白芍总苷对急性肝损伤的保护作用及其可能机制(可编辑)

白芍总苷对急性肝损伤的保护作用及其可能机制(可编辑) 白芍总苷对急性肝损伤的保护作用及其可能机制 安徽医科大学 硕士学位论文 白芍总苷对急性肝损伤的保护作用及其可能机制 姓名:詹可顺 申请学位级别:硕士 专业:药理学 指导教师:魏伟 20031101安徽医科大学硕士论丈 英文缩略词 吸光度丙氨酸氨基转移酶天门冬氨酸氨基转移酶 卡介苗联苯双酯 四氯化碳刀豆蛋白 ’一一一 ,’一二硫代双一硝基苯甲酸 谷胱甘肽过氧化物酶 ?? . 白细胞介素。 灌胃 脂多糖 . 丙二醛 , 分钟一,一,一 溴化.,一二甲基.。噻唑..二苯基四氮唑蓝 巾 巨噬细胞 ?一萘乙烯二胺盐酸盐 ?? 一氧化氮 ?一 超氧阴离子 氧自由基 羟自由基 每分钟转数超氧化物歧化酶 安徽医科走学硕士论文自芍总营 肿瘤坏死因予 安徽医科大学硕士论文 白芍总苷对急性肝损伤 的保护作用及其可能机制 摘 要 目的:探讨白芍总督 矿,对四氯化碳 ,致小鼠急性化学性肝损伤和介苗, 加脂多糖,诱导的小鼠免疫性肝损伤模型的保护作 用及可能机制。方法:分别建立小鼠化学性和免疫性肝损伤模型, 分光光度法 血清中丙氨酸氨基转移酶 ,、天门冬氨酸氨基转移 ,、一氧化氮 ,水平和肝匀浆 酶 ,、 中丙二醛,、超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化物酶 ,?含量,放免法检测血清中肿 瘤坏死因予一旺 ,.含量,法检测脾淋巴细胞增 殖反应。染色法对肝脏组织作病理检查。 结果:。。对化学性肝损伤的保护作用:、、?‘给 药明显降低,诱导的急性化学性肝损伤小鼠血清升高的、水平,病理 组织检查亦发现给药后可减轻肝组织坏死范围及程度,减少炎细胞浸润。进一 步研究发现可降低肝匀浆升高的水平,同时升高肝匀浆中的和 ?酶活性。.对免疫性肝损伤的保护作用:、、? 给药明显降低加诱导的免疫性肝损伤小鼠血清升高的’、水平, 病理组织检查亦发现给药后可减轻肝组织坏死范围及程度,减少炎细胞浸润。 同时还发现可显著降低肝匀浆中升高的水平.提高肝匀浆和? 水平,、?可明显降低血清中水平,而不同剂量组 可明显降低血清中,水平,并且可抑制腹腔巨噬细胞一?的产生,各 个剂量组对诱导的脾淋巴细胞增殖反应具有恢复作用,而对诱导的脾淋安徽医科大学硕士论文 细胞巴增殖反应无明显影晌。结论:对化学性:损伤剃免疫性小鼠肝损伤均具 有保护作用,其机制与其抗自由基、提高抗氧化物酶的活性和免疫调节等有关。 主题词:白芍总苷 化学性肝损伤免疫性肝损伤安徽医科走学硕士论文/静 . ., , , 卜 ,,.? 一;; ? .? ..,. .: ,.,:.?。 , ’., . ,.,’‘, .,. 安徽医科大学硕士论文 ? .,,,...,?‘ .’,,“ ?, ’ , , . ?, : / / / 安徽医科大学硕士论文 白芍总苷对急性肝损伤 的保护作用及其可能机制 前言 白芍为毛瞧科植物芍药的干燥根,药材丰产丁二安徽、浙江、四川等省,芍药在全 国各地均有栽培,以安徽省毫州的白芍产量最大,质量最优,称为毫臼芍。