动物生理学实验目的

动物生理学实验目的 动物生理学实验指导 动物生理学实验目的、要求和实验室规则 一、实验课的目的 生理学是一门实验学科。它从一开始就建立在实验和观察分析基础上的。生理学的发展也离不开实验研究。家畜生理学实验课的目的是通过实验使学生逐步掌握生理学实验的基本操作技术，了解生理学实验设计的基本原理和获得生理学知识的科学方法，验证某些讲授过的生理学基本理论，帮助学生理解、巩固和掌握部分理论内容。更重要的是通过实验，使学生学会科学的思维方法，提高分析问题和解决问题的能力，培养学生对科学实验的严肃的态度、认真的精神、严谨的工作方法和实事求是的工作作风。 二、实验报告的写作与要求 (一)实验报告是对实验结果的总结，也是生理学实验课的基本训练之一。不论示教实验或自己操作的实验均应独立完成实验报告。写作应注意文字简练、通顺，书写清楚、整洁。 (二)实验报告的格式 1.学号、姓名、班级、组别、日期。 2.实验序号及实验题目。 3.实验目的。 4.实验方法:参考指导书作扼要描述，方法若有变动，另作简要说明。 5.实验结果:实验结果是报告的关键。对实验结果的可用文字说明、列表、绘图等方式进行，记录要真实、正确、详细。 6.讨论和结论:讨论和结论是实验报告的核心。讨论是根据已知的理论知识对结果进行解释和分析。要判断实验结果是否为预期的，如果出现非预期的结果，应该考虑和分析其可能的原因，还要指出实验结果的生理意义。实验结论是从实验结果中归纳出来的一般的、概括性的判断，也就是这一实验所能验证的概念、原则或理论的简明总结。在实验结果中未能得到充分证明的理论分析，不要写入结论。 实验的讨论和结论的书写是带有创造性的工作，应该严肃认真，不要盲目照抄书本。 三、实验室规则 1.遵守学习纪律，按时到实验室，做到有事请假，不得随意缺席。 2.对实验内容的理解程度，是实验能否顺利进行的关键。因此: 实验前 (1)仔细阅读实验指导，了解实验目的、要求、操作程序和注意事项。 (2)结合实验内容复习有关理论，做到充分理解。 1 动物生理学实验指导 (3)预测实验的各个步骤应得的结果。 (4)注意和估计实验中可能出现哪些异常现象。 实验中 (1)实验用器材在方便使用的基础上，力求整齐、清洁、有条不紊。 (2)按照实验步骤及，以严肃认真的态度进行操作，不能随意更动。不得进行与实验无关的活动。 (3)注意保护实验动物和标本，节省实验器材和药品。 (4)仔细、耐心地观察实验过程中出现的各种现象，进行认真思考和分析。 实验后 (1)将实验用器材整理好，所用器械擦洗干净，进行实验室的清洁整理工作。 (2)整理实验记录，得出实验结论。 (3)认真填写实验报告，按时交作业。 2 动物生理学实验指导 实验一 CPRS生理记录系统简介及应用 一、CPRS软件功能简介 CPRS软件包括一、二、三、四道生理记录仪、神经干动作电位和实验性心功能检测6种应用程序。前四种程序主要分别模拟生理记录仪功能，四种生理记录仪程序结构和操作相似，主要区别在于不同实验内容所用的通道数不同。神经干动作电位检测主要用于神经干动作电位显示、传导速度和不应期的测量。实验性心功能检测实际上是在四道生理记录仪的基础上通过专门的参数设置来实现。因此，CPRS软件的功能主要是多道生理记录仪的功能，以下分三部分叙述: (一)生理记录仪程序功能 程序启动后，提示用户将输入端置零，以便确定基线位置。在屏幕上显示的基线值(mv)在不断闪动，若此值偏离零点较大(如,500mv)，可调节零位(或平衡)调节器，至基线值接近零。利用这一功能可以鉴别传感器的灵敏度高低、零点漂移的大小等质量状况。另外，还提示用户在开机后，应等待一段时间(大约15~20分钟)，主要让机器及传感器等硬件有一定的预热稳定过程。然后进入程序的主菜单进行操作。 1.文件操作 文件操作主要是针对磁盘或内存中采样数据加以处理的过程: 文件名(实验名) 实验名就是记录数据存取的文件名。用户命名时，可输入1—11个字符。程序在保存数据时，要将用户的命名加以改变:只取前面四个字符，后面加上本程序的通道数(1—4)，再加日期的月号;扩展名的前两位是日号，后一位则是本次实验过程中存储文件的序号。一次过程可存16个文件，从而确保长时间使用过程中文件名不发生冲突。 读文件 这一功能只允许读两种数据文件。一是由用户命名并通过程序修改后的记录数据文件，二是读取暂停记录后存入磁盘的临时记录数据文件。后一文件仅仅是记录暂停时内存采样数据，每次暂停时都会覆盖上次采样数据。一旦读入文件后，程序就处于该文件存盘时的状态。 写文件 实验中或实验结束时，运行此功能可将已有的记录按已给定的文件名(实验名)存入磁盘，并向用户报告该文件名，同时将内存清零，下一次记录重新开始。 部分删除 当需要删除无效记录时，可按标号进行删除处理。部分删除后，标号总数将减去被删除的数，前面的标号不变，后面的标号按顺序发生改变。 全部删除 直到当前，所有记录数据都认为是无效的，则可运行全部删除，单保留该文件的设置状态。这在进行重复性实验时是非常有用的:只要硬件部分不改变，全部删除后，毋须进行定标、设置等，修改文件名后可直接进行重复性实验记录。这在教学、科研中是常见的。 2.记录条件设置 3 动物生理学实验指导 每次进行新的实验记录之前，若需要将机器调整到符合实验要求的状态(如被记录信号的性质、数据单位、输入通道、量程等)，必须通过设置或选择确定相应参数，使记录的数据符合实验要求。进入设置后屏幕上显示一表格，用户依表格中的内容按顺序逐项设置或选择: 注识符 实验过程中用户要求特别注明所记录的曲线位置，按注识符序号可一次性输入该注识符串。这对于标明实验过程中的各步骤或进程是非常必要的。注识符由1—6个字符组成，每次设置最多6条。 曲线命名 被记录的曲线由用户命名，如ECG、Bpa等，曲线名不得超过3个字符。 数据单位选择 数据单位不同，且Y轴标尺不一样，运算过程有别。因此选择数据单位就是:确定该曲线上数据的运算过程及Y轴标尺。右边黄色框内提供了几种单位选择，用户选择数据单位时，必须和被测对象相匹配，如压力测量，应选 O，ECG及呼吸幅值记录应选Mv，压力微分选mmHg/s，尿滴mmHg、Kpa、cmH2 选c/min等。 输入通道 硬件设有五个输入通道，其中1—4为主通道，5为辅助通道。但软件最多只能任选其中四个通道。心电图检测一般选第一通道，2—4通道的性能相同。输入通道是选择参数中首要的一项，其后的各参数都是该通道的属性。凡改变输入通道都要改变后面的参数，不管原来的内容是什么。 量程选择 量程共分四档，每档之间相差2倍。这里用衰减的倍数来表示，倍数乘以Y轴标尺最大值，就是实际信号的检测范围(既量程)。选择量程之前，需要对被测信号有一大致的估计，其最大值不应超过检测量程，否则必须增大量程。 基线移动 不同的实验阶段，信号幅值的波动可能较大，当曲线持续偏高记录道程中心位置(直流成分较大)时，为了使波动部分的记录处于中间，可上下移动基线达到目的。基线移动范围为+/-3格。 时间常数选择 每一通道有四档:第一通道为2s，0.2s、0.02s、0.002s;第2—4通道DC，2s、0.2s、0.02s。凡需要记录带直流成分(如动脉血压等)或变化周期很长(如大于5秒)的信号，选择DC档(即时间常数无穷大)，一般生理交流信号(如脉搏波、呼吸波、心电图等)选择2s或更小的时间常数。 记录速度选择 记录速度共分十二档，用时间分度值来表示，即X轴每格所表示的时间，分度值越大，速度越慢。选择速度时，根据信号变化的快慢和要求记录的精度(波形宽度)来确定。