临产前后母血、羊水EGF、PGE_2变化及其对胎盘组织BCL_2表达的影响

临产前后母血、羊水EGF、PGE_2变化及其对胎盘组织BCL_2达的影响 临产前后母血、羊水EGF、PGE_2变化及其对胎盘组织 BCL_2表达的影响 0>.投稿赚钱 现代妇产科进展 2005年 3 月第 14卷第 2 期 Prog Obstet Gynecol,Mar. 2005, Vol. 14, No. 2 ??论 著 ?? 临产前后母血、羊水 EGF、PGE 变化及其 2 对胎盘组织 bcl2表达的影响 张有成 ,胡科丽 ,安金华 ,周 曼 ,刘黔霖 贵州省人民医院产科 ,贵阳 550002 【摘要 】 目的 : 探讨临产前后母血、羊水中表皮生长因子 EGF 、前列腺素 E 2 PGE 浓度的变化及其对胎盘滋养层细胞 bcl2 蛋白表达的影响。方法 :足月妊娠 53例 2 分成两组 , 临产组 28 例 , 未临产组 25 例。用放射免疫法测定孕妇母血、羊水中 EGF、 PGE 的浓度 ,用免疫组化法测定胎盘滋养层细胞 bcl2 蛋 白的表达。结果 : 1 临产组母 2 血、羊水中 EGF、PGE 水平均高于未临产组 P 0 05 ; 2 临产组胎盘滋养层细胞 bcl2 2 的蛋白表达明显低于未临产组 P 0 05 ; 3 母血、羊水中 EGF 的浓度与 PGE 的浓度 2 变化呈明显的正相关。母血、羊水中 EGF、PGE 的浓度变化与 bcl2 蛋白表达呈负相关。 2 结论 : EGF及 bcl2 介导的胎盘滋养层细胞凋亡在启动分娩发动过程中具有重要作用 ;且 EGF可能通过 PGE 影响 bcl2 的表达。 2 【关键词 】 表皮生长因子 ;前列腺素 E类 ;胎盘 ;细胞凋亡 ; bcl2 中图分类号: R714. 1 文献标识码 : A 文章编号 : 1004 - 7379 2005 01 - 0100 - 04 The effects of the concen tra tion s of EGF and PGE in ma terna l blood and amn iotic flu id 2 on the expression of bcl2 in placen ta on labor on set. Zhang Youcheng, Hu Keli, A n J inhua. D epartm ent of O bstetrics, The People ′s Hospital of Guizhou, Gu iyang 550002 【Abstract 】 O bjective: To investigate the changes of the concentrations of ep idermal growth factor EGF and p rostaglandins E PGE in maternal blood and amniotic fluid on 2 2 laber onset, and their influences on the exp ression of bcl2 p roteins in p lacental trophoblastic cells. M ethods: Fiftythree women in term p regnancy were divided into two group s. One group on the time of labor onset were twentyeight women. Another group not on the time of labor on set were twentyfive women. The concentrations of EGF and PGE in maternal blood and amniot 2 ic fluid were detected by radioimmune assay. The exp ression of bcl2 p rotein in p lacental troph .投稿赚钱 oblastic cells was detected by immunohistochem ical assay. Results: 1 The concentrations of EGF and PGE in maternal blood and amniotic fluid in labor onset group were higher than those 2 of not labor onset group P 0. 