作为传 统中药,白芍一直被历代医学家所重视,在我国最早的医学专著《神农本革经》中 其就被视为有益气作用的良药,其他著名医学著作如《别录》、《药性论》、《唐本草》、 《日华予本革》和《医学起源》等均有记载,我国药典和日本药典均有收载。我国 东汉时期大医学家张仲景所著《伤寒论》一书中列举的个方剂中,其中有白芍的 就有个,占总方剂的.%;日本厚生省指定的种中药处方中,白芍的出现率 为.%,名剜单味中药的第四位。白芍具有养血柔肝、缓中止痛、敛阴收汗之功 效,用于头痛、眩晕、肋痛腹痛、四肢挛痛、血虚萎黄、月经不调、自汁盗汗等症。 、 。 。 . 常用的代表方剂有:芍药甘草汤,芍药桂枝汤,羚羊钩藤汤等,千百年来,为防病 治病发挥了重要作用。白芍具有平肝作用,在《中华人民共和国药典》中有白芍“平 肝止痛”的记载。《傅青主女科》一书中指出除了病在肝必用白芍外,还明确提出白 芍为平肝孵良药【。 白芍总营 ,是祖国传统中药白芍根中提取的 有效成份,已经作为第一个抗炎免疫调节药治疗类风湿关节炎被正式批准生产上市。 研究表明,主要含有芍药营、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷和苯甲酰芍 药苷等成分【?,具有明显的抗炎免疫调节作用,对炎症免疫性疾病的治疗具有重要 前景堪】,除了对类风湿关节炎具有治疗作用以外,临床前实验表对炎症免疫 性疾病如系统性红斑狼疮也具有治疗作用【。 我国肝病的主要发病原因是感染肝炎病毒。流行病学资料表明,我国每年有 万~万新发病例,而且在全球约.亿以上慢性乙型肝炎病毒携带者中,中国人 占%。在感染者中,有%~%的患者可发展为慢性感染,从慢性肝安徽医科大学硕士论文 炎发展为肝纤维化一般史需~年时间,其中%~%的病例最终发展为肝硬化 乃至肝癌四。研究肝炎的发生机理及寻找有效的治疗措施是国内外学者共同研究的 热门课题,大量研究表明,免疫功能的异常改变和氧自由基的大量产牛是引起肝组 织损伤的重要原因,而显著的双向免疫调节作用和抗氧化作用可能在乙肝的治 疗中发挥重要作用。而本所以往的研究表明, 、??‘连续,预防 给药可明显对抗.半乳糖胺或四氯化碳所致小鼠肝损伤后清谷丙转氨酶升高,血 清白蛋白的下降及肝糖原含量降低,并使形态学上的肝细胞变性坏死得到明显的改 善和恢复。同时超微结构上肝细胞内线粒体的肿胀,内浆网的空 泡变性,溶酶体脱落 也得到明显改善?】。 基于以上研究基础,我们采用了四氯化碳 ,诱导小 鼠急性化学性肝损伤模型‘叫和卡介苗 ,加脂多糖 ,诱导的小鼠免疫性肝损伤模型两种动物模型,观察 了是否对两种模型具有保护作用,同时初步探讨了其可能的作用 机制。安徽医科大学硕士论文 材料与方法 .实验材料 .,动物 昆明种小鼠,,体重,周龄,本校实验动物中心提供。合格证号 皖医实动准字第号。在恒温?、光照周期:环境中饲养后实验. 任意饮水。 ..药品及试剂 ‘由安徽医科大学临床药理研究所提供, 临用前用双蒸水溶解, 再.% 羧甲基纤维素钠稀释。 联苯双酯,:北京协和制药』 用.%羧甲基纤维素钠配至所需浓度的混悬液: :系上海新中化学试剂厂产品,临用前用精制花生油稀释。