孕妇HBV-DNA载量与胎儿宫内感染的关系

孕妇HBV-DNA载量与胎儿宫内感染的关系 [摘要] 目的:探讨孕妇血清中乙型肝炎病毒DNA (HBV-DNA) 载量与胎儿宫内感染发生率的关系。:通过荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测孕妇血清标本中HBV-DNA含量水平及新生儿血清标本中HBsAg、HBV-DNA情况。结果:128例HBsAg阳性孕妇的HBV-DNA检出阳性率为32.81,(42/128)，胎儿宫内感染率为17.97,(23/128)，且胎儿宫内感染率随血清HBV-DNA含量的增加而升高，HBV-DNA含量与胎儿宫内感染率呈正相关(χ2=7.44，P<0.01)，孕妇血HBV-DNA含量高时婴儿脐血HBsAg或HBV-DNA阳性率明显升高。结论:孕妇血清中HBV-DNA载量升高是造成胎儿宫内感染的主要因素之一。 [关键词] 孕妇;乙型肝炎病毒;宫内感染 [中图分类号] R714.7[文献标识码], [文章编号]1673-7210(2009)03(b)-049,02 我国是乙型肝炎高发区，母婴传播是乙型肝炎病毒传播的主要途径之一，母婴传播引起的HBV感染在我国约占婴幼儿感染的1/3，也是造成乙肝流行的主要因素[1]。乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，因此本文应用FQ-PCR方法检测孕妇血清及其胎儿脐血中HBsAg、HBV-DNA的含量，并分析其相关性，进一步阐明孕妇体内乙肝病毒的含量与宫内感染的关系，积极采取免疫阻断来减少HBV母婴传播，降低乙肝的发生率。 1对象与方法 1.1研究对象 选择我院产科2007年3月,2008年5月住院并分娩的HBsAg阳性孕妇及其新生儿各128例。孕妇均为汉族，年龄24,35岁，平均27.7岁，其中HBsAg、HBeAg双阳性者占35.94,(46/128)，采集孕妇肘部静脉及新生儿出生1 h内股静脉血各4 ml。 1.2研究方法 1.2.1血清HBV-DNA定量检测根据阳性定量模板和待测样本的扩增情况，获得反应体系中待测样本中HBV-DNA的拷贝数(copies/ml)。 1.2.2 HBV宫内感染的判定标准新生儿出生后24 h股静脉血HBsAg、HBV-DNA任一阳性者。 1.3统计学方法 采用χ2检验、趋势χ2检验，P<0.0,示差异有显著性。 2结果 2.1标准HBV-DNA定量分析 HBV定量阳性质控标准品经FQ-PCR分析，以起始拷贝数的自然对数为横坐标，以循环阈值为纵坐标，可以得到一条严格的直线型标准曲线，斜率为-2.363，线性相关系数r>0.999。 2.2母儿血清HBV-DNA检测 HBsAg阳性、HBeAg阴性的孕妇中有42例血清HBV-DNA阳性，其中最小值为302 copies/ml，最大值为5.8×108 copies/ml。19例新生儿血清检出HBV-DNA，其中，最小值为32 copies/ml，最大值为2.4×107 copies/ml。HBsAg、HBeAg双阳性孕妇血清HBV-DNA共32例，其中，最小值为302 copies/ml，最大值为5.8×108 copies/ml。 2.3 HBV宫内感染率 128例HBsAg阳性孕妇所生新生儿中，7例HBsAg阳性，19例HBV-DNA阳性，新生儿任一项阳性者23例，合计HBV宫内感染率为17.97%(23/128)，HBsAg、HBeAg双阳性孕妇HBV宫内感染率为32.61%(15/46)。 2.4孕妇外周血HBV-DNA含量与HBV宫内感染的关系 将观察期内发生HBV宫内感染的新生儿作为病例组，其余未发生HBV宫内感染的新生儿作为对照组，分析孕妇HBV携带情况与新生儿HBV宫内感染的关系，结果显示HBV宫内感染组和非感染组孕妇HBV-DNA暴露水平差异有显著性(χ2=7.44，P<0.01)，进一步将128例HBsAg阳性孕妇血清HBV病毒载量按copies/ml分为3个等级:<103、103,106、106,109，各级病毒载量与HBV宫内感染关系，见表1。 表1 孕妇HBV载量与新生儿HBV宫内感染的关系(例) 3讨论 HBV宫内感染是发展成HBsAg慢性携带者的重要原因之一，也是导致乙肝疫苗免疫失败的主要因素[2]。因此，对HBV宫内感染率的正确估计，将有助于重新认识HBV宫内感染问题的严重性。关于活产新生儿HBV宫内感染率的报道差异较大。它随检测方法、标本来源以及研究对象病毒含量的不同而不同。以HBsAg阳性孕妇新生儿股静脉血HBsAg为指标，所得HBV宫内感染率为4,,15,[3];若以HBV-DNA为指标，国外文献所得率为5.7%,55.56%[4];国内为29.4%,61.0%[4]。 有关HBV宫内感染影响因素的研究报道，一致的结论是与孕妇HBV感染状态有关，国外研究结果表明，随着孕妇HBV-DNA水平的增高，婴儿被感染的危险性也呈增高趋势[5-6]。上述研究均采用斑点杂交法进行HBV定量，斑点杂交法本身是一种定性检查方法，敏感性低，在一定范围内不能反映出病毒含量的变化，本次研究利用FQ-PCR技术对孕妇血中HBV-DNA进行定量检测，更加准确地分析孕妇血清中HBV-DNA含量与HBV宫内感染的关系。 HBV宫内感染可导致新生儿HBV长期携带并可能导致肝硬化及肝癌的发生，所以寻找快速简便的检测方法，准确及早地预测HBV宫内感染针对性地采取预防措施是临床和预防医学工作者的愿望。通过本次研究，将128例孕妇外周血HBV拷贝数实测值及新生儿HBV宫内感染状况进行分析，结果显示，孕妇血HBV-DNA 172 copies/ml为HBV宫内感染最佳临界预测值。它的阳性预测值为42.86,(18/42)，敏感度为78.26%(18/23)，特异度为77.14%(81/105)，阴性预测值为94.19,(81/86)，从而也提示我们了解孕妇血清中HBV含量对预测HBV宫内感染具有重要意义，并且血清影像因素相对较少、取材方便，易于孕妇的接受和临床医生的操作。 [参考文献] [1]乐杰.妇产科学[J].6版.北京:人民卫生出版社,2004:153-154. [2]Kane MA. World-wild status of hepatitis B vaccination[J]. Soz Praventivmed,1998,43 (1):44-46. [3]王素平,徐德忠.用巢式聚合酶链技术进行HBsAg阳性孕妇新生儿HBV宫内感染状况的研究[J].卫生研究,2000,29(l):23-26. [4]Lo YM, Lau TK, Chan LY, et al. Quantitative analysis of the bidirectional fetomaternal transfer of nucleated cells and plasma DNA[J].Clin Chem,2000,46(9):1301-1309. [5]Burk RD, Hwang LY, Ho GYF, et al. Outcome of perinatal hepatitis B virus exposure is dependent on materal virus load[J].J Infect Dis,1994,170(6):1418-1423. [6]刘志华,徐德忠,闫永平,等.孕妇血清中乙型肝炎病毒DNA含量与胎儿宫内感染的关系[J].中华妇产科杂志,1999,34(3):133-134. (收稿日期:2008-11-25)