05 . 2 The exp ression of bcl2 p rotein in labor onset group was significantly lower than that of the group not labor onset P 0. 05 . 3 There was a posi tive correlation between the concentrations of EGF and PGE in maternal blood and amniotic 2 fluid, but the exp ression of bcl2 p rotein had a negative correlation with the concentrations of EGF and PGE respectively. Conclusion: It is considered that EGF and the apop tosis of p lacen 2 tal trophoblastic cells induced by bcl2 may p lay an important role in the initiation of labor on set. EGF may influence the exp ression of bcl2 by PGE . 2 【Key words】 Ep idermal growth factor, Prostaglandin E; Placenta; Apop tosis; bcl2 目前 ,有关细胞因子与分娩动因关系的研究中 , 儿在体内直接接触的部位 ,在妊娠的维持中起着重 前列腺素的作用已得到实验证实 ,其它因子可能都 要的作用 ,但它在分娩中的作用目前尚不清楚。研 是通过前列腺素作用于分娩过程的。胎盘作为母、 究表明 ,孕晚期胎盘存在细胞凋亡 ,而一些细胞因子 10 0 .投稿赚钱 现代妇产科进展 2005年 3 月第 14卷第 2 期 Prog Obstet Gynecol,Mar. 2005, Vol. 14, No. 2 与分娩发动密切相关 ,可以推测 ,这些细胞因子与胎 理。根据资料性质 ,分别采用 t检验或 t′检验;两因素相关性 用直 线相关分析。结果以 x ?s表示。 盘凋亡可能有关。表皮生长因子 EGF 在妊娠及分 娩中的作用近年逐渐受到重视 ,而 bcl2 是调控细胞 2 结 果 2. 1 两组母血、羊水中 EGF、PGE 结果 两组 凋亡的主要基因 ,本课题试图通过检测正常足月妊 2 母 血、羊水 EGF、PGE 检测结果显示 , 临产组母血、 2 娠妇女临产前后母血、羊水中表皮生长因子 EGF 羊水 中 EGF、PGE 值明显高于未临产组 ,差异有显 及前列腺素 E PGE 浓度以及胎盘 bcl2 的表达 , 2 2 2 探讨分娩发动时细胞因子与胎盘凋亡之间的关系。 著性 P 0 05 ,见表 1。 表 1 两组母血、羊水中 EGF、PGE 浓度比较 x ?s 1 资料与方法 2 1 ρ 1 ρ PGE /pg ??mL 1. 1 临床资料 53 例足月妊娠住院孕妇根据临产状态分 组别 n EGF /pg ??L 2 母血 羊水 母血 羊水 为未临产组及临产组。分类参照乐杰主编的第 5版《妇 临产组 28 139 ?048 117 ?0331 470 6 ?618 78843 ?1100 未临 产组 25 102 ?042 0 82 ?049 300 9 ?29 2 2154 4 ?1529 产科学 》。 1 未临产组 25例 ,为骨盆狭窄或社会因素要求 剖宫产者 ,胎心监护仪显示无宫缩 ,肛查宫口未开 ; 2 临产 P 005 vs未临产组 组 28例 ,均为经阴道自然分娩。两组产妇均无病理妊娠及 2. 2 两组胎盘绒毛滋养细胞计算机扫描定量分析 妊娠并发症 ,产程中无特殊用药。入院时肝、肾功能检查正 结果 两组平均扫描视野和扫描面积差异有显著性 常 ,两组产妇年龄、产次、孕龄及新生儿体重差异无显著性 P 0 05 。平均灰度及阳性细胞率见表 2。 P 0 05 。 表 2 两组胎盘 bcl2基因表达的比较 x ?s 1. 2 方法 组别 n 平均灰度 阳性细胞率 1. 2. 1 标本采集及处理 临产组于宫缩进入活跃期后抽取 临产组 28 9129 ?1166 048 ?017 未 临产组 25 99 95 ?927 0 64 ?013 产妇肘正中静脉血 4m l, 2m l分离血清 ,备测 EGF; 另 2m l加 P 005 vs未临产组 入消炎痛 EDTA 液 01m l, 4?, 3000 r/m in, ×10m in,分离血 2. 