批号:; ’:卫生部上海生物制品研究所,批号:,临用前用无菌生理盐 水配至所需浓度; 刀豆蛋白 ,及: 美国公司产品,用完全 的微孔滤膜过滤除菌,置?冰 培养液配制成.母液,经内径. 箱保存备用; 台盼蓝:华美生物工程公司提供; 培养粉:美国公司产品; 完全培养液:配制时培养粉加?,? 一’丙酮酸钠, ?一谷胺酰胺,万?青霉素,?叫链霉素,% 小牛血清,调至.; 小牛血清:安徽医科大学病原微生物教研室提供,每用前 分钟灭 活; :北京经科化学试剂公司产品; 溴化..二甲基.噻唑,.二苯基四氮唑蓝安徽医科大学硕士论文 一,一...,一? ,:美毛 公司产品,用含.%葡萄糖的磷酸缓冲液?~,.配成?使 用液,。冰箱避光保存; 异丙醇:蚌埠化学试剂厂产品,临用前配制为含.?。盐酸的异丙 醇: ,测定试剂盒:南京建成生物 丙氨酸氨基转移取 工程研究所产品,批号:; 天门冬氨酸氨基转移酶 ,测定试剂龠:南京建 成生物工程研究所产品,批号:; ,测定试剂盒:南京建成生物工 超氧化物歧化酶 程研究所产品,批号:; 测定试剂盒:南京建成生物 .测定试剂盒、丙二醛 工程研究所产品,批号, 肿瘤坏死因字. ,?放免测定试剂盒:北京东 。 雅生物技术研究再唯产品,批号 .:仪器与设备 .型洁净工作台:江苏苏净集团苏州安暴空气技术有限公司产品; ?‘ .全自动高速冷骧离心机:湖南仪器仪表厂离心机厂产品; .型培养箱:美国杜邦公司产品; 型酶联免疫检测仪:美国:仪器公司产品: 见紫外分光光度计:上海仪器一’产品: ?型高速离心机:北京医用离心机厂产品: 。台式高速离心机:上海安亭科学仪器厂产品: 内切式组织匀浆机:浙西机械厂产品; 一型显微镜:日本产品; 型显微摄像系统:日本产品; 型电子分析天平:仪器公司产品; ?型托盘式扭力天平:上海第二天平仪器厂产品; 安徽医科大学硕士论文 型旋涡混合器:上海医科大学仪器厂产品; 电热恒温水浴锅:上海医疗器械五厂产品; .实验内容与方法 ...致小鼠急性化学性肝损伤模型的建立及给药 模型制备池” 昆明种雄性小鼠,~周龄,实验时,腹腔注射.% ?。,禁食 后,自小鼠后眼眶静脉丛采血,测定血清转氨酶活性并取肝脏右 叶同一部位经% 甲醛固定,染色作病理检查,另取小块肝脏组织,用冷生理盐水洗 去浮斑,拭干. 称取.肝组织,冷生理盐水制成%的肝匀浆。 动物分组及处理 设正常对照组、模型对照组、剂量组 ?、中剂量组 .、大掰鼍组、组?‘共六组.将动物按体重 分层随机分组,每组只。用药方案:自造模前~周起,按“倌唪积分 别给予不同 ,给药,每天一次,末次给药在给予 剂量药物,灌甓 诱导肝损伤前,共次:正常对照组和模型组给予等量溶媒。 .. 力致小鼠免疫性肝损伤模型的建立及给药“”” 模型制备 昆明种雄性小鼠,~周龄.造模第一天于每只小鼠尾静脉静注 ./. 约含. 个活菌数,天后再次于每只尾静脉静注 .肛/.进行攻击.经攻击后小鼠开始禁食,于注射后处死动物。自 小鼠后眼眶静脉丛采血制各血清,拉颈处死动物后取肝脏右叶同一部位经%甲醛 固定,染色作病理检查,另取小块肝脏组织,用冷生理盐水洗去浮衄,拭干, 称取.