屏幕上2/3(第一窗口)用于显示曲线的波形变化，下1/3(第二窗口)用于显示这些波形所组成的曲线变化，二者的速度相差2—40倍，倍数越大，第二窗口速度越慢，观察的时间越长。用户根据这一规律，选择合适的倍数(W2 / W1)。 较正基线 由于输入端的变化或传感器的漂移，可能使基线偏离起始值较大。特别在高灵敏度时，为了获得较精确的数据，检查或较正基线值是重要的。栏目中的显示是原有的基线值。应特别注意:检查或较正基线时，必须将本通道的输入端置零。 4 动物生理学实验指导 定标 在输入端分别输入信号的同时调节系统的放大倍数，以达到改变输入、输出的线性关系，使记录的结果定量准确。微调是通过软件实现的，微调范围+ / -50%。 电刺激信号 在需要电脉冲刺激的实验中，刺激前必须调节电脉冲频率、幅值和脉冲宽度。频率范围2-25Hz，电压0.2-10V，脉宽1-250Ms。 通过以上的设置，达到如下目的:(1)确定实验过程中各步骤或阶段的注识符;(2)按照用户要求任意曲线的排序;(3)确定各信号的数据单位、输入口和量程;(4)基线定位;(5)确定时间常数与记录速度;(6)检测输入端是否正常，鉴别传感器质量的好坏;(7)信号定标及刺激脉冲参数的选择。 整个设置过程是从左至右逐项进行，其中输入通道、数值单位、量程和时间常数四项目，一旦设置完成就会自动锁定，如果需要修改，将光条移至第一列(通道)第一栏按“O”打开后方能进行。 3.运行 运行菜单包括记录、监视、回放、搜索、测试、打印六部分，这是软件的核心部分，分别运行这些功能以实现用户的目的要求。 记录 记录是指将输入的模拟信号放大、A / D转换后变成数字信号存储到内存中，并将这一信号显示在屏幕上的过程。其中包括输入注识符、电脉冲、刺激输出符、标号及对应的时间。在记录过程中可随时打开或关闭电脉冲的输出;也可用标号(无注识符)将一个长过程分成若干段。 一旦停止记录，所有数据立即以临时文件的形式自动存入磁盘，即使后来出现失误，记录结果仍可查到。这种临时文件的文件名是固定的，每暂停一次就将覆盖上一次的数据，所以临时文件始终只保存最后一次暂停时的记录数据。 监视 监视状态下，没有数据被储存。主要用于实验前的稳定过程、仅需要观察的实验过程、核实定标和速度选择正确与否等。左边黑框内的数字表示超时采样的点数(以分钟计)，数值越大，波形失真度越大。通过增大设置表中W2 / W1的比可将此值减小至接近零。在此状态下输入“:”可使显示速度变慢2倍，再输入一次变慢4倍。这样实时的波形可展宽4倍重显。 回放 将记录的波形部分或全部重显出来的过程叫回放。用户输入起止标号和压缩比(1—80)，可将原始波形或被压缩的曲线重新显示在屏幕上，以供分析、打印之用。 搜索 搜索是在第二窗口重显记录波形和曲线的过程。以后提供起点和压缩比，曲线就会如同记录过程一样重显出来，直到记录的终点。重显过程中，可暂停，退出。 测试 在回放的基础上可进行曲线各点数据的读出。屏幕下部检测表内有10项指标，移动光标可将曲线上各点的数据逐一显示出来，选择所需要的数据填入表内，最后打印出测试报告单。同时还可选择用户需要的波形或一段曲线切取出来组成另一种数据块文件，以便作进一步的分析处理。 打印 有五种打印结果:(1)回放的曲线;(2)搜索的曲线;(3)设置表;(4) 5 动物生理学实验指导 测试报告单;(5)实验过程中所有注识符、标号及其所对应的时间列表。 4.平滑 高灵敏度状态下记录的曲线，有时可能有高频干扰。平滑就是对记录曲线进行选择性滤波，滤掉调频保留低频成份。所谓选择性滤即选择某一曲线通过控制滤波次数从屏幕上观察滤波效果的过程。由于滤波是可控的并且能反复进行，所以能达到某种最佳状态。一旦完成，可代替原始曲线。较记录仪中硬件滤波要优越得多。 5.均值 取某一段记录，计算和打印各指标平均值、标准差、总和及平方和。以便进行其他统计处理。同时附有各均值的直方图比较。 6.返回DOS 程序结束时，会提示操作人员是否需要保存已存贮的记录，然后返回到DOS系统。 二、CPRS操作指南 实验前的准备 实验前对本次实验需要记录的曲线性质(交流 / 直流)、使用通道数、需要哪种传感器、应使用哪几种通道、记录过程中有些什么需要特别注明的位置等有详细，以便操作过程能顺利的实现。 1.输入端置零 进入程序后屏幕上提示将所用传感器或输入端置零，并等待一定时间(大约15分钟)，使传感器等有一定预热稳定的过程。若不需等待可敲空格键进入文件操作。 2.文件操作 敲回车键进入文件操作、给该实验命名。实验名可输入11个字符，按ESC键立即返回。在进行重复性实验时，先读取该实验已有的记录文件，进行全部删除并改变文件名，然后才能直接进入记录状态。 3.进入设置 向下移动红色光条到设置栏，敲回车即可。如果此时内存中已有记录数据希望保存下来。则应先进入文件操作运行保存数据，然后进入设置。 4.设置 从上到下，从左到右逐个栏目完成，不宜反复来做。设置注识符时，不允许超过6个字符。每条注识符必须敲回车键，否则将作废;“曲线名”任取三个字符后回车;再进入选择表的第一栏，本表前四项被封闭，按“0”键打开，但将会使内存中已有的记录数据全部清除。如果需要已有数据，必须事先保存好。如果不修改被封闭的 项目内容，则不需要“打开”，已有的数据也不清除。当要求修改这四项内容时，按“0”键打开后，基线值在闪动，必须将输入端置零，随后按空格键即可进入修改这四项内容。凡修改输入口，必须首先修改它，不管原来的内容是什么。且后面各项内容也都必须作修改。因为原有的内容是属于先前输入口的。每按一次Tab键，红色光条所处位置的内容就会改变一次。当要求对基线进行检测或调整时，要及时将输入端置零。按Tab键后，前面的基线值移至框外，框内显示的是当前的基线值。若框内外数值差甚大，则调节平衡或零位调节器，使二者近似相等。敲回车键结束基线调节，按Esc立即返回。 6 动物生理学实验指导 5.记录 正式实验过程必须运行记录，否则不能获得实验结果。在光条位于“记录”栏时，按回车键进入记录。当某时刻需要注识符时，从左下脚红色栏目内找到所需的注识符，按一下该注识符的符号，既该显示在所选记录曲线位置上。如果仅需要将记录分成若干段，按L键即可，此时只显示标号而无注识符。任何时候暂停记录，会自动存贮当前已有的记录，文件名RDATA,(,=1-4通道)，以防操作故障等引起记录数据丢失。再一次记录时，记录数据将与前面的连接在一起。屏幕左边中间位置处有脉冲符及“+”号显示，黑框内是脉冲幅值，需要输入刺激脉冲时，按一下小键盘的“+”键即可，再按一次就停止输出。运行过程中标号数、文件容量空间不断减少接近零时，要控制实验节奏，处理好已有的数据。 6.监视 将光条移至此栏后，敲回车键进入。此状态下不能输入注识符及标号，曲线数据也不进入内存，仅起监视作用。当运行一分钟之后，第一窗口左下角会显示一数字，它是延迟采样点数，用来判断两个窗口速度是否正常。这一数值在低速 / W值增大若干倍，则此时，一般都等于0，在高速时，可能增大，将设置表中W21 值会下降，一般不高于100即可满足要求。 有时为了使显示速度慢而采样速度(时间分度值)不变，可在监视状态下输入“:”，显示速度可降低2倍，再一次输入降低4倍。相反，输入“/”，关闭这一功能。减慢显示速度也可用于减小“延迟采样点数”值。设置这一功能，在记录状态下也适用。因此，回放时，如果压缩比=1，显示出来的波形就扩宽了2—4倍。 7.回放 进入回放的操作与前面相同。