3 母血、羊水中 EGF与 PGE 浓度的关系 分别 浆 ,备测 PGE 。分离样本标记后置70 ?冰箱保存。并于人 2 2 工破膜时经前羊膜囊穿刺取羊水 4m l, 4 ?, 3000 r/m in, × 对母血及羊水中 EGF、PGE 放免值作直线相关分 2 5m in后 ,取上清 ,分装两管 ,标记后置 70 ?冰箱保存。未临 析 ,表明母血、羊水中 EGF 的浓度与 PGE 的浓度变 2 产组于术前取血及术中切开子宫下段肌层后经胎膜取羊水 , 化呈 明显的正相关。相关系数有统计学意义 P 取法及处理同上。胎盘娩出后立即在母体面中央及四周边 005 。 缘部各剪取组织 1cm ×1cm ×05cm,用生理盐水漂洗干净 , 2. 4 母血、羊水中 EGF、PGE 浓度与 bcl2 表达的 2 中性甲醛固定 24h, 梯度酒精脱水 ,二甲苯透明 ,浸蜡 ,石蜡 关系 母血、羊水中 EGF、PGE 放免值分别与 bcl2 2 包埋。 平均 灰度及阳性细胞率作直线相关分析 ,表明母血、 1. 2. 2 放免法检测 PGE 、EGF 采用非平衡法测定血浆和 2 羊水 中 EGF、PGE 浓度分别与 bcl2 平均灰度及阳 羊水中的 PGE 浓度及血清和羊水中的 EGF浓度 , PGE 药 2 2 2 性细 胞率呈显著负相关 ,直线相关系数有统计学意 盒由解放军总医院东亚放免所提供 , EGF药盒由北京原子能 义 P 0 05 。 研究所提供。 3 讨 论 .投稿赚钱 1. 2. 3 免疫组化法 IHC 检测胎盘滋养层细胞 bcl2 的表 3. 1 EGF 与 PGE 在分娩发动中的关系 EGF 是 达及计算机图象扫描分析 1 IHC染色 SP法 :试 剂盒由福 2 μ 一 种自分泌或旁分泌并对多种细胞生长、分化以及 州迈新生物技术公司提供。标本制成 4 m 切片 , 二甲苯脱 蜡 ,梯度乙醇水化 ,高温高压修复抗原 , 内源性过氧化物酶阻 功能起调节作用的因子 [ 1 ] ,在啮齿类动物的体外实 断 10m in, PBS洗 3 ×5m in,非免疫源性动物血清 10m in, PBS 验中 ,发现 EGF 具有刺激子宫收缩的作用 ,包括快 洗 3 ×5m in,一抗 4 ?冰箱过夜 , PBS洗 3 ×5m in,生物素 化二 [ 2 ] [ 3 ] 速发 动节律收缩和增加基础张力 。Gilmar 等报 抗 10m in, PBS洗 3 ×5m in,链亲和素 过氧化物酶 10m in, PBS 道 , EGF具有促进羊膜细胞前列腺素合酶 p rosta 洗 3 ×5m in, DAB 显色 ,苏木素复染 ,盐酸乙醇分化 , 自来水 glandin H - synthase, PGHS 活性升高的作用 , 并可 返蓝 ,中性树胶封片; 2 计算机图象扫描分析 :用 15400计 激活环氧化酶和脂氧化酶通路 ,导致局部 PGs合成 算机图象分析仪 四川大学 对切片进行图象分析。每张切 增多。因此认为 , EGF 的这种作用是通过前列腺素 片随机选取 10个绒毛 ,分别计算单个绒毛阳性细胞总面积 实现的。 及绒毛合体滋养细胞 ,细胞滋养细胞 , 间质细胞的总扫描面 前列腺素 p rostaglandins, PGs 为人体多种生理 积 ,总灰度参数 ;用阳性细胞率 阳性细胞总面积 /总扫描面 及病 理代谢调节的中介物。对生殖系统有较强生物 积 及平均灰度 总灰度 /总扫描面积 代表 bcl2表达强度。 学效 应的前列腺素有 PGE 、PGE 、PGF α[ 4 ] 。这 3 1. 2. 4 统计学处理 数据用 SPSS 100 统计学软件包处 1 2 2 101 .投稿赚钱 现代妇产科进展 2005年 3 月第 14卷第 2 期 Prog Obstet Gynecol,Mar. 2005, Vol. 14, No. 2 类物质在孕妇的血液、尿液、羊水中均可检出 ,且含 李小毛等证实 ,临产孕妇胎盘绒毛滋养细胞凋亡指 量随着孕周的延长而增加。研究表明 ,人胎膜局部 数为 49 21 ?2 39, 明显高于未临产组的 41 48 ? 释放的 PGE 可引起子宫平滑肌收缩和宫颈成熟 , 197[ 9 ] , 以上研究结果表明, bcl2 介导的胎盘滋养 2 且其促宫缩作用比缩宫素强 [ 5 ] 。