肝组织,加冷生理盐水匀浆制成%的肝匀浆。 动物分组及处理 设正常对照组、模型对照组、剂量组‘、剂量组 ?、大剂量组?晤、组?‘共六组。将动物按体重安擞医科大学硕士论文 分层随机分组,每组只。用药方案:从造模第一天起,按体积分别不同剂 量药物,正常对照组和模型组给予等量溶媒,每天一次,末次给药在给予激发 肝损伤前,共十次。 .. 、活性测定 采集小鼠全血,离心获奴血清,按试剂操作检测血清、活 性。 .. 含置测定呲’ 测定原理 过氧化脂质降解产物中的可与硫代巴比妥酸 , 缩合,形成红色产物,在处有最大峰值。的测定常与禊定相互配 合, 活力的高低间接反映了机体清除自由基的能力,而的高低又间接 反映了 机体细胞受自由基攻击的严重程度。 标准曲线的黼备 用蒸馏水分剐配制种不同浓度的溶液、、、、/各取, ,于沸水浴中加热,流 加%三氯乙酸,静暨,.% 水冷却至室温.,离心后取上清,在分光光度计处测吸光度 值。以浓度为横座标。吸光度值为纵座标,绘制标准曲线。 』 肝匀浆中含量测定 处死小鼠后,取出肝脏,用冷生理盐水洗去浮血.拭干,称取. 肝组织, 用冷生理盐水制成%的肝匀浆。按南京建成生物技术研究所提供的试剂盒说明书 进行。 .. 活性测定四 测定原理 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基 ,?‘,后者氧化羟胺形成亚硝酸盐,在显色剂的作用下呈现紫红色,用可见 光分光度计测其吸光度,。当被测样品中含时,则对?‘有专一 性的抑制作用,使形成的亚硝酸盐减少,比色时测定管的吸光度低于对照管,通过 计算可求出被测样品中的泊举。安徽医科大学硕士论文 肝匀浆中活性的铡定 处死小鼠后,立即取出肝脏,用冷生理盐水洗去浮衄,拭干。称取.:组织, 用生理盐水制成%的肝匀浆。按南京建成 卜物技术研究所提供的试剂龠说明书进 行。 .. 舄活?眭测定? 测定原理 谷胱甘肽是一种三肽巯基化合物,二硫代二硝基苯甲酸与巯基化 合物反应时能 产生一种黄色化合物,通过测定波长处的值推测.活性。 肝匀浆中活性测定 小鼠处死后,立即取出所需肝脏,称取. 肝组织用冷生理盐水洗去浮血,用 ?缓冲液制成%肝匀浆,匀浆液经呛离,去胞核碎片后,再叠 离,取上清液出,用纯化水稀释至,内测定酶活性。 .. 含量测定酬 利用试剂内含%对氨基苯磺酸,.%萘乙烯二胺盐酸和.%磷酸 血清与 . / 将一还原为一,通过显色的深浅测定其浓度。取 硫酸锌溶液混合,加入双蒸水,混匀,冰浴;于离心, 取上清液 与 双燕水混合,然后加入 %对氨基苯磺酸,冰浴 / 后加入 溶液,室温放置,于处测定值,以 标准亚硝酸钠作标准曲线,推算含量。 ..小鼠脾淋巴细胞增殖反应测定‘ 小鼠处死后,无菌取脾脏,常规制备淋巴细胞悬液,用完全冲 培 养液 调细胞浓度至× ‘,于孔无菌培养板中每孔加入细胞悬液、终 浓度 ?。或终浓度 ?’.,同时设个复孔。置%, ?培养箱中培养 。终止培养前,;.??,取出离心, ,吸弃上清。每孔加入酸化异丙醇,振荡秒,在酶标仪上测 处值,结果以的均值表示。 .. ?含量测定 安徽医科大学硕士论文 常规方法采集小鼠血清,采用放免法检测血清巾?