桂枝茯苓骨架缓释双层片释药机理及药效评价研究道

桂枝茯苓骨架缓释双层片释药机理及药效评价研究道 ,,,, ,廿， ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,;, ,, ,,,,,,,,(,, 世界中联中药药剂专业委员会第五届学术年会?中华中医药学会制剂分会学术年会 桂枝茯苓骨架缓释双层片释药机理及药效评价研究 祝婧云，廖正根卜，梁新丽,，蒋且英,，平其能,，杨明, (,江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，江西南昌,,,,,,; ,中国药科大学药剂学教研究室，江苏南京,,,,,,)【摘要】目的:研究桂枝茯苓骨架缓释双层片，探讨其体外释药机理及药效学。方法:制备多种成分同步释放的桂枝茯苓骨架缓释双层片，并以多种成分的释放度为指标，引用多种数学模型拟合释药曲线。结合药效学指标评价其剂型的合理性。结果:多种数学模型综合判断桂枝茯苓骨架缓释双层片中苦杏仁苷(,,,)、芍药苷(,,,,,,,)以扩散释放为主;而丹皮酚 (,,,)以骨架溶蚀为主。桂枝茯苓骨架缓释双层片与原剂型桂枝茯苓胶囊药效学无显著差异。结论:桂枝茯苓骨架缓释双层片剂型合理，多种成分可同步释放且具有明显的缓释效果。，关键词,桂枝茯苓骨架缓释双层片;释药机理;药效评价;同步释放 ,,, ,,,,,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,,,;,;, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,(,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,，,,,,, ,,,—,,，,,,,, ,,,,,,,,,，,,,, ,,(,,,,,，,,,, ,,,,, (, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,;,,,,,，,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,;,,,，,,,;,,,, ,,,,,,，,,,,,; , ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,，,,,,, ,,,,,,;,,,,;,,,,,,,,,,,,，,,,,,,, ,,,,,,，,,,,,)〔,,,,,,;,, ,,,,;,,,,:,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,—,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,,,;,,(,,,,,,,:,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,; ,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,, ,, ,,;, ;,,,,,,,,(,,,,,,,,, ,,,,,,,;,;, ,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,(,,,,,,,:,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,; ,,,,,,,, ,,,,, ,,?, ,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,，,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,，,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,(,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,, ,,,;,,,,,,,,;, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,(,,,;,,,,,,:,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(【,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,;,,,,,,, ,,;,,,,,,;,,,,;,;, ,,,,,,,,,,;,,,;,,,, ,,,,,,,,, 中药复方传统剂型在疗效人类疾病和康复保健中，发挥着较大的作用。