回放时，首先输入起始标号和终止标号，最后输入压缩比，所要求重显的曲线显示在第一窗口内，如果一幕未完，按空格键可继续观察。 8.搜索 需要重新观察一下记录过程或者要求重显某曲线段时，用搜索功能可方便地达到目的。输入起点，再输入压缩比，曲线图形在第二窗口重显。搜索过程中随时按V键，搜索既暂停，按Esc返回，按其他键搜索继续，直至记录终点。 9.检测 检测功能是在回放的基础上进行。一旦进入检测，第二窗口内出现一检测表，此时按右光标键，第一窗口左边有红色虚线移动，每按一下，移动一点，曲线数值也改变一次，当虚线移到需要的一点时，按回车键，所要获得的数据就填入表内。按F8是对本列数据加以选择:将光条移至要删除的数据上按回车此数据被删除(变成红色)，相反，将光标移至红色被删除的数据位置按回车，则可恢复。如此可连续填满11列。之后自动打印结果。表内数值单位与设置表一致，表的左上角有被测曲线段起点时间。另外，如果需要将波形或一段曲线切取下来，先移动红色虚线到起始点，按Tab键出现一条红线，再将虚线移至终点，第二次按Tab键又有一条红线，两红线之间就是被切取的波形或曲线段。每切取一次都会向用户报告文件名。 10.打印 进入打印功能后，有五个项目的打印菜单(参阅打印功能说明)，将光条移至所需一项，按回车键即开始打印。一旦打印开始，需待打印完后再进行别的操作。如果打印机出现故障，则会响铃通告。 11.定标 设置表的右边一列为定标，进入定标后按Tab键，如同监视状态一样。 7 动物生理学实验指导 此时如果输入标准信号(如输入100mmHg)，曲线就上升，左边的数字也每秒改变一次，按“，、,”号可将曲线上升或下降，左边的数值同时增加或减少，当数值等于输入的标准值时，按回车键，则定标完成。其他曲线的定标也是如此。 12.输出脉冲调节 将光标移至定标一列后，再按右向键。第二窗口出现一表格，上、中、下分别为频率、电压和脉冲宽度。利用上下光标键选项，“+、-”键改变数值。 13.出口 光条在此栏敲回车键，如果内存中已记录数据，则会提示是否要保存，如果不需要保存数据则按Y键确认，否则按任意键返回。 14.数据保存 无论实验过程中或实验结束，要保存数据，必须事先进入“文件”操作栏目，然后运行“保存数据”。一旦保存数据成功，会显示出该文件名，并将内存清空。 15.平滑 进入此功能后显示出一表格，其中“No”下面是曲线序号，“T”表示平滑次数。按一次Tab键即平滑一次，直至屏幕显示的波形比较满意，按回车键则 ，可显示出“OK”，否则此滤滤波结束。如果需要将滤波后的代替原始记录则按F2 波操作无效。 滤波时，可依次对各曲线分别进行，也可仅选择某一曲线。 16.均值 均值运算之前需要输入标号进行回放，然后按左右方向键移动垂直红线，准确选取要求运算均值的起始点，按Tab键可在左下方显示出被运算的各指标值，红线达到终点时按回车，立即显示出这一串数据的平均值、标准差、总和、平方和次数。如此可分别进行多个曲线段均值的运算。 8 动物生理学实验指导 实验二 神经干动作电位的测定 一、实验目的 观察和记录蛙坐骨神经的双相和单相动作电位的波形，理解产生的原因，并观察改变实验条件对神经动作电位的影响。 二、实验原理 神经的动作电位是神经兴奋的客观标志，表现为兴奋的部位相对于静止的部位来说呈负电性质，因此兴奋区和静息区之间存在电位差。若将两个记录电极置于完整的神经干表面，当动作电位先后流过二电极时，可记录到双相的曲线，叫做双相动作电位;若将两个记录电极置于神经干损伤部位的两侧，因神经纤维的完整性被破坏，动作电位传导受阻后，只能记录到单相的曲线，叫单相动作电位。神经纤维的动作电位是全或无的，神经干是由许多神经纤维组成的，由于不同神经纤维的兴奋性不同，故神经干的动作电位与神经纤维的不同。神经干动作电位的幅度在一定范围内可随刺激强度的变化而变化，而不是全或无的。 三、实验动物 蟾蜍或青蛙 四、实验器材及试剂 CPRS生理记录系统、引导电极、刺激电极、神经标本盒、手术剪刀1把、普通剪刀1把、镊子2把、玻璃分针2个、蛙板1块、培养皿1个、吸管1支、任氏液。 五、实验步骤和观察项目 (一)蛙坐骨神经干标本的制备 1.用蛙针破坏蛙的脑、脊髓，在荐尾关节水平上方1.5厘米处横端脊柱，弃去前半段，保留后半段备用。 2.剥离皮肤 先剪去尾椎和泄殖腔附近的皮肤，然后从脊椎的断断向下撕去皮肤，将其全部剥去，直至趾端。将剥掉皮肤的标本放在蛙板上，滴上任氏液。 3.分离标本为两部分 沿脊柱正中将标本均匀地剪成左右两半，一半浸入盛有任氏液的烧杯中，另一半作进一步剥制。 4.分离坐骨神经 先在标本的腹侧面用玻璃分针分离坐骨神经的腹腔段，。将标本转至背侧，沿股二头肌及半膜肌所形成的肌沟分离坐骨神经大腿段，向下至腓肠肌直达趾端。 5.剪断脊柱，使坐骨神经与一小段脊柱相连，剪去其它所有组织和骨头。 6.将标本放入盛有任氏液的培养皿中，供实验之用。 9 动物生理学实验指导 蛙坐骨神经——腓肠肌标本的制备 (二)实验装置与仪器的连接 实验装置采用CPRS智能生理记录系统中的生理示波器程序。连接方式:刺激 、S电极相连。电极插入主机背面的D/A输入口，刺激电极上的鳄鱼夹与标本盒的S12引导电极插头主机背面的第二个输入口，电极上的三个鳄鱼夹与R、R、地线相连。12时间常数选择2秒。 (三)将制备好的神经标本放在神经盒内。 (四)神经干动作电位测定的电脑程序操作步骤 1.开机 在C:,提示符后键入CD\ CPRCN，回车。再键入CPRS，回车，进入选择菜单，用光标选择示波器。在屏幕上方显示实验名称、日期、时间、常数以及存储的图形数。右下方显示出文件的主菜单:文件、记录、回放、检测、打印和出口六项。操作时可用上下光标键来选择，键F4，时间常数选择2S。确认所选项目后回车。屏幕右上方显示当前实验的指标有输入电压(Vin)、刺激强度(V)、刺激波宽(W)、以及Y轴标尺值。 2.文件操作 输入本实验名称回车，在屏幕右上方显示出输入的名称。当不需要输入文件名而直接按Esc，可进行存盘、读文件和删除操作、用左右光标键选择。 3.记录操作 10 动物生理学实验指导 进入记录后提示用M表示将曲线往下移一窗口。D表示第一窗口迭加到第二窗口的曲线上。Tab键变换可出现一个或二个刺激脉冲。在“调节”:的后面有“V/W/I/S”字样。其中按V进入刺激电压调节，按W进入波宽的调节，按I调节两个刺激脉冲的时间间期。当进入调节后反复按“+、-”改变相应的参数，用回车确认。其中V可调节范围是0.0—9.9V，W可调范围是0.08—1.60ms，I的范围是0.08—18.00ms，S量程的范围是0.5—8.0(其中数字越小灵敏度越高)。 (五)观察项目 1.分辨刺激伪迹 刺激伪迹是刺激信号在记录仪上显示的一个同步电位变化，它和动作电位信号的区别是:它往往在动作电位信号之前出现，它的信号幅度能随刺激强度的增大而增大，而动作电位的幅度仅在一定范围内随刺激强度的增强而增大，且改变刺激信号的极性时，动作电位的未相不改变。 2.坐骨神经干双相动作电位的观察 在主菜单文件一项输入实验名称。用Esc退出该项后，回到记录项。调节其中的刺激电压V?0.3V，刺激波宽W?0.16ms，量程S 0.5-1.0。可在屏幕上出现一个 、R之间互换。逐步增大刺激强度，双相动作电位。如果图形反相，可将引导电极R12 双相动作电位也会随着增大。当刺激强度增大到一定程度，动作电位不再增大，记录此时的动作电位。调节刺激电压大小，观察动作电位有何变化。 3.