含量。 .,病理组织学观察及评分标准 肝组织固定和切片 上述两种肝损伤模型均取肝脏左叶,处死动物,取出肝脏,用冷生理盐水洗去 浮血,拭干。于肝左叶取材块,每块大小约为...,立即用%中 性甲醛固定。%、%、%、%、%乙醇脱水,二甲苯透明,石蜡包埋,型切片机作切片,常规脱蜡,染色,中性树胶封片。用显微 镜 一观察,以及一型显微摄像系统照相。 肝组织病变程度分级方法啪“ 光镜下检查,按肝脏坏死程度分为缀:级,正常或肝脏有轻微变性,肝细胞无坏 死;级,点状坏死,坏死占肝小叶/:级,点灶状坏死,坏死占肝小叶/~ /;级,灶状坏死,/坏死占肝小叶?/;级,片状坏死, 坏死占肝 小叫。/。 .、统计处理 稿理组织学检查结果采用分析方法,其它数据均以均值士标准差 表示,采用,’ 进行分析处理。安徽医科大学硕士论文 .结果 . 对 .致小鼠急性化学性肝损伤的保护作用 .. 对化学性肝损伤小鼠清转氨酶的影响 表的结果表明,与正常组相比较,模型组血清、水平显著升高,给 予、、,和 /组均能显著降低血清中升高的 、水平。 表 对四氯化碳致急性化学性肝损伤模型小鼠血清、的影响,;士 .,:: 删.;’.,“.:: : :.. 对。致急性化学性肝损伤小鼠肝匀浆、、?水平的影响 表的结果表明,模型组肝匀浆水平显著升高,同时、.水平显 著降低。给予不同剂量的均可显著降低肝匀浆中升高的水平,同 时能提高 肝匀浆和.水平,对、、.水平均无明显影响。安徽医科大学硕士论 文 袭对鹳氯化碳致惫性化学性肝损伤模型小鼠胖匀浆和水平的影响, ;土、 ’. ? . ,,;? “. 轴 ’;‘一.,”. : : : : : .. 给药小鼠的肝脏病理的影响 表,图的结果表明染色发现,模型组肝内出现弥漫性分布的点片块坏 死、桥接坏死,.肝血窦充血明显,弥散性炎细胞浸润。中大剂量和组均可减 轻病变范围与程度,使炎细胞浸润减少。 安擞医科失学硕士论文 表 对四氯化碳致急性化学性肝损伤小鼠肝脏病理状况的影响,;? ’ , . ?。、 ?????????????“?????????????????????????????????一 一. 一 .矿 ..、 ..? . 驷西;. . “《. :上对自致小鼠免疫性肝损伤的保护作用 .. 对免疫性肝损伤小鼠血清转氨酶的影响 表的结果表明,与正常组相比较,模型组血清、水平显著升高,给 予、、/和 /组均能显著降低血清中升高的 、水平。 安徽医科大学硕士论文 袁对塔致免疫性肝损伤模型小鼠血清、的影响,? .,? ?.’.?。?‘ .?. .圭. ?? .: . .: .群群 .. .士, .士.’ .:.? .?.’’ .士.’ 曼 塑 翌:兰::: ::兰::: ”.;‘..”. 翻 : : : :乱. 对免疫性肝损伤小鼠肝匀浆、、?水平的影晌 表的结果表明,模型组肝匀浆水平显著升高,同时、?水 平显著降低。给予不同剂量的均可显著降低肝匀浆中升高的水平, 同时 能提高肝匀浆和.水平,可降低水平,丽对和 水平无明显影响。 ,安徽医科大学硕士论文 寝 对致免疫性肝损伤模型小鼠肝匀浆和、?水平的影响 ?? , .;? 舯.。