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紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液

2017-09-20 3页 doc 79KB 327阅读

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紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液   【实验内容】 1. 对照品溶液和样品溶液的配制 准确称取维生素 B12 对照品适量,加水溶解稀释成25μg/mL 的溶液。 精密吸取维生素 B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中,用水稀释至刻度摇匀,得到待测 样品溶液(按标示含量稀释成25μg/ml 的溶液)。 2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别 取对照品溶液进行光谱扫描(250 ~ 600 nm),得到维生素B12 的吸收曲线,寻找吸收峰, 扫描后可得到在278nm,361 nm 和550 nm 波长处出现的3...
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液
紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液   【实验内容】 1. 对照品溶液和样品溶液的配制 准确称取维生素 B12 对照品适量,加水溶解稀释成25μg/mL 的溶液。 精密吸取维生素 B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中,用水稀释至刻度摇匀,得到待测 样品溶液(按标示含量稀释成25μg/ml 的溶液)。 2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别 取对照品溶液进行光谱扫描(250 ~ 600 nm),得到维生素B12 的吸收曲线,寻找吸收峰, 扫描后可得到在278nm,361 nm 和550 nm 波长处出现的3 个吸收峰,然后在以上3 个吸 收峰处测量维生素B12 注射液的吸光度,并计算A361/A278 和A361/A550 的比值。 3. 维生素B12 的定量测定 根据吸收曲线选择最大吸收波长(在 361 nm 或附近)作为测量波长,测量维生素B12 【注意事项】 1. 注意石英比色皿的操作使用; 2. 使用5 联池时要注意比色皿在样品池中的位置,不可混淆; 3. 测定时不要打开仪器的样品池盖。   【数据】  WL  ABS  550.5  0.142  550.0  0.141  361.0  0.450  278.0  0.248  277.5  0.249 【数据处理】   1、定性分析  E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm277.5nm)=A(361.0nm)/A(277.5nm)=1.81  E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm550.5nm)=A(361.0nm)/A(550.5nm)=3.17 2、定量分析  因为,A(361nm)=E(1%1cm)cl,g/100ml=106μg/100ml=104μg/ml  所以,cB12=A(361nm)/E(1%cm)l=A(361nm)/207*104=0.450/207*104=21.74μg/ml            VitB12(%)=(cB12*n)/(500μg/ml)*100%=(21.74*20)/500*100%=87.0%(n为稀释倍数) 【思考】 1. 采用吸光系数法直接测定样品含量有何要求? 2.利用其他组同学的实验结果,比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、 吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同,试作解释。 利用邻组同学的实验结果,比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同,试作解释。 答:不同仪器得到的吸收曲线形状基本一致,能反映出同一物质的基本特征,但吸收曲线的吸光度和吸收峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异,导致吸光度和波长等参数不同,因此必须对仪器进行定期的校正。 3.比较用吸光系数和校正曲线定量方法,你认为哪种方法好?为什么?  吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度,简便易行,但仪器性能差异会导致结果误差较大,因此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法,且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。      校正曲线法是配制一系列溶液作为基础进行测量,即使有偏离Beer定律线性关系,也可以应用于测定。因为是在相同条件下测量,有标准溶液的校正,可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差,与前一种方法相比,虽然操作步骤要繁琐些,但准确、可靠,是测定最常用的方法。 
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