冰冻切片

冰冻切片 有关细胞和组织学技术 一、细胞和组织 免疫组织化学技术是用标记物或显色物标记的抗体检测细胞和组织内的抗原，从而达到诊断和研究疾病的目织标本质量的好坏有着密切的联系。由于各种抗原的生化、物理性质不同，如温度高低、酸碱度强弱及各种化学的细胞和组织学结构将有助于抗原的准确定位。因此，细胞和组织标本的采集制备在免疫组织化学技术中占有十 (一)细胞标本的取材 目前，免疫组化技术已经应用于细胞学诊断，如鉴别低分化癌与恶性淋巴瘤、黑色素瘤、低分化肉瘤等。应用于淋巴白血病和恶性淋巴瘤的分类分型。近年来，培养细胞的免疫组化技术在鉴定细胞的种类、分化程度、研究均起到了积极作用。 细胞标本的取材有以下3种方法: 1(印片法 主要应用于活组织检查标本和手术切除标本。新鲜标本以最大面积剖开，充分暴露病变区，玻片上，立即浸入细胞固定液内5-10min，取出后自然干燥，低温保存备用。 优点是简便省时，细胞抗原保存较好。缺点是细胞分布不均匀，玻片上细胞重叠，影响标记效果。 2(穿刺吸取涂片法 主要应用于实质器官的病变区，如肝、肾、肺、淋巴结、软组织等。用细针穿刺吸抹在载玻片上，力求细胞分布均匀。如 穿刺液较多，细胞丰富，可用洗涤法:将穿刺液滴入盛有1-2ml Hanks液(低速离心5-10min后，弃上清液，将沉淀制成细胞悬液(浓度约2×106细胞/ml)，吸取1滴于载玻片上，轻轻涂 该法穿刺吸取直接涂片的优点是操作简便，细胞形态保持较好。缺点是细胞分布不均匀。洗涂法片虽可弥补 3(体液沉淀涂片法 主要用于胸水、腹水、尿液、脑脊液等体液多、细胞少的标本。体液采取后，必须量的多少选用不同的处理方法:?细胞数量极多者，可吸取少量液体直接涂在玻片上。?细胞数量较少者，可将液体自离心10min，弃上清液，将沉淀涂片，略干后固定备用。 如用细胞离心涂片器(Cytospin )，可将标本用上述离心沉淀法制成2×106细胞/ml的细胞悬液，吸取50μl加入细胞分布在直径约6mm的小圆圈内，每个圆圈内的细胞数约105个(Danos,1976)。 培养细胞标本的取材可根据培养的细胞特性分别采取不同的方法。某些细胞有贴壁生长的特性，如纤维母细入培养液内即可收集到理想的细胞标本。某些细胞只能在培养液中生长，可用上述体液沉淀离心涂片法处理。 制备细胞涂片应注意:?标本反复离心洗涤，细胞的粘附性降低，在免疫组化染色过程中容易脱片，因此，试剂和便于镜下观察和记数，应将细胞集中到直径0.6-1.0cm的圆圈内，细胞总数以105个为宜。?粘液丰富的标宜作免疫组化标记。 (二)组织标本的取材 组织标本主要取之于活组织检查标本、手术切除标本、动物模型标本以及尸体解剖标本等。前三者均为新鲜 不同程度的自溶，其抗原可能有变性消失，严重弥散现象，因此，尸检组织应尽快固定处理，以免影响免疫组化HBcAg等在尸检标本中，抗原显示仍较好。 组织标本的取材常常受到各种因素的影响，如各种内窥镜钳取的组织，常因过度挤压而变形，严重者组织结组织中分布不均一，常出现人为的组织取材不准确。为了避免上述缺点，组织取材时应注意:?活检钳的刃口必要病变区;?必须取病灶与正常组织交界区;?必要时取远距病灶区的正常组织作对照。 二、细胞和组织的固定 (一)固定 为了更好的保持细胞和组织原有的形态结构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定。固定的作用不和内源性酶活性，更重要的是最大限度的保存细胞和组织的抗原性，使水溶性抗原转变为非水溶性抗原，防止抗 不同抗原，其稳定性也不相同，因而对固定剂的耐受性差异较大。如T淋巴细胞面抗原属不稳定性抗原，HBsAg属稳定性抗原，其抗原活性很少受固定剂种类、固定时间、温度等因素的影响。 (二)固定剂 用于免疫组织化学的固定剂种类较多，性能各异，在固定半稳定性抗原时，尤其重视固定剂的选择，介绍如 1(醛类固定剂 双功能交联剂，其作用是使组织之间相互交联，保存抗原于原位，其特点是对组织穿透K链和λ链的标记效果良好，背景清 晰，是常用的固定剂。 (1)10%钙-福尔马林液(浓甲醛10ml，饱和碳酸钙90ml)。 (2)10%中性缓冲福尔马林液(浓甲醋10ml，0.01mol/l pH7.4 PBS 90ml)。 (3)4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4(多聚甲醛40g,0.1mol/L PBS液pH7.4500ml，两者混 合加热至60?