;..”.: : , : , : : .. 对免疫性肝损伤小鼠血清和?水平的影响 表的结果表明,模型组小鼠血清中的和.?水平显著升高,、 ?。可明显降低血清中水平,不同剂量组可明显降低.水 平。对两者均无明显影响。安徽医科大学硕士论文 袭.对致免疫性肝损伤模型小鼠血清和.的影响,;? ?.,? ????? .. ?? ,. ..拌捍.士. .士. .士. .士. .. .. .. .士. ”. 玉 ;..”.: . : :.. 对免疫性旰损伤小鼠、诱导的脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬 细胞产生的影响 表的结果表明,模型组小鼠和诱导的脾淋巴细胞增殖反应的显著 降低,诱导腹腔巨噬细胞产生.的能力明显升高,各个剂量组对 诱导的脾淋巴细胞增殖反应具有恢复作用,而对诱导的脾淋巴细 胞增殖反应无 明显影响,同时可抑制腹腔巨噬细胞产生.。安徽医科大学硕士论 丈 表 对致免疫性肝损伤模型小鼠腹腔巨噬细胞产生和脾淋巴细胞 增殖 反应的影响,? 加痢 .,;? ??? .:. .:. .. ?? .... .士. .士..士. .?. .土. .. ..” .黜.? .圭...?. .?. .圭... 删如;.,”.: :, :. : :.. 对免疫性肝损伤小鼠的肝脏病理的影响 染色发现,模型组肝内出现弥漫性分布的点片块坏死、桥接坏死, 肝血窦充 血明显,弥散性炎细胞浸润。大剂量和雠预防给药均可减轻病变。 炎细胞 浸润减少。表,图? 安徽医科犬学硕士论文 表 对致免疫性肝损伤小鼠肝脏病理状况的影响,? ’ ,一? . . . . .“. 捌蚰 ; . : : ,安微医科大学硕士论文 图正常小鼠肝组织 图 诱导的化学性肝损伤小鼠肝组织 蜘巧’安徽医科大学硕士论文 圈 .治疗化学性肝损伤小鼠组 口??’.。 图?治疗化学性肝损伤小鼠组 .管’安徽医科大学硕士论文 圈 诱导的免疫性肝损伤小鼠肝组织 盯,蕾’丑? 图?治疗免疫性肝损伤小鼠组 .安徽医科大学硕士论文 图?治疗免疫性肝损伤小鼠组 /晒’ 安徽医科天学硕士论文 .讨论 . 对两种肝损伤模型的保护作用 诱导的化学性肝损伤和加诱导的免疫性肝损伤动物模型是两种 常用的筛选和研究治疗肝炎药物的病理模型,其中一是‘一种常用的诱发化学性肝 损伤模型的剧毒类化学药物之一,因其接触后发病率高,易在动物实验中复制.在 研究保肝降酶药的实验中经常使用。进入机体后,在肝距铁细胞色素催 化下,经单电子还原丽生成氯甲基自由基和过氧化三氯甲基自由基,这些自由基进 而启动二次反应,攻击脂质细胞膜,造成肝细胞船质过氧化性损伤【“。本实验亦 证实可硬小鼠鲰清转氨酶活力明显上升,同时肝匀浆脂质过氧化产物含 量明显增加:挽氧化物酶、活性显著降低,表明引起肝损伤的机 制与脂质过氧化有关。病理检查亦发现模型组小鼠肝脏损伤严重,可见弥漫性肝细 “ 。 : 胞肿胀,脂肪变性与点状坏死、灶状坏死,严重时甚至呈桥接坏死,病变以肝小叶 为主,同时坏死组织周围有大量的炎细胞浸润。本研究发现可明显降低增高的 ?一 血请转氨酶水平,同时还发现可显著降低肝匀浆中升高的水平,提高肝 一 匀浆和.