.1.5干扰试验将一些可能的干扰物质包括溶 血,脂血,黄疸及血小板进行干扰试验发现,PCV测 定结果基本不受干扰(P>0.05),极差均?0.om(表 3).选取血小板液作为干扰物,并以生理盐水作为 对照. 表2微量压积法检测PCv的精密度结果 ---—— 636---——ChinJLabDiam.May,200口,Vl0ll1.N0.5 表3溶血,脂血,黄疸及血小板对微量压积法检测PCV的干扰试验结果 注:极差指测定值之间最大值与最小值之间的差;P值指试验组与对照组结果问的 配对t检验结果 3.2参考值测定 以微量压积法检测141例(男性78例,女性63 例)健康成人的PCV结果显示,PCV均值男性为 0.460(0.413—0.507),女性为0.402(0.364— 0.440),其SD分别为0.024和0.019. 3.3与Hct检测结果的比较 将微量压积法检测PCV与SE9500/1800i电阻 抗法检测Hct结果比较发现,微量压积法与电阻抗 法检测结果间的相关性良好(r>0.97,P<0.001). 成组t检验结果显示,微量压积法与SE9500检测结 果问差异无显着性(P>0.05),但微量压积法与 1800i检测结果间却有显着性差异(P<0.O1)(图1, 表4). 表4微量压积法检测PCV与SE9500/18001检测Itet结果闻的比较 图1l踟Oi和00测定I与微量压积法 测定PCV的相关散点图 4讨论 微量压积法检测PCV指在标准条件下经离心 沉淀后RBC所占全血体积中的百分率.PC'V与Hct 是同义词,但检测方法不同,I-let现通常是由血细胞 自动分析仪以电阻抗法检测RBC数与红细胞平均 容积(MCV)结果计算而得[Hct=RBC(10/L)/MCV (n)/1o].微量压积法因测量时间短,所需血量 少,血浆残留量小,且残留血浆量和红细胞脱水造成 误差可大致的相互弥补,测量结果精密度高,接近真 值而被NCCLS和ICSH建议作为参考方法和"替代 参考方法"['?.本文结果表明,微量压积法的重复 性好(CV<1%),经毛细管容积验证试验和PCV测 定时间的验证试验所取得的实验结果都达到了NC— CLS推荐参考方法的要求,数据显示毛细管元斜度 存在,且该高速离心机可使PCV最短时间可为3.5 IIlin(表I).本文对I41名健康体检者PCV测定其 参考值范围与国内外文献报道基本一致L4_6】.微量 压积法测定PCV分别与SE9500,1800i电阻抗法测 定Hct结果间高度相关(r>0.975,P<0.001)(图 1).同时,在将微量压积法检测PCV与SE9500, 1800i检测Hct进行比较时发现,PCV与SE9500检 测的Hct结果间的一致性好,二者结果间差异元显 着性(P>0.05);但是,与PCV与1800i检测的Hct 中国实验诊断学2O07年5月第ll卷第5期 结果问却有显着性差异(P<0.01),原因可能与该 台血细胞分析仪置于检验科以外的实验室,未进行 定期校准和质控而导致结果出现系统误差有关. 在对微量压积法测定PCV的抗干扰作用中发 现,PLT增多,高胆红素血症,高脂血症,部分溶血对 PCV测定结果基本没有影响(P>0.05).但对干扰 因素分析得知,对PCV检测干扰的大小依次为黄疸 >PLT>脂血>溶血(表3). 在本参考方法的建立过程中,对PCV结果的人 工lO倍放大镜读数是人为误差最可能产生的环节. 在试验中,通过两个技术人员统一读数标准,可达在 双盲情况下,对同一标本读数结果相差<0.002,达 到NCCLS推荐该参考方法读数的要求…. 综上所述,微量压积法作为NCCLS推荐的参考 方法具有简便,精密,准确,抗干扰强,自身可定值等 优点,目前可用于其他Hot或PCV检测方法的校准. 作者简介:彭黎明,男,47岁,博士研究生,教授,科主任,研 文章编号:100r7—4287(2007)05—0637—04 -._—— 637.__—— 究方向:临床血液学检验及应用. 