幽门螺杆菌唾液非侵入性检测法与^14碳-尿素呼气试验的比较研究

幽门螺杆菌唾液非侵入性检测法与^14碳-尿素呼气试验的比较研究 幽门螺杆菌唾液非侵入性检测法与^14碳- 尿素呼气试验的比较研究 中华消化杂志2007年2月箍!鲞箍塑』!翌!!!:!!: 子协同作用,诱导炎症介质产生,扩大炎症.氧化应激和 TNF-q能激活和诱导NF_KB活化,调控含有KB位点基因的 转录.激活的TNF_a作为阳性反馈进一步激活NF_KB,导 致炎症级联和不断放大.我们的结果与Mustafa等的结 果一致,EGB抑制TNF_a的释放至少部分和其清除ROS有 关.EGB发挥抗炎作用可能还与其下调NF-~Bp65有关. 有研究报道,EGB因其抗氧化作用直接清除Hz0z,升高谷 胱甘肽(GSH)水平从而抑制H0诱导的NF-~B激活. Chen等?报道,EGB能抑制TNF—a诱导的ROS产生和NF一 .cB激活.我们推测EGB因其抗氧化作用抑制TNF-a诱导 NF-gB的激活,从而抑制炎症介质级联.IL一6能刺激中性粒 细胞趋化,和坏死及炎症活动程度相关.因IL一6含有NF-~B 的.cB位点,我们推测EGB通过调整NF-nBp65来抑制其下 游信号IL-6的表达. IBD的药物治疗不良反应较多,且停药后易复发.随着 免疫学和分子生物学的发展,重组单克隆抗体,IL受体拮抗 剂,反义寡核苷酸治疗取得了较好的疗效,但其价格昂贵,且 安全性尚需进一步观察.EGB含有24黄酮糖苷和6萜 内酯,能清除自由基,抗炎,调整免疫系统,且安全价廉,有望 l3l 成为治疗实验性结肠炎的药物.我们建议,EGB单独或联合 其他药物用于治疗实验性结肠炎,或作为食物添加剂预防 UC的复发. 参考文献 lMorrisGP.BeckPL,HerridgeMS,eta1.Hapten-induced modelofchronicinflammationandulcerationintheratcolon. Gastroenterology,1989,96:795—803. 2MustafaA.ElMedanyA,HagarHH,eta1.Ginkgobilobaat— tenuatesmucosaldamageinaratmodelofulcerativecolitis. PharmacolRes,2006,53:324—330. 3ChenJW,ChenYH,LinFY,eta1.Ginkgobilobaextractin— hibitstumornecrosisfactor—-alpha—-inducedreactiveoxygenspe—- ciesgeneration,transcriptionfactoractivation,andcelladhesion moleculeexpressioninhumanaorticendothelialcells.Arterio— sclerThrombVascBiol,2003,23:1559一l566 (收稿F1期:2006—05—08) (本文编辑:杨学文) 幽门螺杆菌唾液非侵入性检测法与14碳一尿素呼气试验的 比较研究 俞莹莹吴勤动许凯声刘建爱朱永良钱可大 现已明确幽门螺杆菌(Hp)是慢性胃炎与消化性溃疡的 重要致病因子,并且是胃癌的早期危险因素,有学者研究认 为,口一口传播或粪一口传播为其可能传播途径,并提出口 腔内有Hp寄居,并可能是胃病复发的重要原因'.本研 究应用酶联免疫吸附试验(ELIsA)对唾液中Hp抗原进行 非侵入性检测,研究唾液中Hp的存在情况,并与"c一尿素呼 气试验("C—UBT)结果进行比较,探讨其临床应用价值. 一 ,材料与方法 1.研究对象:选择因上消化道症状在本院接受胃镜检 查并排除4周内服用过抗生素,铋剂或质子泵抑制剂等对 Hp检查有影响药物的患者,其中Hp快速尿素酶试验与病 理检测结果均阳性或阴性者共76例,男女各38例,平均年 龄46岁(17~69岁).经胃镜和病理组织学诊断,慢性浅表 性胃炎19例,慢性萎缩性胃炎46例,消化性溃疡9例,胃息 肉2例. 2.