坐骨神经干单相动作电位的观察 用镊子将记录电极R、R之间的神经夹伤，屏幕上动作电位的波形发生了什么12 变化，并加以记录。(这一项可在测定神经干传导速度之后再做)。 11 动物生理学实验指导 实验三、动作电位传导速度的测定 一、实验目的 了解测定神经冲动传导速度的原理和方法。 二、实验原理 神经纤维的生理特性之一是具有高度的传导性。不同类型的神经传导速度不同，其传导速度主要受神经纤维的粗细、内阻及有无髓鞘的影响。如测得神经冲动在神经干上传导的距离与时间，可根据距离(s)、时间(t)、速度(v)三者之间的关系式求出神经传导速度，即:v=s/t 三、实验动物 蟾蜍或青蛙 四、实验器材与药品 与实验二相同 五、实验步骤和观察项目 1.制备坐骨神经干标本 与实验二相同 2.实验装置与仪器的连接 与实验二相同 3.观察项目 (1)记录出引导电极R、R之间的一个双相动作电位。键M键，将曲线下移至12 第二层。 (2)把引导电极R、R换接到R、R，引导出第二个动作电位。 1234 (3)分辨刺激伪迹和 两个动作电位第一相的起始部位。键D键，使第一窗口曲线与第二窗口曲线进行叠加。退出记录，进入检测。 (4)用左右光标键测量两个动作电位起始点的时间T和T。用尺量出先后两对12 引导电极之间神经干的长度(mm)，此数据输入后既得到神经冲动的传导速度。 12 动物生理学实验指导 实验四、坐骨神经干不应期的测定 一、实验目的 测定蟾蜍或蛙坐骨神经干的相对不应期和绝对不应期。 二、实验原理 神经是可兴奋组织;当接受一次刺激而被兴奋之后，其兴奋性将会发生规律性的时期变化，依次经过绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期，然后再恢复到正常的兴奋性水平。 为了测定神经一次兴奋后兴奋性的变化，可先给予一定强度的刺激(条件性刺激)，在神经兴奋后，按不同时间间隔给予第二个刺激(检验性刺激)，根据标本对检验性刺激反应的兴奋阈，来判定神经组织当时的兴奋性。在本次实验中第一个(条件性)和第二个(检测性)刺激采用参数完全相同，在不同时间间隔内检查第二个刺激所引起动作电位幅值大小，作为反映部分神经纤维兴奋性变化规律的指标。 三、实验对象 蟾蜍或蛙 四、实验器材和药品 与实验二相同。 五、实验步骤和观察项目 1(在屏幕上引导出一适当的动作电位，用Tab键转换出二个相同条件刺激脉冲。 2(键I和“+、-”来调节两个刺激脉冲的时间间隔，同时观察第二个动作电位与第一个动作电位峰值大小。当两个刺激脉冲的时间间隔从O毫秒开始慢慢增加。如果仅有第一个脉冲产生动作电位，而第二个脉冲不能引起神经干产生动作电位，表示这两个刺激脉冲的时间间隔短于该神经的绝对应期。当第二个刺激脉冲的时间间隔增加到刚能引神经干出现第二个幅值很小的动作电位时，表示这两个刺激脉冲的时间间隔稍超出绝对不应期。逐渐增加两个脉冲的时间间隔，可见第二个动作电位幅值增大，当第二个动作电位增大到与第一个动作电位幅值相同时，这两个刺激脉冲的时间间隔即代表神经兴奋完全恢复所需要的时间。 3(检测 可将要进行测量的曲线用M下移到第二窗口，可分别测量动作电位在绝对不应期时两刺激脉冲的时间间隔t、t。或测量神经干动作电位兴奋性完全恢12 复所需的时间。 完成上述实验后可根据需要选择存盘或打印。具体见操作步骤。 六、思考题: 为何随两个刺激脉冲时间间隔的加大，第二个动作电位的幅度值也逐渐增大? 13 动物生理学实验指导 实验五 蛙心灌流 一、实验目的 学习离体蛙心的灌流方法，观察内环境理化因素的变化对心脏活动的影响，初步认识递质、受体及其阻断剂的作用。 二、实验原理 离体和脱离神经支配的动物心脏，若保存在适宜的环境中，在一定的时间内，仍能保持自动的，有节律的舒缩活动。本实验所用灌流液——任氏液,是—种比较接近两栖动物内环境的液体;因此用任氏液灌流蛙心。蛙心仍能近于正常地跳动相当长时间。在此基础上，改变灌流液的理化性质，心脏的活动也会随之改变。这说明内环境的相对稳定，是维持心脏正常活动的先决条件。另外，心脏受植物性神经支配。当交感神经兴奋时，其末稍释放递质去甲肾上腺素，作用于心肌细胞膜上的β受体，从而使心跳加快、加强。当迷走神经兴奋时，末稍释放递质乙酰胆碱，作用于细胞膜的M受体，从而使心跳变慢、变弱。因此，当把递质或受体阻断剂直接加入灌流液中时，心脏的活动也会发生相应的变化。 三、实验对象 蟾蜍或蛙 四、实验器材和药品 蛙类手术器械一套、蛙心夹、蛙心插管、铁支架、双凹夹、试管夹、蛙板、小烧杯、滴管、棉线、CPRS智能生理记录系统、机械一电换能器、任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl、1%KCl、3%乳酸、2.5%NaHCO、1/万肾上腺素、1/万乙酰胆碱 23 五、实验步骤 1(暴露心脏 取蟾蜍1只，用探针刺毁脑和脊髓后，将蟾蜍仰卧固定在蛙板上，用镊子提起胸骨，后端腹部的皮肤，剪一小口，然后将剪刀由切口处伸入皮下，向左右，两侧锁骨外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。用镊子提起胸骨后端的腹肌，在腹肌上，剪一小口，将大剪刀伸人胸腹内，剪断左右乌喙骨和锁骨，使创口成一个倒三角形。用小镊子提起心包膜，用小剪将心包膜剪开，暴露心脏。 2(插蛙心插管 用连线蛙心夹在心室尖端夹住心尖约lmm。将蛙板倒转、使动物头端靠近实验者。结扎右主动脉，在左主动脉下穿一线以备固定插管用。用小剪在靠近动脉圆锥处，朝心脏方向将左主动脉斜形剪开一半(注意:既要剪破血管让血流通出，又不把血管剪断)。取一管尖大小适宜的蛙心插管，注少量任氏液人管内，左手用小镊子夹住切口上缘。轻轻向上提，使切口扩大。右手持蛙心插管。在切口处插入动脉内，直达动脉圆锥，然后左手放下镊子，轻轻向右提起蛙心夹上的连线，使心室与动脉圆锥成一直线。在心室收缩时，右手向前并略向左推动蛙心插管，使之进入心室(如进人心室，插管中的液面会随着心室的舒缩而下降低)。最后结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，防止标本滑脱。提起插管，剪断左右侧动脉分支，前后腔静脉(注意勿损伤静脉窦和心房)，摘出心脏。用任氏液反复冲洗心脏直至插管内任氏液完全澄清无色。在插管的下1/3处画一刻度或结一线作为标志， 14 动物生理学实验指导 每次换任氏液时，应使液面与此线相平。 3(用CPRS智能生理记录系统操作: 打开主机源 C:>CD CPRCN C:CPRCN>CPRS 屏幕显示程序操作目录，用上下左右键将光标移到一导生理记录仪程序:按回车屏幕显示记录窗口及左下角显示操作主菜单: 文件 设置 运行 平滑 均值 出口 此时，将张力换能器输出端插入主机背面的第二通道上，输入端置零，稍等片刻后，闪动的基线值基本稳定在接近于零的最小值，按空格键。 1)程序进入主菜单操作: 文件名、读文件、保存数据、部分删除 将光标移到“读文件”上，按回车键 输入本次实验文件名:* * * *按回车键。 将光标移到主菜单下的“设置”一栏，按回车。屏幕显示设置表:此时将换能器输入端置零，按空格键开始设置。在设置过程中，必须从上到下从左到右设置， 、最好一次完成。首先，在注释符一栏依次输入本次实验的观察项目:NaCL、CaCl2KCl等等，最多输6项，每一项后都要按回车以确认。然后输入曲线名:W.X。将光标移至“单位”一栏，此时如果要改变单位、通道、量程的指标，则按O键，将灰色屏幕改变成绿色，即可开始设置表内参数，按“上下左右键”可上下左右移动光标，按“Tab”键，可选择所需的参数指标。