徐州地区小肠结肠耶尔森菌的分布特征

徐州地区小肠结肠耶尔森菌的分布特征 988中国人兽共患病学报 ChineseJournalofZoonoses2008,24(1O) 文章编号:1002—2694(2008)10—0988—03 徐州地区小肠结肠耶尔森菌的分布特征 郭惠,杨晋川,张雷,陈勇,刘金芳,许静静,丁韧,王璐梅 摘要:目的研究徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌(y.)在常见宿主及食品中的分布特征.在 不同季节.采集不 同地区各类样品进行常规分离鉴定.对分离菌株进行血清学,生物学分型,耐药检测.用PCR 方法检测毒力基因.结果Y.e 在该地区各类宿主,肉制品中均有分布,宿主的带菌率春季明显高于秋季(P<0.005).猪是 带菌率最高的宿主(8.2%),狗次 之,二者是致病性Y.e的宿主动物.致病菌株占总菌数的1O,0:3/生物3型为致病菌的优势菌 型(9/10).结论该地区y. e的分布有季节和地区性差异,猪,狗是重要的宿主动物,致病性菌株和非致病性菌株同时存 在. 关键词:小肠结肠耶尔森茵;毒力基因;耐药检测 中图分类号:0378.6文献标识码:A InvestigationonthedistributionofYersinia咒rOcDZZfic口 inXuzhouareaofJiangsuprovince GUOHui,YANGJin-chuan,ZHANGLei,CHENYong,LIUJin-fang,XUJing-jing.DINGRen,WANGLu-mei (XuzhouCenterforDiseaseControlandPrevention,Xuzhou221006.China) ABSTRACT:ThedistributionofYersiniaenterocoliticainanimalhostandmeatfoodatXuzhouareaofJiangsuprovince wasinvestigated,inwhichbacteriawereisolatedfromvariouskindsofsamplesindifferentseasonsanddifferentareabycon— ventionalmethodsandtheisolatesweretypedwithserologicalmethods,biologicaltypingassayandantibioticssusceptibihytes— ring.ThevirulencegenesofisolateswasdetectedbyconventionalPCRassay.Itwasfoundthaty.enterocoliticacouldbeiso- latedfromallkindsofsamplesincludingsamplestakenfromvariouskindsofanimalhostsandmeatfoods.Thecarrierrateof hostanimalsduringspringseasonwascomparativelyhigherthanthatduringautumnseason(P<0.005).Pigswerethehost withhighestcarrierrate(8.2)anddogsturnedtobethenext;bothanimalswerethehostsforpathogenicY.enterocolitica. PathogenicstrainsofY.enterocoliticaconstituted10ofthewholebacteriaisolated,inwhichthe():3/bio-3typeappearedto bethepredominantorganism(9/10).Fromtheseobservations,itisevidentthatseasonalanddistributiond ifferencesofY.en— terocoliticaex5Stintheseareaandbothpathogenicandnon-pathogenicstrainsofY.enterocoliticaCO— existatthesametime. KEYWORDS: 小肠结肠炎耶尔森菌(y.e)是近年来受到全球 重视的一种肠道致病菌,它是一种重要的食源性病 原菌,会引起多种家禽,家畜以及人类的疾病n.