用酶联免疫吸附法测定血浆HSP70抗体滴度

用酶联免疫吸附法测定血浆HSP70抗体滴度 用酶联免疫吸附法测定血浆HSP70抗体滴 度 侈投f)7..确起色怠1疋 处环境的气温,热辐射略高于对照组.但差异无显着性 (P>0.05). 2两组空降兵的一般情况:对照组空降兵感觉良 好.口温(365?04)?脉率(61.3?11.7)次/rain. 观察组空降兵除1人感觉特别紧张.1人被牵挂伤外. 其余均无不良感觉,口温(368士04)?.脉率(1135 ?237)次]min.中等程度流汗. 3空降兵跳伞后血浆HSP70和TNF—a的含量( 1):与对照组相比,跳伞后空降兵血浆HSP70古量, TNF—a的检出率和含量均明显增加,差异具有显着性 (P<005). 衰1空降兵跳伞后血浆HSP70和TNF.a含量 与对照组比较,P<005;括号内力样本数 机体应激时.HSP70在胞浆台成.其跳伞后血浆中 HSP7D增加可能由于空降兵所受的复台应激诱导了 细胞HSPT0合成或(和)导致细胞的损伤.HSP70释放 入血液.因此.HSPT0在空降兵血浆中增加一方面提 示吃激强度的大小,另一方面提示了空降兵细胞损伤 增加.HSP70水平的变化是空降兵在这种复台应激作 用下的综台反映,既反映r外界应激因素强度的太小, 又反映了体内自身的状态和这些因素综台作用所致的 内环境改变.HSP70在应激反应中具有重要的生物学 作用.但它行使其功能和作用的位置在细胞内.咆浆 CnJIndH螺OccupDisA-p1999,VoI.17,No2 中HSP70的增加可能激活臣曦细胞,也可能导致免 疫功能的混乱,自身抗体的产生=跳伞后.空降兵血浆 TNF_n也增加.而它的增加提示跳伞这种复台应激段其 产物擞活了亘噬细胞,导致其分泌增强.由于TNF的 作用和功能十分广泛,可能参与炎症反应和细咆的溶 解.已有报道HSPT0与TNF在细胞内相互联系,但其 功能和作用仍清楚.而本研究表明两着同时在受到 应激的空降兵血浆中增加,可能TNF直接参与释放入 血浆中的HSPT0的清除.以免产生其抗体.但详细机 制仍有待于进一步证实. 参考文献 lLindquistS.Theheatshockproteins.,’mtluRevGeact. 1988.22:631?677 2WuTC.TangtmyRM.HeHZ..The~~binedeffectsof hightemPOrLLandcarbonmonoxide?theheatrere. sponse.JYoogilMedUaiv.1995.14:178-183. 3WuTC.T~nguayRM,WuY,Profamlbodies0 h吼tstteasproteins&nditspossible5?ficaneerkers exposedtohightem~tureandcarbonmc,~oxldeBicaned EnvimnSci.1996.9:370.379 4航空医学编委会航空医学.北京:人民军医出版社,1992 563576 5刘铁祝.航空生物动力学西安:陕西科学技术出版杜. 1989186.207 6何骁生.潘耿萍.邬堂春,等W~tcm斑点印娅法检测主要 热应激蛋白中华劳动卫生职业病杂志.1996,14:376- 377 收摘:1997.11-08修回:1998-03?08) (本文编辑:陆丽敏] r印卅 用酶联免疫吸附法测定血浆HSP70抗体 陈胜邬堂春海涛王瑞波贺涵贞 热休克或应激蛋白(HSPs)是当机体受到环境中理 化,生物,精神等各种因素刺激时而诱导产生的一组使 机体细胞免受应撒盟素损害的具有保护作用的蛋白 质,其中最为重要,诱导产生最多的是HSPT0我们新 建了酶联免疫吸附法(ElISA)检测血浆HSPT0抗体滴 度,以期能更好地在临床医学,预防医学中探讨HSPT0 抗体与疾病及人群健康的关系. 一 ,材料与方法 1.原理:利用抗原抗体的特异性反应.用纯化的 本曝题受国家自然科学鼙金祁卫生部科研基金资助【项 目编号:39370594), 作者单位:0,30030武汉,同济医科太学职业医学研究所 ? g2 HSP70包被酶标板,结合人血浆(或血清)中的HSPT0 抗体.然后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG抗 体通过显色反应测定暖光度而判断阳性或阴性. 