本实验按照下列表格设置: 注释符 曲线名 单位 通道 量程 时间常数 基线移动 分度值 基线值 定标 L=500 ,500 100% W.X mv 2 1 DC x w1NOT 1.NaCl W.X wv 2 1 DC x ,500 2.CaCl 2 3.KCl W/W 21W.X mv 2 1 DC x ,000 4. 5 5. 6. 设置完成后,按ESC键返回主菜单; 将光标先移到“运行”一栏，按回车键。屏幕左下角显示子菜单: 记录、监视、回放、搜索、检测、打印、返回 先将光标移到“监视”一栏，此时将张力换能器蛙心连线上的蛙心夹夹住铁支架上的蛙心尖。(注意:连线不要过于松紧)按回车键，计算机开始描记输入曲线，此时记录不进入内容，仅起监视作用。观察描记曲线满意后按ESC键暂停。 将光标移到“记录”一栏，按回车键，此时记录进人内存，同时曲线下自动出现序号“1”首先记录一段正常曲线，然后开始按顺序记录观察项目，并按观察项目输入预设置好的“项目注释符”。每记录一个项目时，前面都必须有一段正常曲线作对照。记录完所有观察项目后，按ESC键停止记录，并返回子菜单。 15 动物生理学实验指导 2)保存本次实验的记录方法: 将光标移到“返回”一栏，按回车。光标回到文件主菜单，在“文件”一栏按回车，出现文件子菜单，将光标移到“保存数据”一栏，按回车，这时出现保存的实验文件名，并将此文件名记住。 3)回放本次实验记录的方法: 首先，将光标移到“读文件”一栏，输入本次保存的“实验文件名”，按回车，然后按ESC键，将光标移到“运行”按回车，再将光标移到“回放”按回车，输入标号“i”回车到标号3或任何一个数字，回车，输人压缩比，回车，按空格键翻屏。 4)打印方法: 当回放所需的描记曲线显示在屏幕上时，按ESC键，将光标移到“打印”一栏，则出现打印子目录，将光标移到图I按回车即可。 5.观察项目: 1)描记正常曲线并进行分析: 记录曲线的疏密代表心跳频率:曲线的规律性代表心跳的节性;曲线的幅度代表心室收缩的强弱;曲线的顶点代表心室收缩程度;曲线的基线代表心室舒张的程度。 2)离子的影响: 吸出插管内的全部任氏液，换入0.65%NaCL并观察曲线变化。作用明显后，用新鲜任氏液换洗数次，待曲线恢复后，再进行下项实验(注意:以下各项实验后均要恢复正常再做下项实验)。 于任氏液中，混匀(注意:每次加药后都要混匀)，观察曲线加1,2滴2%CaCl2 变化。 加1,2滴1%KCl于任氏液中，观察曲线变化。 3)递质与受体阻断剂的作用: 加1,2滴1/万去甲肾上腺素于任氏液中，观察曲线变化。 加1滴1,万乙酰胆碱于任氏液中，观察曲线变化。 4)酸碱的影响: 加1滴2.5%NaHCO(或0.5%NaOH)于任氏液中，观察曲线变化。 3 加入1滴3%乳酸(或0.5%HCl)，观察曲线变化。在此基础上，再加1滴2.5% NaHCO(或0.5NaOH)观察曲线变化。 3 六、注意事项: 每次处理或给药后，都要立即在记录纸上注明作了何种处理或给何药，以免遗忘或分不清楚。作用明显后因立即更换任氏液，待曲线恢复正常后，再进行下一步实验。 加试剂时，每次不宜过多，先加1,2滴，作用不明显时，可再补加。 每个试剂瓶的滴管不要混淆，以免污染试剂，影响实验结果。 经常向心脏表面滴加任氏液，防止其干燥。 固定换能器时，应稍向下倾斜，以免从心脏滴下的水流人换能器内。 16 动物生理学实验指导 实验六、心血管活动的神经体液性调节 一、实验目的 观察心血管活动的神经体液性调节，学习哺乳动物动脉血压的直接测量方法。 二、实验原理 正常情况下，人和动物的动脉血压是相对稳定的。这是由于有关的神经反射性调节和体液因素经常作用的结果。 心脏受交感神经和副交感神经支配。心交感神经使心跳加快加强，传导加速，从而使心输出量增加，血压升高。支配心脏的副交感神经为心迷走神经，兴奋时使心率减慢，心室收缩力减弱，房室传导减慢，从而使心输出量减少，血压降低。 支配血管的植物性神经，绝大多数属于交感缩血管神经，兴奋时使血管平滑肌收缩，血管口径减小，外周阻力增加同时由于容量血管收缩，促进静脉回流。这些血管反应，导致血压升高。 神经反射性调节中最重要的是来自颈动脉窦和主动脉弓和压力感受性反射。通过改变心输出量和外周阻力，而调节动脉血压。 体液因素中最主要的是肾上腺素和去甲肾上腺素。肾上腺素对α及β受体均能激活，当心肌的β受体被激活时，使心跳加快加强，兴奋传导加速，心输出量增加(即强心作用)。肾上腺素使总的外周阻力下降。 因为它不仅使α受体占优势的皮肤及内脏血管收缩，还能使β受体占优势的骨骼肌血管大量舒张。去甲肾上腺素主要激活α受体，对β受体的作用很小，因而使外周阻力增加，动脉血压增高(即升压作用)。去甲肾腺素也可作用于心肌β受体而使心跳加快加强，但在整体内由于使血压升高可反射性地引起心率减慢。 三、实验对象 兔 四、实验器材和药品 CPRS智能生理记录系统、血压换能器、动脉夹、三通管2只、保护电极、兔手术台、哺乳动物手术器械、照明灯、注射器(5ml，10ml)、丝线、纱布、0.01%去甲肾上腺素、生理盐水。 五、实验步骤和观察项目 1(实验装置:CPRS智能生理记录系统一血压换能装置。 (1)连线:刺激电极的插人计算机主机背面的D/A输出口;另一端与保护电极相连。压力换能器的插口插入主机背面的第三口或第四口，在血压换能器上有两个小管分别装上两个三通管，其中一个三通管的一端，用一根12号针头连一个根塑料套管。以备插入颈总动脉，测血压用。另一个三通管，用来排气或注入肝素。实验时应将血压换能器固定，使它与动物心脏平齐。 (2)操作步骤:开机，然后开打印机。在C:\>提示符下键CD CPRCN?，进入了 17 动物生理学实验指导 目录CPRCN>，再键入程序名称CPRS后用光标键选择实验的一道记录程序。这时可见操作菜单有文件、设置、运行、平滑、均值、出口共六项。可用??来选择。屏幕上的基线值mv，表示换能器输入为0时的数值。该数值越小越好，如基线值>+500调节换能器上的小螺丝，使其减小。键空格，在文件一栏出现红色方框，表示选择 ? 可以进行 在文件一栏又有文件名、读文件、保存数据、部分删除、以及全部删除四项操作。首先输入本次实验名称，同时在屏幕右上方实验命令处显示所给的名称。以备储存文件以查找用。按Esc退出。回到主菜单。 ?设置?，按照设置表的顺序先设置好注释符一栏中的实验项目。具体可根据本次实验观察项目的先后输入一些标记，以便在曲线上做出与实验项目一致记号。在曲线名一栏键入Bpa表示检测项目为动脉血压。当光标进入通道一栏再按O键，打开封闭着的设置项后，键空格，再按照表格上的光标顺序逐项进行设置，设置时用光标先选好设置的一项，然后在这一项中用Tab来进行改变。其中每一项设置都要用?来确认。直到基线值一栏。用ESC退出。再?重新回到设置。可见所设项目已用灰色方框封闭。具体设置可见下图。 ?定标?将光标移动到定标一栏进行，屏幕提示Tab键和“+、-”来定标，目的是使要描记的压力值大小与标准血压大小值一致。先将水银血压计与压力换能器一侧三通管相连，另一个三通管外接一空注射器，将换能器与外界断开。用注射器注入一定压力的空气，这个压力同时可在血压计和屏幕上显示出，这时用“+、-”来调节，使屏幕上的压力值基本上与血压计上的压力一致。定好这个值用?加以确认，定标结束，按ESC退出。 