水平,提示对化学性肝损伤的保护作用与抗脂质过氧化 和提高机体的抗氧化酶活性有关。 由于化学性肝损伤的作用机制主要与毒性反应有关,虽然有研究表明其中也有 免疫机制参与,但与人类肝炎发生的病理过程还有一定的差距,因此建立与肝炎发 病机理更为相近的免疫性肝损伤模型十分必要。早期文献报道。引,小鼠注射丙酸 杆菌或若干天后,注射微量,可导致严重的肝损伤。国内有学者在此基础 上创立了加诱导的小鼠免疫性肝损伤模型四,以模拟人类肝炎发病中部分 免疫机制,并且提出以下假说:单核细胞、枯否细胞在致炎因子的作用下,向肝脏 积聚并被致敏,这些致敏的枯否细胞在接触后,会释放一些细胞毒性介质,包 括氧自由基、、.、.等,从而造成肝细胞损伤。这种动物模型的特点是安徽医科失学硕士论文 免疫损伤起主导作用。病理组织检查显刁在注射后肝朋‘呈现充、炎细胞浸润、 点状坏死、片状坏死、带状坏死等病变里逐步:『重的趋势。本研究亦发现免疫性肝 损伤小鼠血清转氨酶升高,提示有细胞病变,病理检查亦证实模型组、鼠细胞 出现胞浆嗜酸性变和胞核消失,呈现点状坏死和灶状坏死,细胞间有大量炎细胞浸 润。进一步研究发现肝匀浆的脂质过氧化物水平明显了高,清中和一值水平 明显升高,同时还发现肝损伤小鼠和诱导的脾淋巴细胞增殖反应明显降 低,提示自由基引起的脂质过氧化、脾淋巴细胞增殖反应、。的生成等均参与 免疫性肝损伤的病理机制。在给予后妞清转氨酶水平明显降低,同时还发现 可显著降低肝匀浆中升高的水平,提高肝匀浆和?水平,、 ?.’.明显降低血清中水平,而不同剂量组可明显降低血清中 ?水平,并且可抑制腹腔巨噬细胞.的产生.还可提高淋巴细胞增 殖反应。提示对免疫性肝损伤小鼠亦具有保护作用,其机制可能 与其直接清除 自由慕、提高抗氧化物酶的活性和降低脂质过氧化物水平,并司调节免疫功能,减 少和的产生等有关。。 . 的抗氮化作用 以往的研究表明具有抗自由基作用。通过检测佐剂性关节炎大鼠不同 时问非致炎侧足爪容积、血浆含量、、.活性,以及腹腔巨噬细胞 释放水平,观察了白芍总苷对关节损伤的保护作用,结果表明,自芍总苷不仅能 抑制足肿胀,而且可降低佐剂性关节炎大鼠过高的和水平,同时还使其过 .氐的和.活性恢复正常。相关分析结果提示,的抗关节炎作用与其降 低脂质过氧化、恢复抗氧化酶活性和腹腔巨噬细胞分泌功能有关川。利用核黄索与 光作用产生‘、反应产生.以及引起的红细胞氧化溶血的方法,研究 对’?及的清除作用和对溶血反应的影响。结果发现对‘。产 生%清除率时的浓度为.?~,对.产生%清除率时的浓度为 .?一,抑制引起溶血反应的是.?.~本研究亦证实 可显著降低化学性和免疫性肝损伤时脂质过氧化物和的生成,同时可提高抗安徽医科大学硕士论文 氧化酶活性。 . 的免疫调节作用 是一抗炎免疫调节药,在不同的病理状态下,对异常的免疫功能具有 双相调节作用,对环磷酰胺诱导的免疫功能增高或降低均有抑制作用。在佐剂 性关节炎大鼠模型、系统性红斑狼疮小鼠模型和多种肝损伤模型上,可不同程 度的调节机体的免疫功能紊乱,包括对免疫应答多个环节的作用,且作用特点呈功 能和浓度/剂量依赖性的双向免疫调节‘。。