唾液标本采集:患者晨起胃镜检查前留取唾液1ml (未刷牙)于试管内送检. 3.唾液Hp抗原ELISA检测法:采用ELISA双抗体夹 心法,于Hp多克隆抗体包被板(药业有限公司)中每孔加人 100tA混匀唾液,然后每孔加入2滴辣根过氧化物酶标记的 作者掣位:310009杭州,浙江大学医学院附属第二医院消化 科(俞莹莹.吴勤动,朱永良,钱可大),检验科(许凯声,刘建爱) 通信作者:吴勤动,Email:wuqingdong@sina.corn 兔抗Hp多克隆抗体,室温下放置60min,1倍冲洗液洗板5 次以上,每孔加2滴底物溶液,室温放置10min,然后每孔加 2滴停止液.在单波长450nm的比色仪上进行比色,检测 结果<0.141判定为Hp阴性,?0.141判定为Hp阳性. 4."C—UBT:使用深圳中核海得威生物科技有限公司生 产的"C—UBT检测仪,"C—UBT值?100dpm/mmolCO2时 判断为阳性. 5.联合检测:内镜检查时在胃窦部距幽门孔5cm 处取3,4块活检标本,分别做快速尿素酶试验和苏木精一伊 红染色判断Hp感染情况,以上两项结果均为阳性者判定为 胃黏膜Hp感染,均为阴性者判定为胃黏膜无Hp感染. 6.统计学方法:应用卡方检验,SPSS11.5软件包处理 数据.P<0.05为差异有统计学意义. 二,结果 1.三种方法对Hp阳性检出率的比较:76例患者中联 合检测Hp阳性患者29例,阳性率为38.2,唾液Hp抗原 检测法检出Hp阳性35例,阳性率为46.1,"C—UBT检 出Hp阳性36例,阳性率为47.4.三种结果进行卡方检 验,差异无统计学意义(x一1.55,P>0.05). 2.唾液Hp抗原检测法与"C—UBT的检测效能:以联 合检测标准为对照,唾液Hp抗原检测法与"C—UBT的敏感 性分别为62.7,72.2,特异性为82.9,92.5,准确 性为73.7,82.9,阳性预测值为75.9,89.7,阴性 预测值为72.3,78.7%. l32巾华消化杂志2007年2月第27卷第2— $~]ChinJDig,Februa— ry,2007,Vo1.27,No.2 3.唾液Hp抗原检测法与"C—UBT比较:将唾液Hp抗 原检测法与"C—UBT两种方法的检测结果进行卡方检验,结 果显示差异无统计学意义('一0.02,P>0.05). 讨论长期以来多数学者认为胃是Hp惟一的生存环 境,自从1989年Krajiden等首次成功地从胃炎患者牙菌斑 中分离培养出Hp以来,关于口腔作为Hp的另一聚集地的 假说已为人们所关注.Tiwari等采用PCR法检测患者唾 液中HpDNA,结果显示有消化道症状患者唾液中Hp检出 率为87.5.Song等采用巢式PCR检出胃黏膜Hp阳性 患者唾液中HpDNA阳性率为64.0.此外,多数学者认 为口腔与胃内的Hp具有同源性.彭惠等用PCR单链构 象多态性分析(SSCP)法检测胃黏膜与唾液中Hp的两种 vacA基因型的一致率为98.0.但也有少数研究报道唾液 中Hp检出率不高.Kim等报道PCR检测唾液中Hp的 检出率仅为28.6.本研究采用ELlSA法检测76例慢性 胃病患者唾液中Hp抗原,其阳性检出率为46.1(35/76), 支持唾液中存在较高Hp检出率现象. 本研究结果显示,唾液Hp抗原检测法,"cUBT及联 合检测三者Hp阳性检出率的结果比较差异无统计学意义 (P>0.05)以联合检测结果为标准,唾液HP抗原检测法 的敏感性为62.9,特异性为82.9,准确性为73.7%,阳 性预测值为75.9,阴性预测值为72.3.进一步将唾液 Hp抗原检测法与"C—UBT结果相比较,结果显示两者检测 结果一致,差异无统计学意义(P>0.05).因此,唾液Hp 抗原检测亦可作为今后一种新的非侵人性Hp诊断方法,并 且该方法标本采集方便,费用低廉,亦适用于孕妇,儿童,并 可用于流行病学调查. 本文的研究结果表明,唾液中存在较高的Hp检出率, El腔可能为Hp的重要寄居地,唾液中Hp抗原的检测方 法,操作简便快捷,容易被患者接受,为临床提供了一种新的 非侵入性Hp检测方法,且较"C—UBT方便而无放射性.