羊膜是合成 PGE 层细胞凋亡是分娩发动中存在的一种正常现象 ,并 2 的主要部位 , 这与羊膜层主要表达 PGHS 活性有 可能在参与启动分娩发动方面起重要作用。 关 [ 6 ] ,绒毛膜中也有少许 PGHS活性。 3. 3 EGF、PGE 与 bcl2 表达的关系 bcl2 的阳 2 本研究结果表明 ,两组足月妊娠产妇母血、羊水 性细胞率、平均灰度分别与母血、羊水中的 EGF、 PGE 浓度进行相关分析后发现 ,凋亡基因 bcl2 在 中 EGF均高于 081 ?043 的正常值 北京原子能 2 [ 7 ] 胎盘的表达与母血、羊水中的 EGF、PGE 的量呈显 研究所 EGF 药盒 , Hoffmann等的实验结果 与本 2 结果一致。EGF是维持胎儿生长必须的调节因子 , 著的负相关 P 0 05 ,表明 EGF、PGE 可能对 bcl 2 因此 ,妊娠末期 EGF升高可能是胎儿成熟的一项标 2 的表达存在负性调节作用。前列腺素可诱导足月 志 ,但升高的原因目前尚不清楚。进一步对两组母 妊娠胎盘滋养层细胞发生凋亡 ,其同源类似物也有 血、羊水中的 EGF 浓度作统计学分析 ,表明临产组 相同作用 [ 10 ] ,而 EGF有促进前列腺素合成的作用。 明显大于未临产组 ,差异有显著性 ,并且分别与母血 本实验结果表明 , EGF 是通过促进 PGE 的合成而 2 及羊水中的 PGE 浓度呈明显的正相关 ,表明临产 增加滋养层细胞凋亡的。而 Sheng等通过实验证 2 状态下、母血及羊水中的 EGF 浓度增高 ,并且临产 实 ,在人体的胃肠道等部位 , PGE 的促凋亡作用是 2 后高浓度的 EGF可能促进 PGE 合成的增加。根据 通过抑制 bcl2 的表达实现的 ,并且可能也适用于其 2 本实验研究结果可作出如下解释 , 临产后 ,一方面 , 他组织 [ 11 ] 。本实验中 , EGF、PGE 与 bcl2 呈明显 2 羊水中高浓度的 EGF 可促进羊膜细胞 PGHS 活性 的负相关 ,因此 , EGF通过 PGE 增加滋养层细胞凋 2 升高 ,并可激活环氧化酶和脂氧化酶通路 ,导致局部 亡的作用可能也是通过抑制 bcl2 基因的表达实现 特异的 PGE 产生增多。另一方面 ,在绒毛膜、母血 的。 2 中的 EGF通过与其受体结合 ,能诱导脂皮质激素的 我们只研究了分娩发动时 EGF、PGE 两个细胞 2 磷酸化 [ 3 ] ,使磷脂酶 A2 的活性增加 , 因此 ,有效 地 因子与胎盘细胞凋亡之间的关系 ,与分娩相关的细 增加了 PGE 的前体游离花生四烯酸 ,使 PGE 的合 胞因子还有很多 ,如雌激素、孕激素、缩宫素、皮质醇 2 2 成也增加。临产后母血中 PGE 浓度的升高是 否为 等 ,它们在分娩发动中与胎盘细胞凋亡是否有关尚 2 EGF直接通过母体途径作用的结果 , 尚无直接的实 不清楚。目前的研究表明 ,与分娩相关的细胞因子 验证据 ;是否为蜕膜中的 PGE 反向弥散到母 血 ,也 都是通过前列腺素参与引起分娩发动的。因此 ,它 2 有待进一步证明。但最终升高的 EGF通过 PGE 的 们是否也能通过前列腺素引起胎盘细胞凋亡值得探 2 作用促进宫颈成熟、诱发宫缩 ,从而参与引起分娩发 讨。而且 ,这些因素也与病理妊娠密切相关。因此 , 动。 有关这方面深入的研究 ,必将有助于揭示分娩发动 3. 2 bcl2 的表达与分娩发动的关系 bcl2 是 胎 .投稿赚钱 的机理 ,并为病理妊娠的治疗提供新的思路。 盘凋亡的抑制基因 [ 8 ] ,其主要功能为延长细胞生命 参 考 文 献 并增强细胞对凋亡刺激因素的抗性。在 bcl2 高表 达的组织 ,细胞凋亡相对较少 ,低表达的组织 ,细胞 [ 1 ] U llrich A, Coussens L, Hayflick JS, et al. Human ep ider 凋亡则增多。我们应用免疫组化 SP法对两组胎盘 mal growth factor recep tor cDNA sequence and aberrant 绒毛滋养层细胞进行染色 ,光镜下 ,见 bcl2 主要定 exp ression of the amp lified gene in A431 ep idermoid car 位于合体滋养细胞 ,阳性颗粒分布于胞膜及胞浆上 , cinoma cells[ J ]. Nature, 1984, 309: 418425 阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布。