低浓度..?‘促 进和高浓度.。 :。抑制亚适浓度在体外诱导的小鼠脾淋巴细胞增 殖并可拮抗诱导的佐剂性关节炎大鼠脾细胞低下的增殖反应,其机理可能与调 ;可在体和体外分别促进特异性与非 节巨噬细胞产生和有关【“ 特异性和细胞的诱生,弊有拮抗环孢霉素抑制细胞诱生和左旋眯唑抑制细 胞诱生的功能【二。对于加诱导的免瘵性肝损伤小鼠模型,我们发现其脾淋 巴细胞增殖反应降低,这与诱导免疫性肝损伤模型的结果一致”。可 逆转诱导自增殖反应,但对诱导的增殖反应无明显影响,有待进一步研究 一 ; 加以阐明。采用细胞株细胞毒检测法,观察对诱导大鼠腹腔巨噬细胞产 生.盯的影响”,结果表明,亚适量?诱导大鼠腹腔巨噬细胞培养 ‘ 上清在对细胞杀伤百分率最大,.?乙‘能促进诱导大鼠腹腔巨 噬细胞产生.,但不改变其动力学过程。.?对诱导腹 腔巨噬细胞产生.量效曲线呈钟罩形,提示对腹腔巨噬细胞产生.具 有浓度依赖性双向调节作用。研究发现在多种肝损伤动物模型中,.是介导肝 损伤的主要和终末介质。一?参与了多种肝损伤的病理生理过程,国内刘耕陶等 报道,来源于肝枯否细胞的.在女诱导的免疫性肝损伤中起重要 作用。本研究发现,可降低肝损伤小鼠血清?水平,同时抑制腹腔 巨噬细 胞的.的产生,其是否可直接作用与枯否细胞,值得进一步探讨。 总之,本研究表明对两种肝损伤动物模型均有保护作用,其作用机制可 能与清除自由基、提高抗氧化酶活性和免疫调节作用等有关,深入研究对肝 脏的保护作用可望将其开发为新的治疗肝损伤的药物。塑堕苎堂堡主堡墨 结论 .本研究在诱导小鼠化学性肝损伤模型上,探讨了对该模型的影响, 研究发现下可降低模型小鼠升高的、活性,病理组织发现可减轻 坏死范网羊程度,减轻炎细胞浸润。同时发现可降低盯匀浆中升高的水 平,使降低的肝匀浆、.酶活性升高, .在加诱导的小鼠免疫性肝损伤模型上,探讨了对该模型的影响,研 究发现可降低模型小鼠升高的、活性,病理组织发现可减轻坏死 范围和程度,减轻炎细胞浸润。同时发现可降低肝匀浆中升高的水平,使 降低的肝匀浆、.酶活性升高。同时还发现降低清中升高的和 .水平,降低腹腔巨噬细胞升高的.?水平,对免疫性肝损伤小鼠 低下的 诱导的脾淋巴细胞增殖反应有恢复作用。 、 对化学性肝损伤和免疫性小鼠肝损伤均具有保护作用,其机制可能与其抗 自‘由基、提高抗氧化物酶自?话性和免疫调节等有关。安徽医科大学硕士论丈 参考文献 .杨利侠,夏慧茹,张菊芳.《傅青主女科》白芍平肝法浅析.山西中医,;: .冯瑞芝,肖培根.自芍,见中国医学科学院药物研究所编.中药志.北京:人民 卫牛出版社.:. .张晓燕,王金辉,李 铣.白芍的化学成分研究.沈阳药科大学学报,; : .张晓燕,李铣,白芍的化学研究进展.沈阳药科大学学报,;: .徐叔云,陈敏珠,魏伟等,白芍总苷免疫药理与临床。见:周金黄,刘干中主编: 中药药理与临床研究进展第一册,北京:中国科学技术出版社。: .魏伟,刘家骏,‘刘家琴,等.白芍总苷对乙型肝炎的治疗作用及其前景.中国药 :? 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