，搅拌并滴加1n NaOH至清晰为止，冷却后加PBS液至总量1000ml)。 (4)戊二醛-甲醛液(戊二醛1ml，浓甲醛10ml，蒸馏水加至100ml)。 戊二醛是二醛基化合物，交联结合力比甲醛大，Bullock认为交联过强，可出现组织改变和空间遮蔽现象，剂用于PAP法免疫酶标记效果仍满意。 (5)甲醛升汞固定液(即B5固定液。浓甲醛10ml，氯化汞6g,醋酸钠1.25g ,蒸馏水90ml)。 IgM、IgG等抗 有人认为此固定液悬液是较理想的固定液，标记IgA、 原效果良好。也有人认为它减弱细胞的宜用于免疫荧光标记。氯化汞是一种强蛋白凝固剂，但对组织穿透性弱，且使组织收缩，故与甲醛混合使用。 (6)醋酸-甲醛液(浓甲醛10ml，冰醋酸3ml，生理盐水加至100ml)。 Bullock等认为此液固定效果良好，组织可不经消化，胞浆IgA、IgG、IgM、IgD和K、λ、J链标记均呈阳性体仅为甲醛升汞液的1/10。此液内醋酸既可防止组织收缩，又可暴露胞浆免疫球蛋白抗原决定簇。 (7)Bouin’s液。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂之一，对组织穿透力较强而收缩性较小，比单独醛类固定更适合免疫较好，但Bullock则认为它可导致Igg γ重链变性，故必需加大第一抗体的浓度。 (8)Zamboni’s液。 该固定液可用于电镜免疫细胞化学，对超微结构的保存优于纯甲醛，也适用于光镜免疫细胞化学研究。采用组织穿透力和固定效果，以保存更多的组织抗原。固定时间6-18h。 (9)PLP液(过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液)。 该固定剂适用于富含糖类的组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其是过碘酸氧化组织中的结合，从而与糖形成交联。组织抗原大多数是由蛋白质和糖两部分构成，抗原决定簇位于蛋白部分，故该固定液响其在组织中的位置(固定剂7-9配制法见附录1)。 2(非醛类固定剂Pe等人比较几种非醛类双功能试剂指出，碳化二亚胺、二甲基乙酰胺、二甲基辛酰亚胺、单独使用时，边缘固定效应重，但与戊二醛或多聚甲醛混合使用，效果明显改善。 (1)碳化二亚胺(1-ethyl-3(3-dimethyl-aminopropyl)cardodiimi-HCI)液:2g溶于100ml0.01mol/L,pH7.4PBSIgA、IgG效果不佳。 (2)碳二亚胺-戊二醛液(ECD-G液):配制法见附录一。 ECD-[1-ethyl-3(3-dimethyl-aminopropyl)carbodiimide Hydrochloride],即乙基-二甲基氨基丙基碳亚胺盐酸盐，简 该液常用于多肽类激素的固定，对酶等蛋白质固定效果良好，对细胞内抗原定位，超微结构保存好，是一种 (3)Zenker’s 液(重铬酸钾2.5g,氯化汞5g,硫酸钠1g,蒸馏水100ml,混合溶解后，临用时加水醋酸5ml)。 该固定液对免疫球蛋白染色最佳，固定时间约2-4h，染色前必须脱汞 色素。 3(丙酮及醇类固定剂 系最初免疫细胞化学染色的固定剂，其作用是沉淀蛋白质和糖，对组织穿透性很蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，解决的办法是和其它试剂混合使用，如加冰醋酸、乙醚、氯仿、甲 (2)乙醚(或氯仿)与乙醇等量混合液。 Danos(1976)等认为其组织穿透性极强，即使涂片上富于过多的粘液，固定效果仍然良好，是理想的细胞 (3)AAF液:95%-100%酒精85ml，冰醋酸5ml，浓甲醛10ml。 (4)Carnoy氏液:100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合 C保存备用。 后4。 (5)Methacarn氏液:甲醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合后4。C保存备用。 以上两种固定液适宜某些抗原，癌基因蛋白产物检测的 固定，P53抗癌基因蛋白产物，PC-NA等抗原的保 以上介绍了免疫组织化学中常用的固定液，用于免疫组化的固定剂种类很多(见附录)，不同的抗原和标本为，迄今尚无一种标准固定液可以用于各种不同的抗原固定。