饲料中维生素A和维生素E含量的测定

饲料中维生素A和维生素E含量的测定 AE 1- 将具有代性的样品皂化井用己烷抽提后，用HPLC分析。维生素E在 292nm测定，维生素A在325nm测定 2- 全部过程中必须戴护目镜 特别应注意: -溶剂的挥发性气体，应在通风橱内工作 -具腐蚀性的试剂，例如强酸和强碱 3- 全部使用分析纯试剂;水必须是蒸馏水或相当品质 3.1- 3.2- 3.2.1-50%(质量/质量)氢氧化钾水溶液 3.3- 3.4- 3.5-=1.83 3.5.1-80%(质量/质量)硫酸溶液 3.6- 3.7- 3.7.1-5%碳酸氢钠水溶液 3.8-HPLC 3.9-HPLC2- 3.10-A 3.1l-E(a-)FLUKA Ref.No.95 240 4- -可在325nm处测定的紫外分光光度汁 -常规实验室玻璃器皿和用具 -专用特制玻璃器皿 (附图 -HPLC，装备有泵，自动取样器，进样器和能在325nm处进行检测的 检测系统 -旋转蒸发仪 -水浴锅 5- 注意:不能在自然光，荧光或氖灯下操作，而且要隔绝与空气的接触 (抽提是在充氮条件下进行，玻璃器皿为可吸收紫外线的棕色器皿，照明 为白炽灯，或在窗户上装备了紫外滤光屏卜 5.1- 5.1.1-维生素A醇液 -精确地 (土0.01毫克)称取约含有25，侧灿的维生素A乙酸酷(3.10)。 -将维生素A乙酸酷转移至1叨毫升的沸腾管(见附图1)中; -加入25毫升乙醇(3.3)和3毫升氢氧化钾溶液(3.2.1); -在沸腾管「加上冷凝管，在水浴锅上沸腾叨分钟; -冷却，用己烷(3.4)抽提数次. 用己烷(3.4)稀释，使最终浓度达10-15 IU/毫升; -准确测定该溶液所含有的视黄醇浓度，测定方法是用光径为1厘米的 石英比色怀测定此溶液在325皿处的光吸收值 (A)，用已烷 (3.?4)作 空白对照: 用公式计算: 含量C(m/毫升卜Axl8?3 5.1.2-维生索E醇标准物溶液 -精确地称取 25毫克=0，01毫克的维生素E醇(3.11 放入50毫开容量瓶; -用已烷(3.4)定容至刻度; -用取液器取该溶液5毫升，放入另一个50毫升容量瓶中 -用已烷(3.4)定容至刻度; 5.1.3-待测样品液-溶液A和溶液E -称取研磨的极细的样品200克+-0.1克，放人2升的容量瓶中; -加入1升乙醇(3.3)和 100毫升氢氧化钾溶液(3.2.1); -把容量瓶称重; -记录质量M1; -摇动; -在容量瓶「加上水流冷凝管.将其放在容量瓶加热器上加热，煮沸25 分钟; -用水流冷却至溶液平静为止; -加入乙醇(3.3)使其质量重新达到MI -取上清液50毫升放人沸腾管(附图1)中; -加入40毫升水月4x30毫升已烷(3.4)抽提; -将抽提物放人分液漏-斗，用2x100毫升冰洗涤至中性; -在无水硫酸钠(3.6)上过滤 -蒸发毛干燥，迅速溶解于25毫开己烷; -取5毫升该溶液用于维生素A的测定:该溶液为溶液A. -在剩下的20毫升溶液中加入20毫升已烷，转移至100毫升沸腾管中; -加入10毫升80%硫酸溶液(3.5.1); -振荡完全; -待溶液完全静止后，将巳烷层转移至分液漏斗; -用4x30毫升巳烷(3.4)抽提硫酸层 -把所有己烷抽提液放人分液漏斗中?用5毫升无水碳酸氧钠溶液(3.7.1) 冲洗，然后用2x200毫升水冲洗直至中性; -在无水硫酸钠上过滤; -蒸发至干燥，然后迅速用准确容量的己烷(Ve)溶解(记录Ve)使最终维 生素E醇类的浓度约为0.05毫克/毫升:该溶液为溶液E. 5.2-色谱分析 -维生素A -按附图2所示加入标准液(5.1.1)不溶液A. -维生素E -按附图2所述注入标准液A(5.1.2)和溶液E 6- 维生素A(IU/克) 变量: C=标准液 (5?1?1)的浓度含量，弟位为因际单位IU叨/毫开 Ar(反式)=朋标准液 (5?1?1)所得到的全反式视黄醇的蜂的面积 Ae(反式)=溶液A所得到的反式视黄醇的峰的面积 Ae(顺式)=溶液A所得到的顺式视黄醇的峰的面积 Ve=待测液的最终体积25毫升) Me=样品的质量，单位为克 1.087=13-顺式视黄醇的响应参数 1100=皂化反应中的总体积 50=抽提所用的体积 C[Ae(反式)+1.087xAe(顺式)lx Ve x1100 维生素A含量 (IU/克) = Ar(反式)x 50 xMe 维生素E乙酸醋(毫/肘克) 变量: P=维生素E醇类标准液 (3.11)的浓度含量 Mr(反式)二溶液 (5.1.2) 中所含的维生素邱 享类标准物的质量，单位为毫克 Ae=待测溶液E所得到的维生素E的峰的面积 Ve=侍测溶液酣 勺最终体积 Vr=际准液(5?1?2)的最终体积(通常为5叨毫升) Ar=用际准液(5?1?2)所得到的维生素E醇类物的峰的面积 Me=样品的质最，兑位为克 1100=皂化反应中的总体积 50=抽提所用的体积 1.25=纯化之前的体积与硫酸抽提体积之比，本文中应为25:20??25 1.1=分子最的校正系数(维生素E乙酸酯/维生素E醇类) P x Mr x Ae x Ve x 1100 x 1?25 x 1.1 维生素E含最(毫克/克) = Vr x Ar x Me x 50