注曲线名 通道 单位 量程 时间常数 基线移动 分度值 基线值 定标 释符 LBpa 3 mmHg 2× DC × 19 100% =NOT W=250 1sBpa 3 mmHg 2× DC × tN sBpa 3 mmHg 2× DC × tM W/W=10 21N E A ch ?本次实验需用调节刺激信号的大小。将光标继续右移，屏幕出现刺激信号一栏，(光标左移又回到设置项)。其中刺激频率为20,50Hz，刺激电压5,6V，刺激波度5,10ms按ESC退出该项。以上各项调节好后回到运行?，屏幕切换菜单，在 18 动物生理学实验指导 运行中又出现记录、监视、回放、搜索、检测、打印、返回，七个操作。这些项目可根据实验需要来进行。其中监视是用来观察实验曲线的波宽和波幅是否合适，这 ?，曲线开始进行描记，并根据所设置的注释符进行标记。例如:项不做标记。记录 在描记时键1，在曲线下方立刻出现记号stN;键2，曲线下方出现stM，„„。依次类推。在刺激神经时用键盘上的“+”进行变换。曲线下方可见刺激脉脉冲信号。实验完成后返回到主菜单，这时可在文件一栏进行存盘，删除等处理。也可在运行项中进行打印或检测。最后出口?，确认出口键Y，退出CPRS，回到DOS状态。 2.手术准备 (1)动物的麻醉与固定:用3%巴妥钠按1ml/Kg体重的剂量由耳缘脉缓慢注入，注射时应密切观察动物的肌张力、心跳、呼吸及角膜反射以免麻醉过深。麻醉后将动物背位固定于手术台上，剪去颈部用术野的兔毛以便进行手术。 (2)分离颈部的神经和血管:沿正中线作5,7cm的切口，分离皮下组织和肌肉，暴露气管。将气管两旁的肌肉拉开，便可在气管两侧深部找到包在颈动脉鞘内的颈总动脉、颈迷走中经，其中迷走神经最粗，交感神经较细，减压神经最细，而且常与交感神经紧贴在一起。一般先分离减压神和交感神经，然后分离迷走神经和颈总动脉。每条神经分离出2,3cm，并分别在各神经下穿线备用。本实验可分离左侧颈总动脉侧量血压，在左颈总动脉下穿两根丝线，作结扎和固定动脉插管用。而分离出右侧的迷走神经、减压神经供刺激用。 (3)插气管插管:分离气管2,3cm，在甲状软骨下做一倒“T”型的切口。然后插入Y型气管套管，并用丝线结扎固定。 (4)插动脉插管:在左颈总动脉的近心端夹一动脉夹，结扎其远心端(保留结扎线)，在动脉夹与结扎之间相距3cm作一斜切口(切勿剪断该动脉)，向心脏方向插入动脉插管(插入前，换能器和动脉插管内必须灌注抗凝剂)，用穿好的丝线扎紧插管，以防滑出。 (5)记录血压:旋开三通管，使动脉插管与血压换能器相通，并移去动脉夹，则可见屏幕上记录出血压曲线。 3(观察项目 (1)观察正常血压:血压曲线有时看到三种波形。 一级波(心搏小):是由于心室舒缩引起的血压波动，心缩时上升，心舒时下降，频率与心率一致。 二级波(呼吸波):是由于呼吸运行所引起的血压波动。吸气时，回心血量增加，血压上升;呼气时，回心血量减小，血压下降。 三级波:不常出现，可能是由于血管运动中枢紧张性的周期性变化的结果。 (2)牵拉一侧颈总动脉:手持左颈总动脉远心端上的结扎线向下牵拉5,10秒钟，观察动脉血压有何变化?为什么? (3)夹闭一侧颈总动脉:手夹闭右侧颈总动脉5,10秒，观察动脉血压有何变化?为什么? (4)刺激减压神经:用中等强度的电流刺激减压神经，血压有何变化?为什么? 19 动物生理学实验指导 (5)刺激迷走神经:用中等强度的电流刺激迷走神经15秒种，血压有何变化?为什么? (6)剪断和刺激颈交感神经对兔耳管网的影响:首先观察比较两耳血管网的数目和充血情况。然后结扎左交感神经，并在结扎线的尾侧剪断该神经，稍等片该，观察左耳的血管网与右耳有何不同?然后用中等强度的电流刺激左交感神经的头侧端(外同端)，再观察左耳血管网的弯化。撤除刺激后，左耳血管网又出现变化?为什么? (7)静脉注射去甲肾上腺素:从耳缘静脉注入0.01%的去甲肾上腺素0.3ml，动脉血压有何变化?为什么? (8)静脉注射酰胆碱:从耳缘静脉注入0.01%的酰胆碱0.2ml，动脉血压有何变化?为什么? 20 动物生理学实验指导 实验七、 红细胞渗透脆性实验 一、实验目的 测定红细胞膜对不同低渗抵抗力。亦即测定正常红细胞的渗透脆性。 二、实验原理 红细胞在低渗溶液中发生溶解，这种性质叫红细胞的渗透脆性。将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中，可以检查红细胞膜对于低渗溶液的抵抗力有多大。红细胞渗透脆性大的，则对低渗NaCl溶液的抵抗力小，只要NaCl溶液的渗透压稍有降低，此类红细胞便发生破裂而溶血。反之，脆性小的则对低渗NaCl溶液的抵抗力大。NaCl溶液的渗透压降到很低时，才能使这些红细胞破裂溶血。开始出现溶血时的NaCl溶液的浓度为红细胞的最小渗透抵抗力。完全溶血时的NaCl溶液的浓度为红细胞的最大渗透抵抗力。正常红细胞的最小渗透抵抗力为0.4~0.5NaCl%溶液，最大渗透抵抗力为0.3~0.35%NaCl溶液。一般说，刚成熟的红细胞膜的渗透脆性较小，而衰老的红细胞膜的渗透脆性较大。 三、实验动物 兔或鸭 四、主要器材及试剂 试管架1个、小试管10支、2ml刻度吸管2支、吸耳球2个、1%NaCl、蒸馏水、75%酒精棉球、3.8%枸橼酸钠。 五、实验步骤和观察项目 1.制备不同浓度的NaCl溶液 取小试管10支，排列在试管架上编好号。按表1向各试管内加入1%NaCl溶液和蒸馏水，充分混匀。使各试管溶液均为2.0ml。 表1 不同浓度的NaCl溶液 试 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 管号 试液 1%NaCl 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 0.60 0.70 0.80 0.90 1.00 1.10 1.20 1.30 1.40 1.50 蒸馏水 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 NaCl浓度 2.在上列各试管中加入体积相等的血液一滴，然后用拇指堵住试管口，将试管倒置一次，使血液与管内的NaCl溶液混匀。在室温下放置1~2h后观察结果。 3.观察项目 按下列标准判断有无溶血、不完全溶血或完全溶血。 21 动物生理学实验指导 (1)试管内液体下层为浑浊红色，上层为无色或极淡色的液体，说明红细胞没有溶解。 (2)小试管内液体下层为浑浊红色，说明有未溶解的红细胞，而上层出现透明红色，说明有部分红细胞破坏和溶解，称为不完全溶血。开始出现部分溶血的盐溶液浓度，既为红细胞的最小抵抗力(表示红细胞的最大脆性)。 (3)小试管内液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉积，说明红细胞完全溶解，称为完全溶血。引起红细胞最先全部溶解的盐溶液的浓度，既为红细胞的最大抵抗力(表示红细胞的最小脆性)。 (4)记录被检红细胞脆性范围，既开始溶解时的盐溶液浓度与全部溶解时的盐溶液浓度。 六、注意事项 1.配置不同浓度的NaCl溶液必须准确。 2.滴加的血滴大小应尽量相等并充分摇匀，勿用力震荡。 3.应在光线明亮处判定结果。 22 动物生理学实验指导 实验八、血液凝固实验 一、实验目的 了解血液凝固的基本过程及影响因素。 二、实验原理 血液流出血管后，既发生凝固，这是机体自然止血的机制之一。血液凝固是一系列复杂的生化过程，主要步骤有3，即(1)凝血酶原激活物的形成;(2)凝血酶原激活物催化凝血酶原转变为凝血酶;(3)凝血酶催化纤维蛋白原转变为纤维蛋白，从而形成血块。