而且同一固定液固定的组织，免疫组化染色标记结固定液标准是:?最好地保持细胞和组织的形态结构。?最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液们，中性缓冲福尔马林(或多聚甲醛)是适应性较广泛的固定液，但固定时间不宜过长。必要时，可作多种固定 固定组织时应注意:?应力求保持组织新鲜，勿使其干燥，尽快固定处理。?组织块不易过大过厚，必须小于制在0.3cm以内。?固定液必须有足够的量，在体积上一般大于组织20倍以上，否则组织中心固定不良影响效果人为假象。 (三)固定方法 1(浸入法(Immersion method) 将组织浸泡在固定液内，必要时可在低温(4。C)环境下进行，固定一般在2-12h之间。 2(灌注法(Irrigation method) 此法适用于动物实验研究。自左心室插入主动脉，先以krebs或生理盐注入固定液。置灌注动物于4。C冰箱内，次日取出脑组织或其它组织。外周组织一般在灌注后30min内取材，织块。有主张用冷固定剂(4。C)进行灌注。我们的体会是一般光镜下观察的标本，室温固定即可获满意效果。肽类抗原活性在断绝血液供应后24h几乎完全丧失。 灌注法固定可使固定液迅速达到全身各组织。达到充分固定之目的。灌注冲洗还能排除红细胞内假过氧化物以及其它不能进行灌注的组织固定。 三、组织切片技术 应用于光镜的免疫组织化学染色的切片厚度一般要求5μm左右，神经组织的研究要求切片厚度在20-100μm 冰冻时，组织中水份易形成冰晶，往往影响抗原定位。一般认为冰晶少而大时，影响较小，冰晶小而多时， 上述现象更易发生。冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率(形 成速率)成反比，即冰晶形成的数量愈多量降低冰晶的数量。Fish认为冰冻开始时，冰晶成核率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-33。C,从-30。C降至减慢。基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。 (1)速冻，使组织温度骤降，缩短从-33。C43。C的时间，减少冰晶的形成。其方法有二: ?干冰-丙酮(酒精)法:将150-200ml丙酮(酒精)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈粘稠状，烧杯(50-100ml)内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮(纯酒精)饱和液内，至异戊烷温度达-70?时投入异戊烷内速冻30-60s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80?低温冰箱内贮存。 (2)将组织置于20%-30%蔗糖溶液1,3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。 2(石蜡切片 其优点是组织结构保存良好，在病理和回顾性研究中有较大的实用价值，能切连续薄片，组术的石蜡切片制备与常规制片略有不同:?脱水、透明等过程应在4?。C下进行，以尽量减少组织抗原的损失。充分脱水、透明、浸蜡。?浸蜡、包埋过程中，石蜡应保持在60?以下，以溶点低的软蜡最好(即低温石蜡包埋 组织块脱水、透明、浸蜡时间参考表1-3: 表 1-3 组织块处理时间表 1 70%乙醇 4? 3,4h 2 80%乙醇 4? 3,4h 3 90%乙醇 4? 2,3h 4 95%乙醇? 4? 2,3h 5 95%乙醇? 4? 1,2h 6 100%乙醇? 4? 1.5h 7 100%乙醇? 4? 1.5h 8 二甲苯? 4? 0.5,1h 9 二甲苯? 4? 0.5,,1h 10 石蜡? 60? 1h 11 石蜡? 60? 2h 以上全过程为18-24h，也可在室温内使用自动脱水机代替。如组织块小，直径小于0.5cm，可用快速石蜡包 石蜡切片为常规制片技术，切片机多为轮转式，切片厚度2,7μm，应用范围广，不影响抗体的穿透性，染剂对组抗原有一定的损害及遮蔽，使抗原特征发生改变。有人经蛋白酶消化，可以改善光镜免疫组化染色强酶等消化法。石蜡切片应入37?恒温箱过夜，这样烤片可减少染色中脱片现象。