但是，随着医学【作者简介】廖正根(,,,,()，男，博士、副教授，研究方向:药物新剂型与新技术，,,,:(,,,,),,,,,,,，,,,,,, ,,,,,,,,,,(;,, 第,,页，共,,,页 ,,,,,,,,,,,,, ,, 校瑁幔颍恚幔悖澹酰簦椋悖?,,世界中联,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,药药剂等业委员会第五届学术年会?中华中医药学会制剂分会学术年会的发展，传统剂型已经不能完全适应现今临床应用的要求。中药复方释药系统的研究也已成为当前中药制剂研究的热点。然而目前，许多中药剂型的缺乏理论依据。科学合理的中药复方释药方式，已成为药剂工作者重要的工作内容之一。朱盛山等认为【,】合理的中药复方释药应当使复方中理化性质不同的各成分达到同步或均衡释放。商洪才认为,,,:中药复方释药系统应根据药物本身的特点和不同征候和治疗时期等需要精确设计。即必须遵循中药复方配伍的整体观和用药思想，使中药复方配伍理论和作用通过改变复方中效用组分的不同释药行为得到最大限度的体现和发挥，充分达原中药复方的组方意图和功效。另中药复方释药系统的评价大多仍采用指标性成分作为评价指标，这种方法存在一定的局限性。 桂枝茯苓胶囊是由桂枝茯苓丸经剂型改革而来，其处方来源于东汉?张仲景的《金匮要略》，由桂枝、白芍、茯苓、牡丹皮和桃仁组成，是目前治疗妇科血瘀疾病的首选药，其有效成分有芍药苷(,,,,,,,)、苦杏仁苷(,,,)、丹皮酚(,,,)等多种成分。但其临床服用次数较多，服用量较大(一日,次，一次,粒)，而所治妇科疾病多为慢性病，需长期服用。桂枝茯苓胶囊原方中有效成分(芍药苷、苦杏仁苷、丹皮酚)具有体外同步释放、体内同步吸收的特性,,一?。因此，我们制备了桂枝茯苓骨架缓释双层片(一日,次，一次,片)，并对其释药特性及机理进行初步探讨，结合药效学指标评价剂型的合理性。,材料与方法,(,试验药物 苦杏仁苷、芍药苷、丹皮酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为:,,,,(,,,,,,、,,,,(,,,,,,、,,,,(,,,,)、桂枝茯苓胶囊(江苏康缘药业股份有限公司，批号:,,,,,,)、茯苓醇提取物、茯苓水提取物、丹皮酚环糊精包合物、桂枝挥发油环糊精包合物、芍药苷提取物、苦杏仁苷提取物(自制)、右旋糖酐(分子质量,,万，安徽环球药业有限公司提供)、肝素(国药集团化学试剂有限公司，批号:,,,,,,,,,)。羟丙甲基纤维素(,,,,)，乙基纤维素(,;)，英国卡乐康辅料公司上海公司惠赠。,(,动物 健康家兔(,(,,,,(, ,,)，雌性，由南京青龙山试验动物厂提供，合格证号:,,,,(苏),,,,,,,,,。,(,试剂 甲醇:色谱纯;其它试剂均为分析纯。,(,仪 器 ,,一,兰花式压片机(上海天祥健台制药机械有限公司);,,,,,智能片剂硬度仪(天津大学无线电厂);,,,,电子天平(常熟市双杰测试仪器厂);,,,,,,,,智能药物溶出仪(天津大学无线电厂制造);,,,,,,,,,,,系列高效液相色谱仪(,,,检测器)。,,,,,,,血液黏度测试仪，北京世帝科学仪器公司。,(,方法 第,,页，共,,,页 ,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,;,,,,;, ,, ,,,,,,,,,, 世界中联中药药剂专业委员会第五届学术年会?中华中医药学会制剂分会学术年会,(,(,苦杏仁苷、芍药苷、丹皮,,,,同时检测方法嘲,,,,,,,,,,,,,,,色谱柱(,(, ,,,,,,,,,，,?,)，流动相乙腈(水(含,,,磷酸)，洗脱条件为:,,,, ,,,，乙腈一水(,,:,,)，,,,,,(, ,,,，乙腈由,,,线性增加到,,,，,,(,(,, ,,,，乙腈一水(,,:,,)，流速,(, ,,,,,,，检测波长,,, ,,(,,, ,,,)，,,, ,,(,,,, ,,,)，,,, ,,(,勉, ,,,)。