临产组及未临产 [ 2 ] R ibeiro ML, Farina M , A isemberg J. Effects of in vivo ad m inistration of ep idermal growth factor EGF on uterine 组均有 bcl2 表达 ,通过图象分析将染色结果量化 contractility, p rostaglandin p roduction and tim ing of partu 后 ,见未临产组 bcl2表达的阳性细胞率及平均灰度 rition in rats[ J ]. Rep roduction, 2003, 126 4 : 459468 高于临产组 P 0 05 ,证明未临产组 bcl2 表达明 [ 3 ] Gilmar JS, Hansen WR,M iller HC, et al. Effects of inter 显高于临产组。表明分娩发动状态下 , bcl2 的表达 leukin4 on the exp ression and activity of p rostaglandin 减少。由于 bcl2 降低使它对胎盘滋养细胞的抑凋 endoperoxide H synthase2 in amnionderived W ISH cells 亡作用减弱 ,从而可能使细胞凋亡增加。我国学者 [ J ]. J Mol Endocrinol, 1998, 21: 317325 102 .投稿赚钱 现代妇产科进展 2005年 3 月第 14卷第 2 期 Prog Obstet Gynecol,Mar. 2005, Vol. 14, No. 2 [ 4 ] Giannopoulos G, Jackson K, Kredentser J, et al. Prosta ner m itochondrial membrane p rotein that blocks p ro glandin E and F α recep tor in human myometrium during grammed cell death[ J ]. Nature, 1990, 348: 334336 2 the menstrual cycle and in p rengnancy and labor[ J ]. Am [ 9 ] 李小毛 ,沈慧敏 ,谌小卫 ,等. 产程中胎盘胎膜细胞凋 J Obstet Gynecol, 1985, 153: 904910 亡的变化 [ J ]. 中山医科大学学报 , 2000, 21: 337340 [ 5 ] Shetty A, L ivingstone I, Acharya S. A random ised compar [ 10 ] Keelan JA, Sato TA. 15 DeoxyDelta 12, 14 p rosta ison of oral m isop rostol and vaginal p rostaglandin E tab glandin J 2 , a ligand for peroxisome p roliferatoracti 2 lets in labour induction at term [ J ]. BJOG, 2004, 111: 436 vated recep torgamma, induces apop tosis in JEG3 chorio 440 carcinoma cells [ J ]. B iochem B iophy Res Commun, [ 6 ] Moore JJ,Moore RM , Collins PL. Protein kinase A activa 1999, 62: 579585 tors inhibit agonist induced p rostaglandin p roduction in [ 11 ] Sheng H, Shao J,Morrow JD, et al. Modulation of apop to human amnion [ J ]. Prostaglandins Leukot Essent Fatty sis and bcl2 exp ression by p rostaglandin E2 in human Acids, 1993, 48: 355 361 colon cancer cells. [ J ] Cancer Res, 1998, 58: 362366 [ 7 ] Hoffman GE, Abramowicz JS. Ep idermal growth factor 收稿日期 2004 0517 EGF concentration in amniotic fluid and maternal u rine during p regnancy[ J ]. Acta Obstet Gynecol Scand, 第一作者简介 :张有成 1971 - ,男 ,贵州省人民医 院产科 1990, 69: 217221 医师 ,硕士研究生。