参考文献: [1]BullBS,KoepkeJA,SimsonE,eta1.Procedurefordeterminingpacked cellvolumebythemicrohemetocritmethod;approvedstan&mt---thirdedi— tion.NCCLSI"I7-A3.20OO. [21BullBS,FujimotoK,KleeG,eta1.InternationalCouncilforStandardiza. tioninI'hematology(ICSH)recommendatioxtsfor"SurrogateRd'erence" methodforthepackedceilvolume[J].LaboratoryHematology,20O3,9: 1. [3]彭黎明,杨慧.Sy~nexRAM一1与FCM定量分析网织红细胞的比较 研究[J].华西医大20O2,33(3):456. [4]丁磊.红细胞比容测定[J].熊立凡主编临床检验基础(医学检 验专业用).北京:人民卫生出版社2OO4.22—23. [5]AssendelftOWvan,BullBS.ReconanendationsforReferenceMethodfox thePackedCM1Volume(ICSHStandard2001)[J].LaboratoryHematolo- ,7:148. [6]aunBS,FujimotoK,KleeG,eta1.InternationalCouncilforStandardiza. tioninHaematology(ICSH)recommendationsfor"Sum,gateRd'erence" methodforthepackedceilvolume[J].LaboratoryHematology,2OO3,9: 1. (收稿日期:2006—09—18) 氯诺昔康超前镇痛对术后疼痛及病人血清 白介素一2和白介素一6水平的影响 殷日昊,杨希革,赵恒兰,麻海春,熊文激 (吉林大学第一医院1.麻醉科;2.放射线科,吉林长春130021) 摘要:目的研究以氯诺昔康行超前镇痛对术后疼痛及病人围术期血清白细胞介素.2(?,2)和自细胞介素6(?, 6)水平的影响.方法60例ASA工,?级的子宫肌瘤患者,硬膜外麻醉下行经腹子宫全切术,随机分为三组:A组,不 施行超前镇痛;B组,术前30min缓慢静注氯诺昔康16mg;C组,术毕时缓慢静注氯诺昔康16mg.三组术后均不行自 控镇痛(PCIA),如果术后静息时患者主诉疼痛难忍,肌注曲马多镇痛(100me/次).分别于术前,术毕时,术后12h和术 后24h抽取外周静脉血,采用放射免疫分析法测定患者血清中ID2和ID6的浓度,并于术后不同时间点观察视觉模 拟评分(VAS),术后应用镇痛药的比例和不良反应的发生率.结果B组的VAS评分在术后各时间点均显着低于A 组,c组在术后4hVAS疼痛评分显着低于A组(P<0.01).A组术后24h内用镇痛药的患者占30%,显着高于B,c 组(P<O.05).B组ID2和IL6的浓度波动均不明显;在A组和c组,术后ID2的浓度显着降低而1L-6的浓度显着升 高,与B组的差异具有显着性;C组IL-2和IL-6的浓度与A组比较差异无显着性.结论以氯诺昔康行超前镇痛能 够减轻下腹部手术的术后疼痛,减少术后镇痛药的应用,能有效的抑制应激反应,减轻术后免疫抑制. 关键词:超前镇痛;氯诺西康;自细胞介素.2;白细胞介素.6 中图分类号:R97l文献标识码:A t're-anlaiVeanalgesiaeffectsoflornoxicean0npoaol~rativepainandserumlevelsofinterleu ldn-2andinterleuldn-6Y/N Yue-hao,YANGXi-ge,ZHAOHeng-lan,eta1.(DeparlmentofAnesthesiology,FirstHospit al,JilinUna~ty,Changchun130021, Ch/na) *通讯作者