应用α-唾液淀粉酶结合能力鉴定血链球菌

应用α-唾液淀粉酶结合能力鉴定血链球菌 应用α-唾液淀粉酶结合能力鉴定血链球菌 ? 14?浙江预防医学2004年第16卷第2期Zh~iangPreyMed,February2004,Vol16,No.2 应用一唾液淀粉酶结合能力鉴定血链球菌* 邓淑丽韩曙光陈晖应红 【摘要】目的分析血链球菌群中的细菌与唾液淀粉酶结合能力,探讨四种细菌的 结合能力,以及这 种能力的意义.方法取4o株血链球菌群中不同细菌的菌株和临床分离菌株与 唾液的a.淀粉酶结合.通 过淀粉水解圈大小来测定淀粉酶活性,从而了解它和?.唾液淀粉酶的结合能力. 结果所有高登氏链球菌和 66.7%的缓症链球菌与口-淀粉酶结合能力为阳性,而血链球菌与口腔链球菌与?. 唾液淀粉酶结合均为阴性. 结论血链球菌,口腔链球菌不能结合?.唾液淀粉酶,而高登氏链球菌,缓症链球菌 能结合?-唾液淀粉酶, 利用此特性可快速且有效地鉴定不同血链球菌群中各菌株. 【关键词】血链球菌群;?.唾液淀粉酶结合能力;鉴定 中圈分类号:R378.12文献标识码:A文章编号:1007.0931(2oo4)02-0014.02 u喀theBh~linoCapacityofSalivarya—amylasetoIdentifyStreptococcusSandsGroup DENGShu-li,HANShu-guang,CHENHui,eta1.(TheAffiliatedStomatologyHospitalofZ ^慨UniversitySchoolof Medirine,Han~hou,z,310006,China) 【AIl~rad】ObjectiveToresearchthedifferenceofthebindingcapacityofsalivary口 _amylasetofoursubspeciesof streptococcussanguisgroup(SSG)anditssignificance.Me~odsAcollectionof40SSGstrain sincludingstandardand clinical-separatedstraimWasexaminedforthebindi~capacitytosalivarya— amylase.Thea-amylasebindi~assaywasbased onthediameterofstarchhydrolysis.ResultsThepositiveresultsWerefoundinallstrainsofstr eptococcusgordoniiand 66.7%ofstreptococcusmitis.Incontrast.allstrainsofstreptococcussangnisandstreptococc usoralislaeknda—amylase bindingcapacity.CoudusioBsArapidandeasyassaydescribedinthispapermaybe021impor tantsupplementarytestfor identifyingdifferentsubspeciesofSSG. 【Keywords】Streptococctmsangnisgroup(SSG);Bindi~capacitytosalivary ?.amylase;Identification 血链球菌群是口腔原生菌群,与维持口腔生态平衡密 切相关"】.但它进入血循环,引起血小板凝集,可能促进 动脉粥样硬化.血链球菌群通过细菌的表现型和基因型分 析,可分为两大类:第一类代表菌株有血链球菌和高登氏 链球菌,而另一类是口腔链球菌和缓症链球菌】.血链球 菌群中的某些细菌能与唾液中的a.淀粉酶相结合,使a.淀 粉酶失去活性,不能水解多糖.鉴于目前国内外对血链球 菌群各菌株与a.唾液淀粉酶的结合能力报道甚少,本文分 析了4O株血链球菌群细菌与a.唾液淀粉酶的结合能力. 材料与方法 1细菌来源4O株细菌中血链球菌的标准菌株5株,临床 分离菌株3株;高登氏链球菌标准菌株1株,临床分离菌 株2株;口腔链球菌标准菌株1株,临床分离菌株9株: 缓症链球菌标准菌株1株,临床分离菌株8株.其中血链 球菌ATCC10556,口腔链球菌ATCC10557由华西医科大学 口腔医学院赠予;血链球菌L14,133.79,L50由美国明尼 *本科题为浙江省科委研究资金资助,资金编号 971103129 作者单位:浙江大学医学院附属口腔医院,浙江 杭州310o06 苏达大学赠予;高登氏链球菌ATCC10558,缓症链球菌, 血链球菌s.s34购自上海第二医科大学口腔研究所. 2培养基血链球菌群细菌培养用牛心脑液体培养基.; 淀粉琼脂培养基"】:1%可溶性淀粉;1%琼脂;50mMTris- Hcl缓冲液. 3实验方法按照道格拉斯所描述的方法,取一环细菌 在2ml牛心脑液体培养基中37?培养过夜.离心(5000转/ 分,2O分钟),去除上清液,用50mMPBS(PH6.5)清洗一 次,离心后去上清液备用. 5Oul非刺激性唾液在低温离心机中离心(4~C,10000 转/分,2O分钟),取上清液,用无菌蒸馏水1:1稀释. 把离心备用的细菌和25ul稀释唾液均匀混合,室温下 孵育3O分钟后,在低温离心机中离心,(4oc,10000转/分,5 分钟).取上清液lOul滴入淀粉琼脂上直径为3.5mm的小 孔中.37?孵育18小时,观察结果. 4结果观察淀粉琼脂用卢哥氏碘液染色后,观察淀粉水 解圈直径大小.直径<2mm为阳性(十);直径>13ram为 阴性(一);直径介于2,13mm之间为有部分连接能力 (?). 结果 所有高登氏链球菌和66.7%的缓症链球菌与a.