切片如需长期贮存，可存放于 石蜡切片优点较多，但在制片过程中要经过酒精、二甲苯等有机溶剂处理，组织内抗原活性失去较多，有人methed)，可以保存组织内可溶性物质，防止蛋白变性和酶的失活，从而减少了抗原的丢失。该法是将新鲜组织真空、低温条件下排除组织内水分 ，然后用甲醛蒸气固定干燥的组织，最后将组织浸蜡、包埋、切片。此法可 3(振动切片 用振动切片机(Vibratotme)，可以把新鲜组织(不固定不冰冻)切成厚片20,100μm，以漂解剖显微镜下检出免疫反应阳性 部位，修整组织进行后固定，最后按电镜样品制备、脱水、包埋、超薄切片、染原破坏，在免疫组化染色前避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，能较好地保留组织内脂溶性物质布研究。这种包埋前染色，尤其实用于免疫电镜观察。 4(塑料切片 塑料包埋切片常用包埋剂有甲基丙烯酸盐类(Glycol methacrylate, GMA)及环氧树脂类(E检测，能相互对照所查抗原，定位准确。塑料包埋切片可切出比石蜡切片更薄的切片，光镜切片可薄至0.5,2u存抗原较好，不与组织产生共聚合，但形态学结构欠佳。环氧树脂如Fpon和Araldite能较好地保存形态学结构构。塑料包埋切片由于处理程序繁多，抗原活性易丢失。同时半薄切片进行免疫染色时，抗血清不易穿透树脂，前定位。包埋前染色的标本，切片薄切片后不需染色，直接在相差显微镜下观察免疫反应部位呈黑点状，定位后电镜阳性检出率。 5(超薄切片 电镜标本制作见第七章 ，应用超薄切片机(Ultrotome)进行切片。 6(碳蜡切片 碳蜡(Carbowax)，学名聚乙烯二醇(Polyethlene glycol, PEG)为水溶性蜡。根据其分子量不4000、6000等，用于组织包埋的有1500、4000两种，其熔点分别38?C和52。C左右，常温下为固体石蜡状， 本法的特点是组织固定水洗后，不需脱水透明可直接浸蜡包埋，且切片方法与常规石蜡切片相同。切下的组织片即可展平，制片过程简单易行。 具体操作简述如下:组织块不宜过大，一般限定在1.5cm×1cm×0.1cm以内。?组织固定后充分水洗去除固定(1500)内，45?30min。?再次浸入混合混合碳蜡液(1500和4000等量混合液)，52?30min。?浸入等 量混合碳混合比例，如气温高湿度大可以4000:1500=3:2混合，反之，则2:3混合)。?用等量混合碳蜡或调整混合碳操作过程中，碳蜡组织块应尽量避免与水或冰接触，贮存时应密封干燥冷藏。 本法优点是操作程序减少，时间缩短，组织不经有机溶剂损害、温度低、抗原性保存比石蜡切片好，组织结续切片不如石蜡切片顺利;由于碳蜡有强吸湿性，不易长期保存。 7(玻片处理和涂胶 在免疫组化染色过程中由于各种原因常造成标本(细胞制片和组织切片)脱片现象可防止脱片现象出现。 (1)载玻片和盖玻片处理:新载玻片上有油污，必须经过清洁液浸泡12,24h，流水充分漂洗后用蒸馏水擦干或用红外线烤箱烤干均可，贮放于玻片盒内备用。盖玻片很薄，以上处理程序必须缩短，清洁液浸泡只需 (2)载玻片上涂粘附剂:粘附剂种类较多，常用的有以上几种:?树脂胶(Resin glue)又称白色乳胶，为木树脂胶较稳定，我们认为国产白乳胶(聚醋酸乙烯乳液J-北京产)质量尚稳定。使用浓度为1%,2%，以蒸馏水切片贴附后置有副醛的干燥器内，加热80?1h。?甲醛明胶， 混合后即可涂片。?铬明矾明胶， 混合后即可涂氨酸0.1g，加蒸馏水10ml，混合后即可涂片。此液不宜多配制。?3-Amino propy Eri-ethoxy Silame (APES)。 粘附剂2,5配制法见附录一。 参考文献 1(Bullock CR, et al . Techniques in immunocytochemistry, Vol 1. London New York: Academic Press, 1982 2.Coleman DV, et al. Immunoperoxidase staining tumor marker distribution studies in cytologic specimens. Acta Cy 3.Jacobsen M, et al .The effect of fixation and trypsinization on the immunohistochemical