,(,(,释放度的测定及释放曲线比较按中国药典(,,,,年版)附录?;法，溶出介质为水，转速为,, ,,,,,，恒温,,,,,(,,,，分别在投药后,，,，,，,，,，,,，,, ,取样, ,,，同时补加同温等量蒸馏水。样品经微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，按,(,项下方法进行含量测定并计算各成份累积释放度。 采用相似因子仍)即】进行释放曲线相似性比较。正计算式为: ,呸,,,,,,〔,，(,,,)?(,打,,。),】,,，,拳,,,〕 ,,,其中，,“和,一分别代表受试和参比制剂第,点的平均累积释放度;,为测试点数。如果计算结果大于释放度平均差异为,,,时,,职临界值,,，则认为两条释放曲线相似。,(,(,桂枝茯苓骨架缓释双层片制备,缓释层处方组成:苦杏仁营提取物,,, ,,、芍药苷提取物,,(, ,,、,,,,,, ,,(, ,,、,,,, ,,(, ,,。 ,缓释层处方组成:茯苓提取物,,(, ,,、丹皮酚包合物, ,, ,,、桂枝挥发油包合物,,(,,,、,,,,,,, ,, ,,? 制备工艺:将上述各提取物、包合物、辅料分别过,,,目筛备用。将药物,层按处方量称取各原辅料，混匀，预压，再加入处方量的药物,层，压片。,(,(,释放度试验方法学考察浆转速考察:选择了,,,、,,、,, ,,,,,,三种不同转速进行释药曲线的考察。 溶出介质?瘢貉?袼 ?姿嵫位撼逡海ǎ穑龋剑叮 福 ?希 ?,,,,, ,,,三种释放介质，考察桂枝茯苓骨架缓释双层片在不同释放介质中释放速率差异。,(,(,体外释放度测定方法按中同药典(,,,,年版)附录,,第一法测定体外释药特性:随机取样品,片分别置于经超声脱气的,,, ,,(小杯满杯),,,(,磷酸缓冲液介质中，转速为,, ,,,,,，恒温,,,,,(,,,，分别在投药后,，,，,，,，,，,,，,,,取样, ,,，同时补加同温等量,, ,(,磷酸缓冲液。样品经,(,, ,(,微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品试液，按,(,项下测定方法测定苦杏仁苷、芍药苷和丹皮酚峰面积，计算释放量，以片剂中实际含量为,,,,，计算苦杏仁苷、芍药苷和丹皮酚累积释放百分率。,结果,(,释放度的测定结果,(,(,释放度试验方法学考察结果浆转速考察:相似因子计算结果表明以,, ,,,,,的,,,、,,,,,,,和,,,为参比制剂，浆速为,,、,,, ,,,,,时相应成分的正值分别为,,、,,、,,: ,,、 第,,页，共,,,页,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,;,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,世界巾联中药药剂专业委员会第,,届学术年会?中华中医药学会制剂分会学术年会,,、,,。浆速为,,、,, ,,,,,时，三个成分的释放速度变化不明显，而转速为,,, ,,,,,时,,,、,,,,,,,的释放速度有较大增加，说明桨的转速对,,,、,,,,,,,的释放有影响，提示药物在胃肠道的释放可能受胃肠道蠕动的影响。参考药典缓控释固体制剂体外释放方法中浆法的要求，选择,, ,,,,,,的浆速作为桂枝茯苓骨架缓释双层片释放度试验条件。 溶出介质选择:相似因子计算结果表明分别以水中的,,,、,,,,,,,，,,,为参比，,(,,,,,, ,,～、,,,(,磷酸缓冲液中的相应成分的压值分别为,,、,,、,,，,,、,,、,,，表明释放介质对丹皮酚的释放有较大影响，而对,,,、,,,,,,,的释放影响不大。由于本研究中的缓释制剂主要在停留时问较长的肠道释药，故选用,,,(,磷酸缓冲液作为释放介质。,(,(,桂枝茯苓骨架缓释双层片体外释放结果制备工艺制备桂枝茯苓骨架缓释双层片，取,片投入溶出杯中，按,(,(,释放度的测定方法测定每片中苦杏仁苷、芍药苷和丹皮酚,,个小时的累积释放百分率，每个成分同时问点平均累积释放率见表,，释放曲线见图,。结果表明本品能够稳定地缓释,, ,，释放均匀性好，能够有效地控制药物在胃肠道中的缓释行为。 