主要研究方向 : 围产医学。E - mail: [ 8 ] Hochenberg D, Nunez G,M illiman C, et al. BCL 2: An in zhangyoucheng489@ sohu. com 4+ 月妊娠保胎治疗诱发卵巢黄素囊肿误诊卵巢恶性肿瘤 1例 山东省齐河县妇幼保健院 靳明兰 朱秀华 患者 29 岁 ,孕 3产 0。因停经 4 + 月 ,反复阴道流血 ,检查发现“卵巢肿瘤 ”于 2004年 9 月 12 日收入院。患者平素体健,月 经规律 ,婚后在停经 50 + d 时自然流产 2 次。末次月经 2004 年 5 月 10 日,停经 40d 出现早孕反应 ,尿 HCG试验阳性。停经 45d 时无明显诱因出现少量阴道流血 ,伴轻微下腹痛。辅助检查示血孕酮值低水平 ,肌注黄体酮 20mg, 1 次 /d ×7d, 阴道流血 量减少但未停止 , B超示胚囊 32mm ×29mm, 内见胚芽,有胎心搏动 ,双侧附件区未见异常。遂注射 HCG 1000U /d, 阴道流血停 止后继续治疗至妊娠 3个月 ,改用多力妈 5mg/d巩固治疗 10d。患者于妊娠 4个月时 ,复查 B 超 ,示胎儿双顶径 4 0cm,胎心搏 动良好 ,符合 17周妊娠。双侧卵巢呈囊性增大 ,左侧 67cm ×60cm ×58cm,右侧 61cm ×50cm ×46cm, 内见多条分隔,可 见散在血流信号。以妊娠合并卵巢肿瘤收入院 ,查体 : T 367 ?, P 88次 /m in, R 22 次 /m in, BP 120 /80mmHg,体重 60kg,营养中 等 ,全身浅表淋巴结未触及 ,双肺呼吸音清晰 ,心率 88 次 /m in,律齐 ,腹部膨隆 ,子宫如妊娠 4 + 月大 ,宫底脐下 3 指 ,胎心 150 9 9 次 /m in,两侧附件未扪清。辅助检查 :血 WBC 9 0 ×l0 /L, N 0 76, Hb 89g/L, PLT 135 ×10 /L;尿分析正常 ;肝肾功能及电解质 .投稿赚钱 均正常 ;凝血 4项 : PT 125 s, APTT 354 s, TT 15 s, F IB 24g;外院化验示血 CA125 262U /m l。经全科讨论认为 ,患者两次 B 超 时间仅间隔 2 + 月 ,发现附件区包块为双侧 ,且生长迅速 ,卵 巢恶性肿瘤不能排除 ,具有手术指征 ,但考虑到手术对妊娠的不良 影响 ,暂观察 1周 ,复查 B 超见双侧附件区包块较入院时增 大。于 9 月 19 日在硬膜外麻醉下行剖腹探查术。术中未见腹水, 子宫如孕 4 + 月大 ,双侧卵巢呈囊性增大 ,左侧 7cm ×6cm ×6cm,右侧 6cm ×5cm ×5cm,囊壁较薄 ,囊肿表面光滑 ,与周围 组织 无粘连。抽吸囊液时发现囊肿系多房 ,囊液清澈 ,行部分囊块切 除并送快速病理。结果为卵巢良性病变。缝合切面 ,依次关 腹。术后抗生素预防感染 ,切口 7d拆线 , ?期愈合。病理报告为双侧卵巢黄素囊肿。患者于2005 年 2 月 6 日临产, 因 “38 + 3 周妊娠 ,胎儿窘迫 ”行剖宫产术娩出一女婴 ,重 2450g,新生儿 外观发育正常。术中见左侧卵巢 7cm ×6cm ×5cm,右侧卵巢 6cm ×5cm ×4cm,均行穿刺吸液。产后一个月随访 B 超示双侧卵 巢恢复正常。 讨 论 黄素囊肿多见于葡萄胎患者 ,正常妊娠较少见 ,是由于大量 HCG刺激卵巢卵泡内膜细胞发生黄素化而形成的囊 肿 ,常为双侧 ,直径可达 20cm 以上。囊肿表面光滑 ,多房 ,囊壁薄 ,囊液清澈。此例因先兆流产 ,先后应用黄体酮、HCG、多力 妈保胎治疗。多力妈主要成分是烯丙雌醇 ,可促进内源性孕酮及 HCG分泌 ,在大量的内源及外源性 HCG刺激下形成黄素囊 肿。提示基层医务人员保胎治疗过程中应注意用药剂量及时间 ,保胎治疗中出现双侧卵巢囊性肿块 ,应首先想到本病的可 能 ,辅以监测 HCG及睾酮 , 以协助鉴别诊断,避免误诊、误行手术加重患者的痛苦。 收稿日期 2004 0507 103