徐 州地区的相关调查曾经一度中断了近2O年,2004— 2007年,对该地区家养动物粪便,腹泻人便及肉制 品,苍蝇等2816份样品,进行了专项监测和有关研 究,现对y.e在该地区的分布特征如下. 1材料与方法 1.1标本2004--2007年,在徐州周边8个乡镇于春秋季 采集各类粪便2076份.于夏季采集农贸市场肉制品590 份,苍蝇150份. 1.2主要试剂,仪器ATBExpression细菌鉴定药敏分析 系统为法国梅里埃公司产品,常见分型血清购自日本生研株 式会社(5种),其它血清购自中国生物药品检定所,O;3,O :9单克隆抗体及试验中所用参考菌株均由中国疾病预防 控制中心传染病预防控制所提供.TaqDNA聚合酶(1000u/ 支),dNTP(1OOmM,4×100u1)购自华美生物公司.引 物合成自赛百盛公司,PCR仪为MJPTC一200型. 1.3方法按照《全国小肠结肠耶尔森菌病监测》进行 分离鉴定.经API20E鉴定为Y.e的菌株,用玻片凝集法 作血清学分型,参照文献0,进行生物分型.用ATBG一5 (OO)药敏系统进行药敏检测,将模式相同者列为一种型别. 参照文献.的方法进行PeR检测all,ystA,yadA,virF, ystB基因.用SPSS11.5软件对数据进行统计学.分析. 2结果 2.1宿主带菌分布特征2004—2007年,徐州地区宿 主总带菌率为4.0,2007年最高,2005年最低, 2005—2007年宿主带菌率春季明显高于秋季(一 8.58,P<O.005)),每年的差异呈现一致的规律,详 作者单位:江苏省徐州市疾病预防控制中心,徐州221006; Email:xzcdcguohui@sina.corn 2008,24(10)中国人兽共患病学报 ChineseJournalofZoonoses989 见表1;宿主带菌在8个乡镇的分布有地区性差异 (yz一18.91,P<0.01),三堡镇宿主带菌率最高为 8.4%(11/132),其次是棠张镇为6.0(34/586), 其余依次为,利国乡5.9(5/85),夹河镇4.3(3/ 70),大彭镇3.2(9/277),何桥乡2.8(13/ 457),铜山新区2.59/6(5/199),茅村镇1.9(5/ 270).在六类宿主之间的分布明显不同()[.一 28.17,P(O.001),猪的带菌率最高为8.2%(28/ 343),狗次之6.19/6(19/314)其次是鸡4.8(7/ 147),羊3.9%(14/362),牛2.7(6/223),腹泻人 群的带菌率最低,为1.7(12/687). 表12004--2007年春秋季宿主带菌情况 Table.1Listofcarrierrateofdomesticanimalsinspringandautumnfrom2004to2007 时间春季秋季总计 样本数分离数分离率%样本数分离数分离率样本数分离数分离率 2004 2005 2006 2007 总计 303 26O 26O 823 1O 9 28 47 3.3 3.4 11 5.7 275 26O 26O 795 2 2 18 22 O.72 O.76 6.9 2.8 458 578 52O 52O 2076 15 12 11 46 84 3.1 2.0 2.1 8.8 4.0 2.2在肉制品及苍蝇中的分布情况2005—2007 年夏季,肉制品中Y.e污染率为:2.0(13/640). 生肉的污染率为0.67(2/300),熟肉较高为: 3.2(11/340);苍蝇的带菌率为0.67(1/15o). 2.3血清型,生物型,毒力基因分布情况100株 Y.e分布在25个血清型中,其中6株为不确定血清 型,定型的血清型中分布的主要型别为,0:6,30 (17.0),0:22(14.0),0:3(9.0),0:10 (9.0).生物1A型菌株占79.0,生物3型占 20.0,仅1.0的菌株为生物2型.毒力基因检 测表明,Y.e菌株携带致病性基因:all,ystA的比率 为10.0,均为秋季分离.狗源性菌株的ail,ystA 携带率为26.3,(4/19),猪的为14.0(4/28). 致病性尚未明确的ystB基因携带率为42.0,详 见表2. 