淀粉酶 浙江预防医学2004年第16卷第2期ZhejiangPrevMed.February2004,V0J16.No.2 结合能力为阳性,而血链球菌和口腔链球菌与a一淀粉酶结 合均为阴性,结果见表1. 表140株血链球菌群细菌与".唾液淀粉酶结合力 讨论 口腔中许多原生菌群能与唾液蛋白,糖蛋白相互作用, 这些相互作用与细菌在口腔软硬组织上粘附有密切的关系. a一唾液淀粉酶是由各大唾液腺分泌的唾液蛋白,能水解a一 1,4-糖苷键,使多糖成为单糖.从本实验结果可知,血链 球菌群中的高登氏链球菌和大多数缓症链球菌能与a一淀粉 酶结合,使其失去活性,不能水解多糖.而血链球菌和口 腔链球菌则没有这种能力.有研究表明单一链球菌细胞大 约能结合13,000—33,000个a.淀粉酶分子J. 唾液获得性薄膜是由唾液中的蛋白和糖蛋白选择性吸 附于牙面上而形成的.因此只有对牙面亲合力大的唾液成 分才能在牙面上吸附,如带有强负电荷的磷酸糖蛋白.而 2.唾液淀粉酶电荷呈中性,由它的理化特性决定了获得性 薄膜上淀粉酶含量比较少,主要存在于唾液中.大多数 组成牙菌斑的细菌都是通过获得性薄膜完成与牙釉质表面 的粘附.高登氏链球菌与唾液中a.淀粉酶结合,可能阻止 了它在牙釉质表面的附着.而血链球菌不能与a.淀粉酶结 合,与其它糖蛋白结合.它就成为最早粘附于牙釉质表面 细菌之一,为其它病原菌在牙面上附着提供结合位点,从 而促进了龋病等牙体硬组织病的发展】.当进行牙周手术, ? 15? 拔牙和刷牙时,会引起菌血症,血链球菌就进入血循环, 从而引起血小板凝集,促进冠状动脉硬化.因此,血链球 菌还与全身性疾病有关. 与a一唾液淀粉酶结合能力可用于鉴定血链球菌群中不 同菌株.由于血链球菌,高登氏链球菌,缓症链球菌和口 腔链球菌各菌株的菌落形态,生化反应等表现型以及基因 型均类似】,造成它们之间鉴定的困难.因高登氏链球菌 和缓症链球菌有与a.唾液淀粉酶结合能力,而血链球菌和 口腔链球菌则无.利用这种结合能力可简便地区分血链球 菌和高登氏链球菌,以及缓症链球菌和口腔链球菌,为血 链球菌群的鉴定提供有效的方法. 参考文献 [1]WillcoxMD.Identificationandclassificationofspecieswithinthe streptococcussanguisgrouplJJ.AustDustJ,1996,41一l2. 12]RudneyJD,LarsonCJ.1ndentificationoforalmitisgroupstreptococcus byarbitrarilyprimedpolymerasechainreaction[J].OralMicro lmmunol.L999,14:33—42. [3]陈聪敏.厌氧菌及其感染[M].第二版.上海:上海医科大 学出版社,1989,236. [4]KilianM.NyvacdB.Abilitytobindsalivarya—amlasediscriminates certainvirtidasgroupstreptococalspecies[J].JClinMicrobio, l990,28:2576—77. [5]DouglasCWI.Thebindingofhumansalivarya—amylasebyoralstrains ofstreptococcalbacteria[J].ArchOralBiol,1983.28:567—73. [6]ScannapiecoFA,BergeyEJ,ReddyMSet.Characterizationof salivarya—amylasebindingtoStreptococcussanguis[J].Infect lmmun.1989.57:2853—63. [7]刘天佳.13腔疾病的微生物学基础[M].北京:人民卫生出 版社,1999. (收稿日期:2003.02.10) (上接第13页)最后败血症休克死亡.值得指出的是在基 层医院还没有常规开展或把非酵母样真菌生长误报为无霉 菌生长情况下,常常延误诊断和失去治疗时机,这是医院 或医务人员值得十分重视的一个问题.由此提出,对长期 住院病人和术后切口等暴露时间长不能愈合,经抗生素治 疗又不佳的病人应及早考虑是否霉菌性感染的可能,注意 收集临床样本,防止病情发展,这是当前医院感染中不可 忽视的重要问题.同时,本研究所获得的各项技术性数据 为帮助临床治疗提供了有一定指导意义的科学参考依据. (本文承蒙浙江省医学科学院何浙生研究员,硕士生导师指导, 审校,特致感谢). 参考文献 1]WcinbergerM,SackT.SulkeJ.Increasingfungalisolationfrom clinicalspecimens:Experienceinauniversityhospitaloveradecade [J].JHospInfect,1997,35:185—192. [2]王爱霞.医院内感染的新动向——对2O年院内败血症的分析 [J].中国医学论坛报,2002,1:10. [3]中华人民共和国国家标准食品卫生检验方法.微生物学部分 [M].北京:中国标准出版社,1987.7. [4]魏景超.真菌鉴定手册[M].上海;科学技术出版社, 1979.9. [5]王志刚.真菌分类,有害和产毒真菌研究进展[J].浙江预防 医学与疾病监测,1992,4(1):38—40. [6]索继红.我院地下道的空气微生物监测与消毒,中华医院感染 学杂志,1994;4(1);27. [7]陈世平.医院真菌感染[J].中华医院感染学杂志,1992,2 (4):248. [8]CnnollyJeJr,McAdamsHP,ErasmasJJ,cta1.Opportu-nisticfungal pneumonia[J].JTho~clma~ng,199914:51—62. f收稿日期:2003.O1.23)