demonstration of inmaterial .Acto Path. Microbiol . Scand . ,Sect. A, 1980;88:369,376 4. Kayhko?K. Optimal fixation of the immunoperoxidase identification of human J chain from tissue sections. Histo 5.Leathem A, et al .Fixation and immunohistochemistry of lymphoid tissue.J. Clin Path, 1980;33:1010-1012 6.Martin SE,et al Immunologic methods in cytology:definitive diagnosis of non-Hodgkin’s lymphomas using imPath.,1984;82:666,673 7.Mason DY,et al, Technical aspects of lymphoma immunohistology.J. Histochem. Cytochem., 1980;28:731-745 8.Montero C.Immunocytochemistry. 2nd ed. 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Comparison of Bouin solution and buffered formalin fixation on the detection rate by in hybridizlesions. 温度的控制。 固定主要在于灌流要彻底，而不能依赖后固定。 表，那就要凭点感觉了。我的经验是组织块不要太厚，以免底部已经过冻而前面还未冻好。先用大电流快速将组织冻好，可稍过些，然后将电流调小，让组织快自然回温，若切片成渣状，则温度还过高，增加冻的电流或时间;若切片卷起或裂片，则温度过低，减少电流并等待一会儿;切片时若能铺在刀口，用毛笔转移到缓冲液中即可铺开，则温度合适，尽量迅速地把选取的部位切完。 还有几点要注意。组织后固定后在20%，30%蔗糖中沉底，否则脑片会有很多孔洞;组织块最好沾点组织胶再上冻台，否则切片过程中容易掉落;切片机要注意保护，不能断水，各部分要固定牢固，切片时不能有晃动，切片刀每次用完，要用石蜡做防锈处理，刀的质量对切片也置关重要。 一点拙见，抛转引玉而已。 (1)大鼠在室温下，戊巴比妥腹腔麻醉; (2)去毛备皮，迅速打开胸腔、暴露心脏; (3)经左心室插管至升主动脉，夹闭腹主动脉，左心耳剪开一小出口; (4)快速灌注100-200ml生理盐水冲洗至流出液清亮; (5)将预冷(4?)的4%多聚甲醛250-500 ml灌注固定(先快后慢，在 大鼠肢体伸展后减慢速度，约20-30S灌注完毕); (6)断头、开颅，取出脑组织，置于上述固定液密闭固定2-3天 (1)低温冷冻包埋:将已固定的组织用生理盐水冲洗，切取4mm*10 mm*10 mm的组织块，放入20-30%蔗糖缓冲溶液中，4?冰箱过夜，至组织沉底;将组织块放入包埋盒内，加入适量包埋剂(甲基纤维素、OCT) (2)速冻: A液氮法:将包埋盒平放在盛液氮的容器(如保温杯)内，汽化沸腾持续10-30S，即冻结成块，取出用锡箔包好，立即放入-70?至-30?低温冰箱或液氮罐备用，或迅速切片 B干冰丙酮法:200ml丙酮注入保温杯内，逐渐加入干冰至不在冒泡(可达-70?)，将组织块放入适量包埋剂的包埋盒内，将装有组织块的包埋盒放入保温杯，速冻30-60S取出 (3)切片:放置在恒冷箱切片机内切片，冠状切片， 将载玻片彻底清洗干净，涂上组织粘附剂(明胶、多聚赖氨酸等)，将切片粘于载玻片上 加关注 幸福抓痒 2005-08-23 12:26 分享 to shuaierhu 举报 ? 人民日报:打破束缚医生的“枷锁” 丁香园准中级站友 医师认证骨科 ? 55 积分 ? 8 12 得票 ? 粉丝 加关注 klc 2005-08-23 12:34 分享 上面仁兄提的灌注后的组织再后固定一下效果会更好.另外冰冻片子 不用抗原修复投票+收藏+ 举报 ? 常驻站友 医师认证普外科 ? 3 积分 ? 1 得票 ? 1 粉丝 加关注 幸福抓痒 2005-08-23 15:53 消息 引用 分享 klc wrote: 上面仁兄提的灌注后的组织再后固定一下效果会更好.