同 时也可作为临床流行病学调查以及抗Hp治疗后追踪评价 的手段.此外,口腔内Hp是否需要行相关根除治疗,值得 今后进一步研究和探讨. 参考文献 lTiwariSK.KhanAA,AhmedKS,eta1.Rapiddiagnosisof Helicobacterpyloriinfectionindyspepticpatientsusingsalivary secretion:anon—invasiveapproach.SingaporeMedj,2005, 46:224—248. 2SongQ,LangeT,SpahrA.eta1.Characteristicdistribution patternofHelicobacterpyloriindentalplaqueandsaliva detectedwithnestedPCR.JMedMicrobiol,2000,49:349— 353. 3彭惠,潘国宗,曹世植.在唾液巾检测幽门螺杆菌的意义.中华内 科杂志,l999,38:l7l—l73. 4KimN,LiraSH,LeeKH,eta1.Helicobacterpyloriindental plaqueandsaliva.KoreanJInternMed,2000,l5:187—194. (收稿日期:2006—09一I8) (本文编辑:侯虹鲁) 银杏苦内酯B对重症急性胰腺炎大鼠胰腺 组织核因子一JcBp65的影响 杨银治夏时海胡春秀邸瑶夏国栋 重症急性胰腺炎(SAP)预后凶险,并发症多,病死率可 高达4O.核因子一KB(NF-~cB)是一种具有多向转录调节作 用的蛋白质.NF-~cBp65激活与严重感染的发生及病理生 理过程均密切相关….银杏苦内酯B(BN52021)为银杏叶提 取物的有效成分之一,是血小板活化因子(PAF)的强拮抗 剂,PAF在诸多炎症反应,如SAP的病理损伤过程中起重 要作用,BN52021治疗实验性SAP有显着疗效.本实验旨 在探讨NF-~cBp65在SAP中的作用及其机制,以及 BN52021对其的影响,为研究,开发和应用BN52021提供理 论和实验依据. 一 ,材料与方法 1.主要试剂与仪器:BN52021(Sigma公司),NF—KBp65 兔抗鼠一抗(SantaCruz公司),羊抗兔二抗(北京市鼎国生 物技术有限公司),聚偏二氟乙烯(PVDF膜,Millipore公 司),ECL液(SantaCruz公司),垂直电泳仪(mini型号 基金项目:国家自然科学基金资助项目(30300465) 作者单位;300162天津,武警医学院附属医院消化科 通信作者:夏时海,Email:xshhcx@sina.com cell.Brad—boid公司),凝胶扫描成像系统(Bio—Rad公司). 2.实验动物分组与模型制备:选取Wistar大鼠180只 (解放军军事医学科学院实验动物中心提供),分为SAP模 型组(SAP组),BN52021治疗组(BN组)和阴性对照组(NC 组),3组再分为1,2,3,6,12和24h组,每组为1O只.参 照Aho等方法,SAP组和BN组开腹后用微量注射器逆行胰 胆管内注射5牛磺胆酸钠0.1ml/100g,NC组开腹后仅 翻动十二指肠并触摸胰腺数次即关腹.BN组于术后15min 股静脉注射BN520215mg/kg,NC组,SAP组股静脉注射 等量0.9氯化钠注射液. 3.取材:各组大鼠分别在术后6个时相点经右心房取 血,离心10min,取上清于消毒过的EP管中,一2O?保存, 测定淀粉酶.同时取一部分胰腺组织置液氮过夜后置 , 8o?冻存备用,另取一部分胰腺组织,行病理学观察. 4.Western印迹检测:制备的总蛋白垂直平板电泳,将 凝胶放于电转移槽中通电转印4h,在含0.5牛血浆白蛋白 中封闭,加NF—KBp65抗体(1:400稀释),4?过夜.洗膜3 次后将PVDF膜加辣根过氧化物酶标记的IgG(1t200稀