表,释放均匀度测定结果(,,,(,士,,) 拿 、,一 恻 辎 皤; ? ?加? ?,; 加 , , , , , , , , , , , ,, ,, ,涎 释 , 时间(,) 图,桂枝茯苓骨架缓释双层片中三种成分释放曲线,(,释药方程及释药模型的初步探讨 以零级释放模型、一级释放模型、,,,,;,,模型、,,,(,,,,,,,,,,,及,,,,,,,,,,,,,,模型，对桂枝茯苓骨架缓释双层片中苦杏仁昔、芍药苷、丹皮酚的释放数据进行拟合，结果见表,。 第,,页，共,,,页 ,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,;,,,,;, ,, ,,,,,,,,,, 世界中联中药药剂专业委员会第五届学术年会?中华中医药学会制剂分会学术年会 办程拟合结果表明三个成分,,,,,,,,,,,,,方程的,值均在,,,,,(,,范围内，说明该药物的释放为非,,;,,,,扩散释放机制，即为扩散和骨架溶蚀二者的协同作用。由拟合方程相关系可知，,,,、,,,,,,,和,,,不同模型拟合接近程度分别依次为,,,,;,,模型,,,,,,,,,,,,,,,模型,,,,,,,,,,,,,,模型,一级释放模型,零级释放模型;,,,,;,,模裂,,,,,,,,,,,,,,模型,,,,,,,,,,,,,,,模型,零级释放模型,一级释放模型;,,,,,,(,,,,,,,模型,,,,,;,,模型,,,,,,,,,,,,,,模型,零级释放模型,一级释放模型。因而可以推断,,,、,,,,,,,以扩散释放为主;而,,,以骨架溶蚀为主。,(,桂枝茯苓骨架缓释双层片对右旋糖酐血瘀模型家兔血液流交学的影响 取家兔,,只，随机分为空白组、血瘀模型组、模型，桂枝茯苓胶囊组、模型，桂枝茯苓骨架缓释双层片组。空白组:空胶囊囊壳,粒,只?,,,?,,;血瘀模型组:空胶囊囊壳,粒，只?,,,?,,:模型，桂枝茯苓胶囊组:,粒，只?,,,?,,灌胃给予桂枝茯苓胶囊;模型，桂枝茯苓骨架缓释双层片组:规格为,(, ,，片的片剂,片,只?,,,?, ,灌胃给予桂枝茯苓骨架缓释双层片。除空白组外，其余各组于给药 的第四天、第五天耳缘静脉注射,,,右旋糖酐, ,,?,,,(,,,(,,。除空白组心脏直接取血, ,,置肝素抗凝管外，以上,组均于末次给药后,, ,,,，心脏采血, ,,置入肝素抗凝管。上述,批次抗凝血均于取血后立即分别取, ,,全血、, ,,血浆(取抗凝全血, ,,以,,,, ,,,离心,, ,,,后汲取)置,,,血液黏度检测仪(保持温度在,,,,，设定,、,、,,、,,,五档切变率)，分别测定全血黏度、血浆黏度，高切(,,,)、低切(,,,)全血还原黏度;余血分别测定红细胞压积(,,,)、血沉(,,,)和纤维蛋白原。 桂枝茯苓骨架缓释双层片对右旋糖酐血瘀模型家兔血液流变学的影响结果见表,，试验 第,,页，共,,,页 ,,,,, ,,,,,,;,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,世界中联中药药剂专业委员会第五届学术年会?中华中医药学会制剂分会学术年会结果显示:缓释片组和桂枝茯苓胶囊组均能改变全血黏度和红细胞压积，两者比较无显著性差异。 表,桂枝茯苓骨架缓释双层片对右旋糖酐血瘀模型家兔血液流变学的影响与模型组比较。,,,(,,，“,,,(,,;与空白组比较?,,,(,,，??,,,(,,。,讨论,(,溶出体积的选择，通常情况下，采用小杯法进行溶出度的测定时，使用溶剂的量为,,,,,。本实验发现，使用,,, ,,的溶剂时，由于溶剂与溶出杯盖问有一定的空隙，而丹皮酚会随水蒸汽挥发到这一空隙中，故即使完全密闭溶出杯，丹皮酚溶出度的测定结果也会有偏差，而采用,,, ,,介质，介质与杯盖互相接触，再加上溶出杯密闭，这种偏差基本上可消除，故本实验中溶出介质采用,,, ,,。,(,缓释制剂作为一种给药系统，其质量控制和评价的关键是药物释放具有特定的药代动力学特征。为了更能体现体内和体外释药的一致性，采用了与小肠,,接近的,, ,(,的缓冲液作为释放介质，使药物的释放更接近于体内。体外释放度研究表明，枝茯苓骨架缓释双层片的,、,、,, ,点的释放度均在设定的理想释放度范围内,,,,,盐《,,,、,,,,,,,,,,,、,,,,,,,鹤,,。