补体溶血反应[指南]

补体溶血反应[指南] 补体溶血反应 (1)取小试管4支，按下表加入各物 管号 2,绵羊RB溶血素(m1) 补体(ml) N.S(ml) C(m1) 1 0.25 0.25 - 0.5 2 0.25 - 0.25 0.5 3 0.25 0.25 0.25 0.25 4 0.25 - - 0.75 将上述各试管充分摇匀后，放37?水浴箱内15—30分钟观察有无溶血现象。 (2)若红细胞溶解，则液体呈红色透明，为溶血反应阳性，以“十”表示;若红细胞不溶解，则液体仍呈均匀混浊或有少量红细胞沉于管底，为溶血反应阴性，以“一”表示。 溶血反应和补体结合试验 2009-05-24 14:15:36 相关论文 相关书籍 Tags:溶血反应 补体结合试验 免疫学 溶血反应和补体结合试验 二(补体结合反应 当抗原与其对应的抗体结合时，所生成的抗原抗体复合物能从溶液中将补体吸着此即谓补体结合。参与补体结合反应的抗原是透明的溶液，故补体结合现象不能被肉眼看出来，因此必须借助溶血系统(溶血素及相对应的羊血球)作为指示剂，来判定媒质中有无游离的补体，近而推定媒质中未知抗原(或抗体)和已知抗体(或抗原)是否进行了特异性的结合。本反应具有很高的敏感性及特异性，因之常应用于传染病的诊断，特别诊断病毒疾病和梅毒。 由于参与本反应的各种成分间有着一定量的关系，因此在作本试验之前，必须通过一 系列的预备实验来确定各成分的使用量，故本反应的实验方法较为复杂。 本次实验以伤寒杆菌免疫血清与其相对应的抗原补体结合试验为例。 材料: 1. 抗原:伤寒的抽出液 2. 抗体:伤寒杆菌的免疫血清 3. 补体:豚鼠血清 4. 溶血素:抗绵羊血细胞的兔血清 5. 2%绵羊红血球 6. 小试管、试管架、水浴锅。 方法: (一)预备试验(示教说明) 预备试验包括溶血素效价的滴定，补体效价的滴定，抗原效价的滴定及被检血清的处 理。 (1) 溶血素效价的滴定 按照下表加入各物 管溶溶血1:20 生理 2%羊假定 号 血素素 补盐血球(ml) 结果 (ml) 稀释体(ml) 水(ml) 倍数 1:300 摇全溶1 0.5 0.3 1.7 0.5 匀后解 置1:500 全溶2 0.5 0.3 1.7 0.5 37?解 水浴1:800 全溶3 0.5 0.3 1.7 0.5 一小解 时 1:全溶4 0.5 0.3 1.7 0.5 解 1000 1:全溶5 0.5 0.3 1.7 0.5 解 1200 1:全溶6 0.5 0.3 1.7 0.5 解 1600 1:全溶7 0.5 0.3 1.7 0.5 解 2000 1:全溶8 0.5 0.3 1.7 0.5 解 2400 1:全溶9 0.5 0.3 1.7 0.5 解 3200 1:10.5 0.3 1.7 0.5 0 4000 1:10.5 0.3 1.7 0.5 1 4800 1:10.5 0.3 1.7 0.5 2 6000 对 1 0.3 2.2 0.5 照 凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管(即1:4000倍稀释)0.5毫升溶血素为一个单位，在溶血反应中常用0.5毫升中含有2个溶血素单位的溶液，所以试验时应取1:2000倍稀释的溶液。 (2) 补体单位滴定 依下表加入各试剂: 抗补体 生溶血素 2%羊管 原 (1:理盐水(2单血球悬液结果 号 (m20)(ml) (ml) 位)(ml) (ml) l) 0.1.不溶血 1 0.20 0.5 0.5 置 5 30 置 于 于 0.1.3稍溶血 2 0.25 0.5 0.5 35 25 7 7 0.1.全溶血 3 0.30 0.5 0.5 ? 5 20 ? 水 水 0.1.浴 全溶血 4 0.35 0.5 0.5 浴 5 15 410.1.5 全溶血 5 0.40 0.5 0.5 5 5 10 分分0.1.钟 全溶血 6 0.45 0.5 0.5 钟 5 05 0.1.全溶血 7 0.50 0.5 0.5 5 00 0.1.不溶血 8 - 0.5 0.5 5 50 能引起完全溶血的最小补体量称为准确单位，上表中第3管(即0.3毫升)，但因补体的效价可能有部分损失，故普通稍高的一管为实用单位，实际试验时须用两个实用单位。 上表的结果为: 补体单位:0.3毫升 补体实用单位:0.35毫升 补体两个实用单位:0.70毫升 因试验时是两个实用单位的补体0.5毫升，可依下列比例关系换算: 20:0.7=?:0.5 ?= 14.3 即须将补体稀释14.3倍，用0.5毫升则含有两个实用单位。 (3) 抗原的滴定 在用已知抗原测定未知抗体时，必须先滴定抗原效价以决定本试验时所需抗原的最适 浓度(反之用已知抗体测定未知抗原时，则需滴定抗体效价) 试 管 号 1 2 3 4 5 6 剂 1:5稀释血, , , 0.5 0.5 0.5 清 伤寒抗原, , , , 0.5 0.5 2U 痢疾抗原, , , , , 0.5 1:80 补体2U 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 生理盐水 , , 0.5 0.5 1.0 1.5 摇匀放置37?水浴中30min 溶血素2U , 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 2,羊血球 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 摇匀放置37?水浴中15min 血抗溶羊试特清 原 说明 血素对血球对验管 异性对照 对对照 照 照 照 如血清对照管呈完全或部分不溶血是为抗补体现象。血清严重污染细菌，混有淋巴液 或显著溶血时，常产生很强抗外体作用。又如试管、吸管不清洁，也可出现抗补体。若有 抗补体发生，应抽血重试验。