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真蛋白的检测方法

2019-01-17 6页 doc 19KB 120阅读

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真蛋白的检测方法测定的流程是,称取0.2-0.5g风干的植物材料,放入100ml烧杯中,加入50ml水,煮沸5min,在40-50℃下保温30min。徐徐加入10ml6%硫酸铜,摇匀,静置l h(或过夜)。过滤,残渣按凯氏定氮法将残渣消化,蒸馏,测定收集液中氨,计算得出含氮量。 饲料中真蛋白的测定及其意义 饲料是畜牧养殖生产中的重要生产资料,饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标,饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质,后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、氨等,故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。目前,部分养殖场户...
真蛋白的检测方法
测定的是,称取0.2-0.5g风干的植物材料,放入100ml烧杯中,加入50ml水,煮沸5min,在40-50℃下保温30min。徐徐加入10ml6%硫酸铜,摇匀,静置l h(或过夜)。过滤,残渣按凯氏定氮法将残渣消化,蒸馏,测定收集液中氨,计算得出含氮量。 饲料中真蛋白的测定及其意义 饲料是畜牧养殖生产中的重要生产资料,饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标,饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质,后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、氨等,故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。目前,部分养殖场户存在一个认识误区,认为标签上标注的粗蛋白质高,营养价值就高。为此,部分饲料生产 企业利用人们认识上的误区,在饲料生产中添加羽毛粉、血粉、尿素等不易被动物肌体吸收的物质,饲料产品中粗蛋白含量上去了,但却没有相应的营养价值,造成养殖效益的低下。漯河市畜产品质量安全监测检验中心成立以来 ,每年要对送检的1000多个饲料样品进行蛋白质的测定,对如何测定饲料中真蛋白的含量、 有哪些注意事项,有了一些亲身的感受和认识,现提出与大家共同讨论、互相学习: 1适用范围 本操作方法适用配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 2 原理 样品在水溶液中,加入过量硫酸铜,在碱性条件下,纯蛋白被氢氧化铜沉淀,用水洗去水溶性含氮物,沉淀部分按粗蛋白的测定方法测定其含氮量。 3 试剂 3.1   10%硫酸铜溶液: 称取五水硫酸铜10g用水溶解,转移至100ml容量瓶中定容至刻度。 3.2   2.5%氢氧化钠溶液:  称取2.5g氢氧化钠用水溶解,转移至100ml容量瓶中定容至刻度。 3.3   硫酸:化学纯,含量为98%,无氮。 3.4   催化剂:0.4g硫酸铜,5个结晶水,6g硫酸钠,均为化学纯,磨碎混匀。 3.5  氢氧化钠:化学纯,40%水溶液(M/V)。 3.5.1   配制方法:500g氢氧化钠+1100ml蒸馏水。 3.6   硼酸:化学纯,2%水溶液(M/V)。 3.6.1   配制方法:  20.5g硼酸+1000ml蒸馏水。 3.7   混合指示剂:甲基红,1%乙醇溶液,溴甲酚绿,0.5%乙醇溶液,两溶液等体积混合, 在阴凉处保存期为三个月。 3.7.1   溴甲酚绿,0.5%乙醇溶液配置: 溴甲酚绿0.125g+25ml乙醇。 3.7.2   甲基红,1%乙醇溶液配置:甲基红0.025g+25ml乙醇。 3.8   盐酸溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定,按GB/T601制备。  3.8.1   0.02mol/L盐酸标准溶液:1.67ml盐酸,纯,注入1000ml蒸馏水中。 3.8.2   0.1mol/L盐酸标准溶液:8.3ml盐酸,分析纯,注入1000ml蒸馏水中。 3.9   硫酸铵:分析纯,干燥。 3.10   蔗糖:分析纯。 4   仪器设备 4.1  实验室用样品粉碎机。 4.2   分样筛:孔径0.45mm(40目)。 4.3   分析天平:感量0.0001g。 4.4   电炉。 4.5   滴定管:酸式,25、50ml。 4.6   凯氏烧瓶:250ml。 4.7   凯氏蒸馏装置:常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。  4.8  锥形瓶:250ml。 