另外冰冻片子 不用抗原修复 晕! 投票+收藏+ 举报 ? 丁香园准中级站友 医师认证骨科 ? 55 积分 ? 8 得票 ? 12 粉丝 加关注 野原 2005-08-23 17:19 分享 丁香园荣誉版主 ? 410 积分 ? 27 得票 ? 137 粉丝 加关注 丁香园准中级站友 医师认证骨科 ? 积分 ? 得票 ? 粉丝 加关注 qiuxuhua 铁杆站友 ? 16 积分 ? 0 得票 粉丝 加关注 Ilovemyson 2005-08-24 12:04 分享 I read some papers. All these methods were used by different people, which means noparaffin, which has extra steps. PFA may block some epitopes, so do not overfix some ti投票+收藏+ 举报 ? ? 常驻站友 ? 1 积分 ? 0 0 得票 ? 粉丝 加关注 野原 2005-08-24 12:13 消息 引用 分享 丁香园荣誉版主 ? 410 积分 ? 27 137 得票 ? 粉丝 定”并未改变蛋白质的形态，因此不需要抗原修复。 GOOD LUCK! 投票3收藏3 举报 ? 野原 2005-08-24 12:16 分享 展开引用 qiuxuhua wrote: 丁香园荣誉版主 ? 410 积分 ? 27 得票 ? 137 粉丝 GOOD LUCK! 投票+收藏+ 举报 ? qiuxuhua 铁杆站友 ? 16 积分 4 得票 ? 粉丝 加关注 野原 2005-08-24 19:37 分享 相关疾病: ? 动脉粥样斑块内你是要看泡沫细胞么,还是看粥糜样物,这个不能 称为“脂肪”，而 丁香园荣誉版主 ? 410 积分 ? 27 得票 ? 137 粉丝 加关注 铁杆站友 ? 16 积分 ? 0 2005-08-25 08:52 分享 我是想看粥糜样物，因为里边含有脂质， 所以我就把它叫成了脂肪， 惭愧-_-' 非常感谢:) 投票+收藏+ 举 报 ? 得票 ? 粉丝 加关注 zhaoyanting23 铁杆站友 ? 12 积分 ? 0 粉丝 加关注 zhaoyanting23 铁杆站友 ? 12 积分 ? 0 得票 粉丝 加关注 幸福抓痒 2005-08-25 14:23 消息 引用 分享 各自说的都不一样了。 只不过我觉得丙酮好象也有对蛋白只的固定作用，原野老大，我好象 看过，说丙酮投票+收藏+ 举报 ? 丁香园准中级站友 医师认证骨科 ? 55 积分 ? 8 得票 ? 12 粉丝 加关注 小频率 2006-02-18 22:15 分享 我一个新手，现在有一批肝脏标本，取材后并无固定直接至于,70度 冰箱中保存。免疫组化有关固定的问题 投票+收藏+ 举报 ? 入门站友 ? 0 积分 ? 0 得票 ? 0 粉丝 加关注 小频率 2006-02-18 22:15 分享 我一个新手，现在有一批肝脏标本，取材后并无固定直接至于,70度 冰箱中保存。免疫组化有关固定的问题 投票+收藏+ 举报 ? ? 【经验】有了解清华大学心胸外科吴清玉教授的吗, 入门站友 ? 0 积分 ? 得票 ? 粉丝 加关注 dongwp 2006-02-18 22:51 分享 相关疾病: ? 展开引用 zhaoyanting23 wrote: 丁香园管理员 ? 611 积分 ? 120 515 得票 ? 粉丝 举报 ? ? 【公告】德国萨尔大学医学院细胞生理学博士招聘，三年全奖(税 后1200 蜗牛2006 2006-02-22 20:13 分享 投票+收藏+ 举报 ? 入门站友 ? 0 积分 ? 0 得票 ? 0 粉丝 加关注 zzy1895 丁香园准中级站友 医师认证神经外科 ? 115 积分 ? 2006-02-25 19:44 分享 主要和固定的方式有关，甲醛固定会使蛋 白交连，封闭抗原决定簇，因而有必要用而且比较温和，对组织形态的保 存比较好。而丙酮固定组织是蛋白沉淀，因而对组存不如甲醛。但一定要 固定，否则组织会自溶的。 投票+收藏+ 举报 ? 7 25 得票 ? 粉丝 加关注 天天上火 2006-03-08 14:42 分享 举报 ? 常驻站友 医师认证心胸外科 ? 7 积分 ? 7 7 得票 ? 粉丝 加关注 彩虹色的梦