过氧化物酶活性的测定

过氧化物酶活性的测定 植物生理学实验 实验题目:过氧化物酶活性的测定 姓名 班级 学号 一、 实验原理和目的 原理:过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。在有过氧化氢存在下，过氧化物酶能使愈创木酚氧化生成醌类化合物，此化合物进一步缩合或与其它分子缩合，生成茶褐色物质，该化合物在470nm处有最大的吸收值，可用分光度计测量生成物的含量。 目的:学习测定植物组织中过氧化物酶活性的方法。 二、 实验器具和步骤 :女贞树叶 器具:分光光度计、离心机、秒表、天平、研钵、磁力搅拌器 试剂: 0.1mo1/L过氧化氢;0.1mo1/L磷酸缓冲液pH7.0; ， 0.3%愈创木酚反应液:100 mmo1,L磷酸缓冲液(pH 7(0)100 ml于烧杯中，加入愈创木酚0.3ml ，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至愈创木酚溶解。 步骤:1(称取植物材料约0.2g，加入0.1mo1/L磷酸缓冲液 (pH7.0) 6ml(分次加入， [2ml,2ml,2ml],最后用于洗研钵)，在研钵中研磨成匀浆，过滤或以 8000r,min 离心15min，上清液为酶的提取液。 2.1ml0.3%愈创木酚反应液，加0.8ml磷酸缓冲液7.0，加2ml0.1mo1/L过氧化氢，最后加酶液200ul (视酶活性大小而定，如酶浓度高可稀释后再测定)，摇匀，立即在分光光度计470nm下测吸光度，从加入酶液时立即开启秒表记录时间，1min读数一次(也可2min，视材料而定)。 3(以每分钟吸光度变化0.01为一个酶活力单位。 过氧化物酶活性(U)= ?A×稀释倍数/g.Fw.min.0.01 470 三、 实验数据和作业 过氧化物酶活性(U)=?A×稀释倍数/g.Fw.min.0.01=(0.133-0.124)*20/(0.2*2*0.01)=45 470 四、 数据分析 ?A的值太小可能是由于叶片放置过久导致过氧化物酶活性丧失。 470 五、 思考题 1) 过氧化物酶在植物体内的主要作用是什么, 答:它与光合作用、呼吸作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱。这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素，增加木质化程度，而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加，所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。 (2)比色时为什么要在3min 内完成。 答:因为这个反应的速度很快，在一定时间里反应物就被消耗光。