血清尿素氮的测定[方案]

血清尿素氮的测定[] 血清尿素氮的测定 【目的】 1. 了解血清尿素氮测定的方法及临床意义。 2. 复习尿素的生成机理及其意义。 【实验原理】 血清(或血浆)中的尿素，在尿素氮试剂的酸性环境中与二乙酰-肟(DAM)共沸后，可缩合成一红色化合物，称为fearon反应。其颜色的深浅与血清(或血浆)中尿素的含量成正比，与同样处理的尿素氮液比色，即可测算出血清 (或血浆)中尿素氮的含量。 【实验材料】 1.器材 刻度吸管(0.1ml、2ml、10ml) 恒温水浴箱 分光光度计 2.试剂 (1)待测血浆 (2)尿素氮试剂 (3)二乙酰-肟试剂 (4)尿素氮标准液 【操作步骤】 取试管三支按下表操作 试 管 测定管 标准管 空白管 试剂(ml) 1:4稀释血清(或 0.1 血浆) 尿素氮标准液 0.1 (0.02mg/ml) 蒸馏水 0.1 二乙酰-肟 0.5 0.5 0.5 尿素氮试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴中加热15min，立即用自来水冷却5分钟。分光光度计选用540nm波长，以空白管调零点，读取各管吸光度。 计算及结果 测定管吸光度 尿素(mg%)= 标准管吸光度 ×尿素氮标准液浓度*5(mg/ml;mg/100ml) 【注意事项】 1. 此法灵敏度高，用量极微(一般只需0.02ml血清即可)。本实验是先将血清用生理水以1:4加以稀释再取0.1ml，故最后计算时，应乘以稀释倍数“5” 2. 试剂中加入硫胺脲和镉离子，可增进显色强度和色泽稳定性，但仍有轻度褪色现象(小于5%/h)。 3. 此法操作简单，特异性强，不受其他非蛋白质含氮 化合物如尿酸、肌酸等影响，但应控制好实验条件。 4. 吸管必须校正，使用时务必注意清洁干净，加量务必准确。 5.尿液中的尿素氮也可用此法进行测定。由于尿液中尿素氮含量高，标本需用蒸馏水以1:50稀释。如果呈色后吸光度仍超过本法的线性范围，还需将尿液再稀释，重新测定。 【思考题】