心房钠尿肽对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

心房钠尿肽对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响 13 () 江西医学院学报 1997; 37 1: 13, 17A c ta A cad em iae M ed ic inae J iang x i 心房钠尿肽对大鼠黄体细胞 孕酮生成的影响 Ξ 王晶磊 徐斯凡 赵伟 () 生理学教研室 南昌 330006 () 【提要】 采用大鼠黄体细胞体外培养的, 观察了心房钠尿肽 对黄体细胞孕酮生成 A N P 的影响及与细胞内信使 的相互关系。发现 能抑制黄体细胞孕酮的基础分泌及人绒毛膜 cAM P A N P - 7 () 促性腺激素 刺激下的孕酮分泌。当浓度 10的加入培养的黄体细胞悬液 30 ƒH C Gm o lL A N P m in () 后, 即发生明显地抑制孕酮分泌作用 < 0101; 腺苷酸环化酶激动剂 则可促进黄体细胞 P Fo r sko lin 分泌孕酮; 当 与 共同作用时, 可抑制 对黄体细胞的促进作用, 孕酮分 Fo r sko lin A N P A N P Fo r sko lin 泌恢复到对照组水帄。 实验结果提示: 可能是一种卵巢局部调节肽, 它可能通过抑制小黄体细 A N P 胞内的腺苷酸环化酶, 减少 的生成和释放, 进而抑制小黄体细胞的孕酮分泌。CAM P ΞΞ 孕酮激素类ƒ药物作用 关键词: 心房钠尿肽药效学动物, 实验大鼠ƒ 中图号: 33515R 111 实验动物 八十年代初期 等证实心房钠尿 de Bo ld () () 肽 , 是一类 采 用孕马血清 和 处理后 A t r ia l N a t r iu re t ic P ep t ideA N P PM SG H C G 的假孕大鼠获取黄体组织。 由上海市计划生 循环激素, 主要由心肌细胞产生和释放, 具有 1, 2 育科学研究所西普尔2必凯实验动物合资公调节水盐代谢和心血管活动的功能。现已 知, 除心血管系统外, 还广泛分布在肺、 A N P 司提供雌性 大鼠, 鼠龄 26 , 体重 70?10 SD d肾上腺、脑、脊髓、垂体、消化道和泌尿生殖系 , 光 照 14 , 黑 暗 10 , 室 温 控 制 在 25 ?gh h 统, 通过与靶细胞上特异受体结合而发挥广 3 2?, 水食自取。大鼠先经皮下注射 65PM SG 泛的生理作用。 有学者研究表明, 对 A N P , 65 后再经皮下注射 后 35 , 7 生殖功能具有一定的调节作用, 它可以抑制 IU h H C G IU d () 下 丘脑释放促性腺激素释放激素 , GnR H 取充分黄体化的黄体组织制备细胞悬浮液。 也 可 以 抑 制 垂 体 细 胞 释 放 黄 体 生 成 素 112 大鼠黄体细胞悬液制备及孵育 将预处理后的大鼠卵巢迅速取出, 去除 周围脂肪组织及包膜, 用 碳酸 - K reb R in ge r 4() , 、与卵巢分泌功能密切相 L H GnR HL H () 氢钠葡萄糖缓冲液 冲洗数次, 除 KRB GA L 关。在卵巢水帄是否也具有调节作用是 A N P 去大量的红细胞。剪碎卵巢, 盛入酶消化液中 一令人感兴趣的问题。 本文采用大鼠黄体细 胞体外培养的方法, 观察 对大鼠黄体( 酶 011 A N P 5 酶消化液含胶原酶 4 、 m l m gDN A 细胞产生孕酮的影响, 探讨其可能的作用机) 、胰蛋白酶抑制剂 1 , 充入 95% 和 m gm g O 2 制。 1 材料和方法 Ξ 上海市计划生育科学研究所 ΞΞ 补充词 5% 混合气体, 37?恒温水浴, 振荡孵育 1 。 终止孵育时用吸管轻轻吹打数次 消化 CO 2 h 以助细胞分散。消化液经尼龙网过滤, 滤液用于做下一步实验。 液离心洗涤 3 次, 倾弃上清液, 再KRB GA L 液将沉淀细胞重新分散, 稀释用 KRB GA L6 为 1×10细胞此为培养用细胞悬液。台 ƒ, m l ( 盼 蓝 排 斥 试 验 显 示 细 胞 活 率 达 9210 ? ) ()511% = 8。 将细胞悬液分装入带盖培养 n 管中, 每管 015 。实验组加入各种试剂, 对 m l 照组加入等量 培液, 充入混合气 KRB GA L ( ) 体 95%, 5% , 37?恒温水浴振荡 孵O 2 CO 2 育。 孵育 4 后收集培养液并置于- 20?冰h 箱内, 待测孕酮。 113 化学试剂 由卫生部 长 春 生 物 制 品 研 究 所 PM SG 提供。由卫生部上海生物制品研究所提 H C G ()供。 胶原酶 , 、酶? co llagen a seT yp e DN A ( ), I 、胰 蛋 白 酶 抑 deo x y r ibo n u c lea seT yp e 图 1 诱导大鼠黄体细胞孕酮分泌的剂量依赖曲线 H C G 3 < 01053 3 < 0101P P 与对照组比较制剂均为 公司产品。也为 S igm a A N P S igm a 212 对离体黄体细胞孕酮生成的影响 A NP 公司产品。 为了证实 对离体黄体细胞的直接 A N P 114 孕酮放射免疫测定 作用, 我们观察了 对基础孕酮和 A N P H C G 细胞悬液中孕酮含量用放射免疫方 诱导孕酮分泌的影响。 将不同浓度的 A N P () 法 测定, 数值再进行 转换。 放免R IA L O G - 10- 6 ( ) 10, 10ƒ加入离体培养的 黄 体 m o lL 药盒由提供, 批内及批间变异系数分 W HO 细胞, 孕酮分泌量由对照组的 30176 ?2110 别是 10% 和 15% 。 6 ) ( 分 别 降 低 为 29111 ? 6ƒ10细 胞 = pm o ln 115 统计学处理- 10 θ ( )3176 10、= 6 、28117 ? 1130 ƒm o lL n 实验结果以 ?表示, 为样本数, 用 xs n - 9 - 8( )( 10、= 8 、26157 ? 3119 10ƒm o lL n 双侧 检验方法进行组间显著性检验。t - 7 )( ƒ、= 8、25187 ? 2198 10ƒ、m o lL n m o lL n 6 - 6 2 结果( ) = 8 和 20191 ? 2109 ƒ10细 胞 10pm o lm ) ƒ、= 8, 随 浓度加大, 其抑制作 o lL n A N P 211 对离体黄体细胞孕酮生成的 HCG - 9 用增加, 当浓度增至 10时对黄体细 ƒm o lL 诱导作用 ( 胞 基 础 孕 酮 分 泌 产 生 明 显 抑 制 效 应

说明