2试剂与仪器:主要试剂:纯化的0(用含人 HSPT0cDNA的pET载体系统表达并纯化),酶蛋白 (casein封闭用蛋自质.Sigma产品),辣根过氧化物酶 (HRP)标记羊抗人IgG抗体(武汉博士德生物工程公 司),3.3+5.5.四甲基联苯胺(TMB,Sigma产品).主要 仪器:恒温水浴箱,酶标仪(Bic-Rad),96孔酶标板(丹 麦产). 3.血洋的采集:抽取静脉血2m1.肝素抗凝静置2 小时或离心取血浆;或不抗凝.室温静置2小时后取血 孺节印弘 中华劳动卫生职业病杂志1999年4月第17卷第2期 清.若不立即检测,分装后一20?保存,1个月内检测. 4血浆抗HSP70抗体滴度测定:(1)用pH9.6的 0.】tool~L碳酸盐缓冲渣稀释纯化的HSP?0至终浓度 5/m】,于酶标板每孔中加入50,37?温育30分钟 后.放置4”C过夜;(2)倒掉每孔液体.用0025md/L TB$(Tris缓冲盐溶液)洗板2次,加入100封闭液 (0.25%ca002%NaN3一TBS),37?温育1小时; (3)倒空每孔液体.用洗板渣(05%Tween20.TBS)洗 板3次,血浆按1:10,1:20,1:40,1:80甩封闭渣稀释, 每孔100.并同时用封闭液作明性对照,37?温育 2小时;(4)洗板液洗板3次.加入025%Casein—TBS稀 释的HRP标记羊抗人I窖G抗体(1:1000),37?温育 l小时;(5)洗板5次,每孔加入100TMB显色液(10 m州TMB螗备液(TMB溶于二甲基亚砜).用拧撩 酸缓冲液稀释成0l叫},,临用前每m1加入075% 32),37?显色l0分钟,每孔加入100 lmoilL终止反应;(6)450Tim波长下,用酶标 仪测定每孔吸光度.减去阴性对照值后.其值大于0.2 为阳性. 二,结果与讨论 用本方法测定了接触苯作业工人(作业地点苄浓 度为135,287mIn])和对照组各42人(两组间性删, 年龄,工龄等基本一致)血浆HSPT0抗体滴度(表1). 经检验和四格表确切概率计算,接触苯组工人血浆 HSP70抗体1:20阳性率明显高于对照组. 衰1两组工人血浆不同稀释度HSP70抗体阳性率(%) 与对照组比较,P<0.05;样率敖为42 原检测HSPTfJ抗体的Westernblot法需经过电 泳转膜等过程,步骤复杂,耗时较长,不容易推广应 用;且一般是通过肉眼现察而定性,主观性较大.与原 方法相比.率方法具有下优点:(】)操作简单,检测快 速.本方法与普通ELISA法基本相同.一般实验人员 均可操作,且耗时较短,预先包被好酵标板后,半天即 可出结果,并且一次可{蝇j出多种滴度.(2)特异性好. 由于采用了有效的封闭液,本方法的特异性不亚于原 方法(3)灵敏度高.定性客观.本方法与所有ELISA 法一样,具有较高的灵敏度.并可通过酶标仪测定吸光 度而定性.(4)检测样本量大,适于人群调查.一支96 孔酶标板除去用作阴性对照外.一次可检测20人份左 右的掸品,特别适用于预防医学领域大规模的人群 调查. 收稿:1998.03—09修回:1998-08.20) (本文编辑:陆丽敏) [町一(王振动,噪声对金矿凿岩作业工人心率变异性 张 及其动脉血压的影响? 张春之曾晓立王林迟乃林刘淑梅马杰 为探讨振动与噪声联合作用下作业工人心率变异 性(HRV)和动脉血压的变化及其相关关系,我扪测定 分析了某金矿凿岩工人的HRV和平均动脉血压 fMABP). 一 ,对象与方法 1.研究对象:以某金矿38名男性凿岩下维修工运输 工及管理人员为对照组.年龄22,44(297?45)岁. 工龄4.2,95(65?i.9)年.各组研究对象年龄问差 异无显着性(P>0o5). 2方法:(i)振动参量及噪声的测定:应用丹麦产 B&K2512型人体响应测振投.现场测量并最大加 速度轴向(z轴向)t/1倍频程各中心颊率的振动加速 度,计算4小时等能量频率计权加速度值(a);现场 测定每工作日工人的接振时间.测振仪器及测试方洼 均符合国家标准GB/T14790—14793的要求.用红声 5670精密声级计测试现场的噪声强度,声级计及噪声 测试方法符台国家标准GB3875(声级计电声性能及测 试方法)的要求.(2)HRV的测试:研究组爱对照组 厨 砌 陀 耄