4.9   容量瓶:100ml。 4.10   烧杯:200ml。  4.11  干燥箱。 5  分析步骤 5.1 半微量法 5.1.1 样品的处理  称取待测样品0.5-1g(精确到0.1mg)于200ml(4.10)烧杯中,加入50ml蒸馏水,用玻璃棒搅拌均匀,在电炉(4.4)上加热煮沸,加入20ml 10%硫酸铜溶液(3.1),再加入20ml 2.5%氢氧化钠溶液(3.2)搅匀,从电炉上取下,在室温放置2h,然后用倾泻法将样品过滤到滤纸上,用少量温水多次洗涤烧杯和沉淀物, 直至洗出液无硫酸根离子(用10%氯化钡溶液来检验滤液无沉淀),连同漏斗一起放入80℃干燥箱(4.11)中烘干,将滤纸和沉淀物小心放入250ml凯氏烧瓶(4.6)中,加入6.4g 催化剂(3.4),20ml 浓硫酸(3.3),在电炉(4.4)上消化,样液澄清后继续消煮2h,取下冷却后加入20ml蒸馏水,转入100ml 容量瓶(4.9)中,冷却后用水稀释至刻度,摇匀,做为试样分解液。同时做空白实验。  5.1.2   蒸馏将半微量蒸馏装置(4.7)的冷凝管末端浸入装有20ml 硼酸(3.6)的吸收液和2滴混合指示剂(3.7)的锥形瓶(4.8)内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴,硫酸数滴,在蒸馏过程中保持此液为橙红色,否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20ml  注入蒸馏装置中,小心提起玻璃塞使之流入反应室,同时用蒸馏水冲洗蒸馏装置入口内壁使样品分 析液和冲洗液一并流入反应室,迅速将玻璃塞塞好,且在入口处加水密封,防止漏气。蒸馏4min 降下锥形瓶使冷凝管末端离开液面,再蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。 5.1.3  滴定 蒸馏后的吸收液立即用0.02 mol/L盐酸标准溶液(3.8.1)滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。  5.2 常量法 5..2.1   称取待测样品0.5-1g(精确到0.1mg)于200ml(4.10)烧杯中,加50ml蒸馏水,用玻璃棒搅拌均匀,在电炉(4.4)上加热煮沸,加入20ml10%硫酸铜溶液(3.1),再加入 20ml2.5%氢氧化钠溶液(3.2)搅匀,从电炉上取下,在室温放置2h,然后用倾泻法将样品过滤到滤纸上,用少量温水多次涤烧杯和沉淀物,直至洗出液无硫酸根离子(10%氯化钡溶液来检验滤液无沉淀),连同漏斗一起放入80℃干燥箱内烘干,将滤液和沉淀物小心放入250ml凯氏烧瓶(4.6)中,加入6.4g催化剂(3.4),20ml浓硫酸(3.3),在电炉上消化, 样液澄清后继续消煮2h,取下放冷后加入60-100ml蒸馏水,摇匀冷却。同时做空白实验。 5.2.2 将蒸馏装置(4.7)的冷凝管末浸入装有25ml硼酸(3.6)吸收液和2滴混合指示剂(3.7)的锥形瓶内。然后小心的向凯氏烧瓶(4.6)中加入50ml氢氧化钠溶液,轻轻摇动凯氏烧瓶,使溶液混匀后再加热蒸馏,直至流出液为100ml,降下锥形瓶,使冷凝管末端离开液面,续蒸馏1-2min,并用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均需流入锥形瓶内,然后停止蒸馏。5.2.3  滴定蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L盐酸标准溶液(3.8.2)滴定,溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 5.3  蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵(3.9)代替试样,按5.1或5.2步骤进行操作,测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%,否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。 5.4  空白测定  称取蔗糖(3.10)0.5g,代替试样,按5.1或5.2步骤进行空白测定,消耗 0.1mol/L盐酸标准溶液(3.8.2)的体积不得超过0.2ml。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液(3.8.1)体积不得超过0.3ml。 6  分析结果的述 6.1计算见下式: 真蛋白(%)=  (V1-V2)×C×0.0140×6.25×100m×V′/V 式中:V1—滴定试样时所需标准溶液的体积,ml; V2—滴定空白时所需标准溶液的体积,ml; C—盐酸标准溶液的浓度,mol/L; V—试样分解液的总体积,ml; V′—试样分解液蒸馏用体积,ml;
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