由表,、图,可见，桂枝茯苓骨架缓释双层片具显著的缓释效应。,(,多种数学模型综合判断桂枝茯苓骨架缓释双层片中苦杏仁苷(,,,)、芍药苷(,,,,,,,)的释放机理，各种模型拟合的方程均能较好的描述缓释片中多种成分的释放曲线，其中桂枝 ,、万茯苓骨架缓释双层片,,,,,,,,,,,,,释放机制的,,,,,,修正式分析。,,,方程(,,,×,,为常数)中的指数撒征释放机制的重要参数，对片剂来说，当,(,,,,,,,(,,时，该片剂中的药物释放为混合型，即药物扩散和骨架溶蚀协同作用【,’,们。 第,,页，共,,,页 ,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,;,,,,;, ,, ,,,,,,,,,, 世界中联中药药剂争业委员会第五届学术年会?中华中医药学会制剂分会学术年会,(,为了进一步证实本制剂的合理性，比较枝茯苓骨架缓释双层片与桂枝茯苓胶囊药效学差异。结果表明:桂枝茯苓胶囊组和枝茯苓骨架缓释双层片组等剂量分别采用日给药,次和,次在改善右旋糖酐血瘀模型家兔血液流变学和红细胞压积方面具有相同的药效，说明两者在生物学上具有等效性。当然，在药效学评价指标上，如能考察两者对模型动物子宫肌瘤方面的等效性更具有意义，有关这方而的研究有待进一步进行。 ，参考文献,【,】朱盛山，袁旭江，李苑新(治疗冠心病中药复方缓释制剂均衡释放的研究(世界科学技术， ,,,,，,(,):,,,,,(【,】商洪才，高秀梅，郭利平， 等(丹参三七组方配比优选及信息综合评价(药品评价，,,,,， ,(,):,,,,,, ,(【,】廖正根，蒋且英，梁新丽，等(桂枝茯苓胶囊中,种活性成分体外溶出度的比较研究冲成 药，,,,,，,,(,):, ,,,一,,,,【,】廖正根，萧伟，平其能，等(桂枝茯苓胶囊中有效成分大鼠在体肠吸收研究(中国天然药物， ,,,,，,(,):,,,,,,,(【,】廖正根，凌娅，仲艳，等(,,,,同时测定精制桂枝茯苓胶囊中,有效成分【,】(中国中药杂 志，,,,,，,,(,):,,,,,,,,,(【,】,,,,,, ,，,,,,, ,,，,,,,,,, ,(,,,,,,,,,, ,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,—,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,〔,〕(，,, , ,,,,,，,,,,;,,,:,,,,,(【,】,,,,, ,,，,,,;,,, ,,(,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,五,,, ,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,—,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,, ,,， ,,,,, , ,, ,,;,,,,,, ,,,,,,〔,〕(,,,, ,,, ，,, ,,,,,， ,,,,，,,(,):,,,,,(【,】,,,, ,,，,,,,, ,，,,,,, ,，,,,,(，, ,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ;,,,,,,,,,,,,,,,,,,;, ,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,(,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,，, ,,,，, ,(,):,,,,,,,(【,】赵春顺，何仲贵，崔升淼，等(非诺洛芬钙亲水凝胶缓释骨架片释药机理的研究(药学学 报，,,,,，,,(,):,,,,,,,(【, ,】,,,,,, ,,，,,,,,, ,,(, ,,,,,, ,？,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,,(,,,(,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,(，,,,,,,,,，,,,,，,,(,):,,,,( 第,,页，共,,,页.