2.4药敏分型研究94株已确定血清型菌株对2O 种抗生素的敏感试验表明,复方替卡西林,派拉西 林,复方派拉西林,头孢呋辛,头孢噻肟,头孢他定, 亚安培南,美洛匹宁,阿米卡星,庆大霉素,头孢吡肟 的敏感率均为100;根据对9种药物的反应不同, 按照耐药程度由轻到重将耐药模式列为12个型别, 7,8,9型高度相似,体现了复方阿莫西林从敏感到 耐药的过渡,他们为耐药模式的优势型别(76oA),囊 括了所有致病菌株和部分非致病菌株,详见表3. 3讨论 调查结果显示,Y.e在徐州地区广泛分布于家 养动物,苍蝇,腹泻人群,肉制品中.宿主的带菌率 有季节和地区性差异,春季高于秋季,但致病性菌株 的检出仅限于秋季;三堡和棠张两个乡镇的带菌率 较高,在今后的监测工作中应继续关注.本病暴发 流行的一个重要特点是与食品污染有关,该地区 熟肉的污染率较生肉的高,提示着肉制品可能存在 二次污染. 徐州地区致病性Y.e的优势型别是0:3/生物3 型,毒力基因分布特征为ailystAyadAvirF; 0:9/生物3型菌株仅携带致病性Y.染色体上的保 守基因ail,ystA,由于Y.e质粒丢失是很普遍 的,也视为致病性菌株.狗源性菌株中致病性菌 株的比例最高,已经证实,狗源株和部分人源株的 PFGE带型完全相同,都属于我国的主克隆系”,因 此,认为本地区存在着狗造成人问y.感染.猪是 带菌率最高的宿主(8.2),狗次之,二者是致病性 Y.e的宿主,可见,猪,狗是该地区重要的宿主动物. 生物1A型为徐州地区Y.e的优势菌型,此类 菌株ystB的携带率达到了45.6(36/79),虽然传 统观点认为他们不致病,但近来许多研究报道,此类 菌株与人类腹泻之间有较明显的流病学关联.本 研究中,腹泻人群分离株大部分为生物1A型菌(10/ 12),100(10/10)携带ystB,因此,ystB具有潜在的 致病作用.值得关注的是,不论致病还是非致病,绝 大部分菌株药敏分型表现为一致或高度相似,非致病 菌株最多竞出现了9重耐药,这些提示着致病与非致 病菌株,人群与宿主,食品之间有着某种联系. 参考文献: [1]于恩庶.中国小肠结肠炎耶尔森氏菌病研究进展CJ3.中华流行 病学,2000,21:453—455. [2]汪华,景怀琦,朱凤才,等.小肠结肠炎耶尔森菌[M3.北京:人民 卫生出版社,2004:3-9. C33ThoernerP,BinkingombeCI,BoglrStuberK,eta1.PCRDetec— tionofvirulencegeneinYersiniaenterocoliticaandYersinia oseudon|bercuIosisandinvestigationofvirulencegenedistribu— tion[J].AppliedandEnvironmentMicrobiology,2003,69:1810— 1816. [4)杨晋川,刘金芳,许静静,等.徐州地区小肠结肠炎耶尔森菌病原 学初步研究.CJ3中国人兽共患病学报2007,23:489—492. C53SinghI,VirdiJS.ProductionofYersiniastabletoxin(YST)dis— tributionofystgenesinbiotype1AstrainsofYersiniaenteroco— liticn[T].TMedMierobiol,2004.53:1O65—1068. 990中国人兽共患 Z 病 . 学 nos 报 es 2008ChineseJournalofZOOnZOO~5,Z一4’(‘10一),J O:9 O;5.27 O:8 O:12.25 O:7.8 O:6,3O O:5 O:4.33 O:44.45 O:10 O:6,31 O:11,24 O:12 O:14 Ol20 O:36 Ol37 O:39 O:49.51 Ol52.54 O:55 O:57 O:22 O:16.29 未定型 1nZ+,s,A+l 3lA,B+21 1—1 55出+311 2—2 2ystB+2 4ystB+12l 17ystB+35521l 25,B+2 l—l 2ystB+11 1ystB+l 4ystB+13 5一l4 3—1l1 l一1 1—1 1—1 l一1 2一ll 1—1 l—l 1—1 4—22 2一l1 2—11 1O一46 43—4 12—1 23ystB+11 41A一31 注:S为敏感;I为中敏;R为耐受. 收稿日期:2008—04—06:修回日期:2008—06—26