牛化脓性链球菌的分离与鉴定

牛化脓性链球菌的分离与鉴定 《上海畜牧兽医通讯》2006年第1期?37? 牛化脓性链球菌的分离与鉴定 邱立 (1西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌 2005年3月陕西省某牛场发生一头成年牛死亡,尸体解 剖发现心包扎有铁丝,心脏没有明显的病理变化;肝脏肿大. 呈棕黄色,质脆易碎,整个肝脏大部分被淀粉样物质取代;脾 脏体积增大,质地稍硬,切面干燥;肾脏体积增大.色泽变黄. 面光滑,被膜容易剥离;咽喉眼观色泽发红,有出血点及稠 液渗出,略有肿大.为了查清病因对病料进行了微生物学实 现将试验结果报道如下. 验室诊断, 1材料与方法 1.1材料 1.1.1病料来源:某牛场病死牛的肝脏,脾脏等病料. 1.1.2培养基:普通琼脂平板,鲜血琼脂平板,血清肉汤,肝 块肉汤及各种糖发酵管等生化试验用培养基均按文献…1介 绍的方法制备. 11.3药敏纸片:购于上海伊华医学科技有限公司,批号: 20040703. 1.1.4实验动物:小白鼠,家兔(西北农林科技大学实验动 物中心提供). 1.2方法 1.2.1细菌的分离与形态观察:无菌采取病料涂片,染色, 镜检,并在鲜血琼脂平板上划线分离,接种肝块肉汤.37?培 养24h.观察生长情况.可疑菌落接种于普通肉汤,再划线 于鲜血琼脂平板上.挑取单个菌落经涂片,染色,镜检,证实 为纯培养物,移入血斜面上,4"C保存备用. 1.2.2CAMP试验:在鲜血琼脂平板上接种一条金黄色葡 萄球菌的划线,与此线垂直但不要接触,二者距离3,5mnl 处接种分离的培养物,37?24h温箱培养.原来不溶血或 溶血不明显的无乳链球菌,在有金黄色葡萄球菌产物存在 时,呈现明显的B溶血,两种细菌的交界处溶血力增加,出现 箭头型溶血区.可鉴定无乳链球菌【2J. 1.2.3生化试验:用分离菌纯培养物进行糖发酵试验,按文 献介绍…的方法进行. 1.2.4药敏试验:按文献【3】介绍的纸片扩散法操作. 1.2.5动物致病性试验:用该菌37?24h血清肉汤培养 物,注射方法根据文献【4)介绍的方法进行.耳静脉注射兔 0.5ml2只,1.0ml2只,1.3nl12只,血清肉汤对照2只;小 白鼠腹腔注射0.2ml2只,尾静脉注射0.2rnl2只,呼吸道 滴入0.2ml2只,血清肉汤对照2只.分别隔离饲养. 2结果 2.1分离结果:从病死牛心脏,肝脏,脾脏均分离到一株具 有j3溶血的纯细菌培养物,经鉴定为化脓链球菌. 2,2培养特性及染色特征:鲜血琼脂平板培养37?24h, 菌落中等大小,灰白色,圆形,中央隆起,边缘整齐,光滑湿 润,呈现B溶血.普通琼脂平板生长不良,菌落微小,灰白 色.血清肉汤37?培养24h,肉汤变混浊.镜检为革兰氏阳 性球菌,成对或短链状.肝块肉汤未分离到厌氧菌. 2.3CAMP试验:在金黄色葡萄球菌与分离的纯培养物相 邻近处没有明显的溶血现象,呈阴性. 2.4生化试验,药敏试验:结果如表l,2所示 2,5动物致病性试验:注射24h后小白鼠和家兔表现精神 沉郁.活动减弱,呼吸急促,背毛逆立,采食减少;48h动物基 李罡 7121002西安市畜牧兽医中心710061) 本恢复正常活动;72h后解剖,涂片,染色,镜检可见该菌,分 离培养可得到该菌纯培养物. 表1分离株生化试验结果 测定项目结果测定项目结果 6.5%N棚一葡萄糖+ 马尿酸钠一肝糖一 甘辱酵一肌醇一 山梨醇一树胶醛糖一 乳糖+D一果糖+ 棉实糖一D一木糖+ 海藻糖+卫矛醇一 水扬苷+木胶糖, 半乳糖+L一阿拉伯糖一 注:"+"表示阳性反应,"一"表示阴性反应. 表2分离株药敏试验结果 抗生素种类抑菌环直径(tnm)抗生素种类抑苗环直径(n1n) 氨苄肯霉素26庆大霉素6 妥布霉素6头孢呋新l8 红霉素12丙氟哌酸20 头孢唑啉30头孢三嗪22 青霉素26氟哌嗪膏霉素2O 头孢噻肟30链霉素6 复合磺胺13氯霉素8 丁胺卡那12头孢哌酮25 头孢他啶14卡那霉素6 氟哌酸l3呋喃妥团6 四环素12苯唑青霉素i6 利福平25万古霉素18 注:抑菌环直径d>20为高敏,15?d?20为中敏,d<15为耐药;d =6为药敏片直径. 3讨论 3.1根据剖检病理变化及实验室检查结果,初步鉴定此分 离菌株为化脓链球菌.由于本次试验未做血清学等方面的 检验,没有确定分群和血清型,因此对本菌的鉴定有待于进 一 步研究. 3.2几乎所有的A群和大多C,G群链球菌均有溶血索O 和溶血素s,静脉注射小白鼠和家兔可迅速死亡(引.而本试 验中对小白鼠和家兔没有致病性,但却分离到该菌,原 因可能由于本菌在实验室鉴定过程中传代次数过多,使得毒 力减弱;菌株在传代过程中可能发生变异;本菌可能不产生 溶血素,但却是牛死亡的一个诱困.但也有可能是试验动物没 有使用幼龄动物,本身有链球菌抗体存在,导致动物未发病. 3.3牛心包扎有异物铁丝,死亡后从实验室分离到一株细 菌,由于条件有限未对病料进行其它微生物方面诊断,牛的 死亡原因有待进一步研究. 参考文献 [1]李健强,李六金.兽医微生物学实验实习指导[M].西安:陕西科 学技术出版社,1999 [2]陆承平.兽医微生物学(第三版)[M].北京:中国农业出版社, 2001.204,2l2 (3]韩文瑜,何昭阳.刘玉斌.病原细菌检验技术[M].吉林科学技术 出版社.1992,79~84 [4]刘宝全.兽医生物制品学[M].中国农业出版社,1995,36--38