这三个主要步骤中都需要钙离子参与。 三、实验动物 兔或鸭 四、主要器材及试剂 试管架1个、试管9支、热水、冰桶、秒表、小三角烧瓶1个、3.8%枸橼酸钠、1%CaCl、5%草酸钾、肝素、液体石蜡、棉花。 2 五、实验步骤和观察项目 1.根据表2给各试管分别加上相应的物质。 表2 各种因素对血凝的影响 物 理 因 素 温 度 钙 离 子 肝 素 1 2 3 4 5 6 7 8 9 试管号 3.8%枸橼5%草酸应加物质 棉花 液体石蜡 对照 — — — 肝素8单位 酸钠3滴 钾3滴 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 1ml 1ml 1ml 1ml 应加血液 放 常 温 37?中 冰桶 放 常 温 放 常 温 2.实验观察 将试管倾斜放置托盘上，观察并记录试管凝血时间 六、注意事项 1.各试管加入血液后，要随时观察并记录凝血时间，尤其是放在冰桶和水浴锅里的试管更应注意。 2.准备实验时，注意每支试管的口径要大小一致，采血量也相对一致，不可相差太大。 3.制定凝血的标准要力求一致，一般倾斜试管达45?时，试管内血液不见流动，每隔30S观察1次。 23 动物生理学实验指导 实验九、血细胞的计数 [实验要求] 学习红细胞、白细胞计数的方法。 [实验原理] 血液中血细胞的计算是使用血细胞计数板。而且要用适当的溶液稀释后，放入计数板的计数室内，在显微镜下计算一定容积血液稀释中的血细胞个数，再将所得 3结果换算为1mm血液中的血细胞个数。 [动物与器材] 兔、血细胞计数板、血红蛋白吸管、1ml和5ml吸管、表面皿、显微镜、刺血针、酒精棉球、红细胞稀释液、白细胞稀释液、95%酒精、乙醚、1%氨水。 [方法与步骤] 1(采血及稀释 用1ml吸管吸取0.38ml白细胞稀释液放入表面皿内备用。另用5ml吸管吸取3.98ml红细胞稀释液放入表面皿内备用。 用酒精棉球消毒兔的耳缘静脉采血部位，用刺血针刺破血管，让血液自然流出， 3擦去第一滴血，待流出第二滴血时，用血红蛋白吸管吸血至刻度20 mm处，将血液吹入盛有白细胞稀释液的表面皿内，吸上清液冲洗沾在管壁上的血液。立即将吸 3管洗净和干燥备用。再用同样方法吸取血液至刻度20 mm处，将血液吹入盛有红细胞稀释液的表面皿内，轻轻摇匀。 2(血细胞计数板的结构 计数板是一块特制的长方形厚玻璃板，板面的中部有4条直槽，内侧两槽中间有一条横槽把中部隔成二长方形的平台。此平台比整个玻璃板的平面低0.1mm，当放上盖玻片后，平台与盖玻片之间的距离(即高度)为0.1mm。平台中心部分各以3 mm长，3 mm宽精确划分为9个大方格，称为计数室， 23每个大方格面积为1 mm，体积为0.1 mm。四角的大方格，又分为16个中方格，适用于白细胞计数中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为 230.04 mm，体积为0.1 mm。每个中方格又各分成16个小方格，适用于红细胞计数。 稀释后的血液滴入计数室前将表面皿摇振1-2min。将盖玻片放在计数板正中，用小吸管吸取摇匀的释液血液，将一小滴血液滴在盖玻片边缘的玻片上，使释液血液借毛细血管现象而自动流入计数室内。如滴入过多，溢出并流入两侧深槽内，使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果，需用滤纸片把多余的溶液吸出，以深槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少，经多次充液，易造成气泡，应洗净计数室，干燥后重做。红细胞和白细胞的计数，各使用一计数室。 3(计数 血液稀释液滴入计数室后，须静置2-3 min，然后在低倍镜下计数。计数白细胞时，数四个大方格的白细胞总数;计数红细胞时，数中央大方格的四个 24 动物生理学实验指导 角的4个中方格和中央的一个中方格(共5个中方格)的红细胞总数。计数时应循一定的路径，对横跨刻度上的血细胞，依照“数上不数下，数左不数右”的原则进行计数。计数白细胞时，如发现大方格的白细胞数目相差8个以上;计数红细胞时，如中方格的红细胞数目相差20个以上，表示血细胞分布不均匀，必须把稀释液摇匀后重新计数。 4(计算 3血内的白细 白细胞数:将4个大方格内数得白细胞总数乘以50，即得每mm胞总数，因为: 3333 (1)稀释液0.38加入血20 mm(1ml=1c m=1000 mm，故20 mm=0.02 ml)，使血细胞稀释20倍，换算成未稀释血时应乘以20。 3 (2)计数四角上4个大方格内的白细胞总数，其容积为1×1×0.1×4=0.4 mm。 3换算成每mm时应乘以2.5。这样把4个大方格内数得的白细胞总数乘以50(即20 3×2.5=50)即为每mm血内的白细胞总数。 红细胞数:将中央大方格中的5个中方格内数得红细胞总数乘以10,000，即得 3每mm血内的红细胞总数，因为: 3 (1)稀释液3.98加入血20 mm(即0.02 ml)，使血细胞稀释200倍，换算成未稀释血时应乘以200。 3(2)在计数室内只计数0.02 mm(即1个中方格的容积为0.2×0.2×0.1=0.004 333mm,5个中方格的容积为0.004×5=0.02 mm),换算成每mm时应乘以50。 这样把5个中方格内数得的红细胞总数乘以10,000(即200×50=10,000)即得 3每mm血内的红细胞总数。 [思考题] 在操作过程中，哪些因素可影响计数的准确性, [附] 血细胞稀释液配制法 1(白细胞稀释液 冰醋酸(破坏红细胞) 1.5ml 1%龙胆紫(染白细胞核，便函于计数) 1ml 蒸馏水 加至100 ml 2(红细胞稀释液 Nacl(维持渗透压) 0.5g NaSO(使溶液比重增加，红细胞均匀分布不易下沉) 2.5g 24 Hgcl(固定红细胞并防腐) 0.25g 2 蒸馏水 加至100 ml 25 动物生理学实验指导 实验十、心跳起源的分析 一、实验目的 用结扎法观察心自动节律性活动、分析蛙心起搏点部位 二、实验原理 心脏的特殊传导系统内含有自律细胞，因此具有自动节律性，但各部分的自律性高低不同。两栖类动物心搏起点是静脉窦(哺乳动物是窦房结)，自律性也以静脉窦(窦房结)为最高。正常的心脏搏动每次都由静脉窦(窦房结)发出冲动，沿心房传至房室结，再由房室结经房室束传至心室肌，引起心肌收缩。如给心搏起点一个刺激，则心跳频率发生变化;如阻断心搏冲动的正常传导，则出现不同的收缩障碍。 三、实验动物 青蛙 四、主要器材及试剂 木蛙板、中式小剪刀、眼科剪、普通镊子、探针、秒表、蛙心夹、蛙钉、玻璃分针、棉线、任氏液。 五、实验步骤和观察项目 1.取一只青蛙，用探针捣毁脑和脊髓，仰卧固定在蛙板上，用镊子提起胸部中央的皮肤剪一小口，然后向左右两侧肩关节连接线处剪掉。用镊子捏起剑状软骨，在腹肌上剪一小口(注意不要伤及内脏器官)，沿皮肤切开的位置剪下一块三角形肌肉，即可看到心包内跳动的心脏。小心用镊子夹起心包膜并剪开，暴露心脏。 2.实验观察 (1)认识蛙心各部分的构造和名称 自心脏腹面认识心室、心房、动脉圆锥(动脉球)和主动脉，然后用玻璃分针把蛙心向前翻转蛙心，从心脏背面区别静脉窦和心房(也可用蛙心夹夹住心尖翻向头端)。静脉窦略呈灰兰色，它位于前后腔静脉汇合后入右心房处，静脉窦与右心房间有一弧形白色条纹为界，叫窦房沟。 (2)观察蛙心各部分收缩的顺序，翻转蛙心，观察静脉窦、心房、心室三部分的跳动次序，并记录心率。 (3)起搏点观察 ?记录蛙心心率(窦性节律) ?在心脏腹侧，用眼科镊子在动脉干下方穿一线，将蛙心脏翻向头端。在静脉窦和心房交界处可见到一白色半月形沟(窦房沟)，沿此沟用丝线结扎，此为第一斯氏结扎。结扎后观察静脉窦和心房的跳动频率有何变化,如心房、心室停止跳动，注意何时恢复跳动及静脉窦与心房的频率。 ?用丝线沿房室沟作第二斯氏结扎后，观察心房、心室的跳动频率有何变化,如心室停止跳动，则记录其恢复跳动的时间及频率。 26 动物生理学实验指导 六、注意事项 1.结扎部位要准确，结扎时用力逐渐增加，直至心房、心室停止跳动。 2.实验过程中，要经常用任氏液湿润标本，以保持组织的兴奋性。 27 动物生理学实验指导 实验十一、期前收缩与代偿间歇 一、实验目的 学习在体蛙心脏活动的描记方法，理解期前收缩与代偿间歇的发生机理。 二、实验原理 心肌的特性之一是有效不应期长，约相当于整个收缩期和舒张早期，在此期间无论给予任何强度的刺激，都不能使之产生动作电位。如果在有效不应期后，且窦房结(或静脉窦)发出的正常节律性兴奋到达之前，给心脏施加阈上刺激，即可引起一个提前出现的收缩，叫期前收缩或额外收缩。期前收缩也同样存在有效不应期，因此，当静脉窦的正常节律性兴奋传到心室往往落在期前收缩的有效不应期内，也不能引起心室兴奋和收缩，心室停止于舒张状态，直到下次正常节律性兴奋到达时，才能恢复正常的节律性收缩。所以在期前收缩之后，就会出现一个较长时间的间歇期，称为代偿间歇。 三、实验动物 青蛙 四、主要器材及试剂 同实验七 五、实验步骤和观察项目 1.暴露心脏 取一只青蛙，用探针破坏脑和脊髓，然后仰卧固定于蛙板上，暴露心脏(方法同实验四) 2. .CPRS智能生理记录系统的操作步骤 打开电源; 键C:,,CD CPRCN回车 C:,CPRCN,CPRS回车 屏幕显示CPRS生理智能计算机程序目录，将光标移到“单导生理记录程序”一栏，回车。 屏幕显示第一窗口为描记曲线基线值; 第二窗口为左下角显示操作主菜单;文件、设置、运行、刺激、定标、出口 此时，将张力换能器输入端置零，稍待片刻后，闪动的基线值基本稳定在500mm以内。 按空格键; (1)则在主菜单文件一栏出现红色光标，按回车键; 显示子菜单:文件名、读文件、保存数据、部分删除、全部删除; 首先，红色光标落在“文件名”上，按回车键; 出现输入实验名:(不得超过11个字)按回车键确认;其它文件根据需要按“? 28 动物生理学实验指导 ?”和回车来确认;确定好后，按ESC键退回主菜单。 (2)用??键将光标移到设置一栏，按回车键。 屏幕显示设置表:同时表中基线值在闪动，提示将换能器输入端置零，然后按空格键，再开始设置。出现设置表格: 注释符 曲线名 单位 通道1—6 量程 基线移动 时间常数 分度值ms 基线值mv QD Mv 2 0.5 X DC ?500 W1?1000 L=NOT QD Mv 2 0.5 X DC ?500 QD mv 2 0.5 X DC W2 / W1 ?500 4 注:在设置过程中，必须从上到下，从左到右，最好一次完成设置过程,不要来回改变参数。 首先，在注释符—栏，可输入本次实验项目，每次键好后按回车键。最多可输入6项。则光标跳入曲线名一栏，按同样的方法输入本次实验的文件名:“QD”。按“上下左右”光标键，将光标右移到“单位”一栏。先按O键，然后按“Tab键”与“上下左右键”， 选择单位“mv”。然后将光标移到“通道”一栏，按同样方法选择通道“2”。再将光标移到“量程”一栏，选择“0.5~1”。基线移动:“O”; 时间常数:“DC”。分度值:W1:“250-1000”，W2/W1=10-25。基线值: “?500”即可按回车键确认。最后按ESC键退回主菜单。 (3)按“?”键出现刺激设置栏，按回车键。 屏幕显示:Hz、V、ms(即频率、电压、波宽) 参考指标:Hz:10 V:1-9.9(在记录过程中，电压可从1伏到9.9伏逐渐增加，来找 出中等强度的单个阈上刺激。) ms:1 以上指标调节，均用“上下键”和“Tab键”来选择，选好后，按回车键确定。按ESC键返回。 (4)将红色光标移到运行一栏，按回车键; 屏幕左下角显示下一级子菜单:记录、监视、回放、搜索、检测、打印、返回 将光标先移到监视一栏;此时，将刺激电极插入计算机主机背面的D/A输出口。将换能器输出端插入计算机主机背面的第二通道。在心舒期用蛙心夹夹住蛙心尖约1mm，然后把蛙心夹用线垂直吊起连接到换能器上。按回车键确定。则屏幕可显示出输入变化曲线，即正常心搏曲线。此时的记录没有进入内存，也不能输入标号， 只起监视波形好坏的作用。如果观察的波形很好，就可进入记录， 则记录开始进入内存，同时屏幕在曲线下自动标号。如开始观察，则按你事先设置好的观察项目的“标号”。 3.观察项目 (1)描记一段正常心搏曲线:观察曲线与心室收缩、舒张的关系及频率。 29 动物生理学实验指导 (2)用刺激电极头端的细钢丝与蛙心相接触，如同时连续按动计算机小键盘上的“+”键两次，则给心肌一次刺激;如按“+”键一次，则给心肌一个连续刺激。 (3)在心室收缩期，观察心搏曲线的变化。 (4)期前收缩和代偿间歇:在心室舒张期给予心肌刺激，观察心脏期前收缩和伴随其后的代偿间歇。 六、注意 1.应不断给心脏滴加任氏液，保持其湿润。 2.引起期前收缩后，须间隔一段时间再给予心脏第二次刺激。 30 动物生理学实验指导 实验十二、兔呼吸运动的调节 一、实验目的 观察各种因素对呼吸运动的影响，并了解其作用机理。 二、实验原理 呼吸运动是一种节律性活动，随机体活动水平而改变。其深度和频率受神经和体液因素的调节。体内外各种刺激有的作用于呼吸中枢，有的则作用于不同的感受器，反射性地影响呼吸运动。 三、实验对象 家兔 四、实验器材及试剂 哺乳动物手术器械l套、兔手术台、玻璃分针、注射器(20 ml 、5 ml 、l ml)、50cm长的橡皮管1根、钠石灰瓶、纱布、线、输液夹、CPRS智能生理记录系统、呼吸换能器1个、3%戌巴比妥钠、3%乳酸、生理盐水。 五、实验步骤和观察项目 1.动物麻醉与固定 以3%戍巴比妥钠(剂量为每公斤体重lml)为麻醉剂。由兔耳缘静脉缓慢注入。待兔麻醉后，腹部朝上固定于手术台上。 2.手术 沿兔颈部正常切开4-5cm。用止血钳向下钝性分离，暴露气管，把甲状软骨以下的气管与周围组织分离，在气管下穿—细线。分离出两侧迷走神经，在神经下穿—细线备用。在气管上做—‘T”形切口，然后插入“Y’形气管套管，并用棉线将气管套管结扎固定。手术完毕后，用温热的生理盐水纱布盖于伤口。 3.固定呼吸换能器 将呼吸换能器输出端插入主机背后的第二通道上，输入端置零。 4.仪器操作 用CPRS智能生理记录系统 开电源 C:>CD CPRCN 回车 C:\CPRCN>CPBS 屏幕显示CPRS生理智能计算机程序目录。将光标移到“单导生理记录程序”一栏，回车。 屏幕显示二个窗口，第一窗口为描记曲线基线值，第二窗口左下角显示操作主菜单: 名件、设置、运行、刺激、定标 稍等片刻，按空格键。则“文件”一栏出现红色光标，按回车键 31 动物生理学实验指导 屏幕显示文件操作子目录: 文件名、读文件、保存数据、部分删除、全部删除。 (1)输入本实验的文件名:输好后，按回车键确认，按ESC键退回主菜单。 (2)光标下移至“设置”一栏，按回车键。屏幕显示设置表如下: 同时表中的基线值在闪动，提示将换能器输入端置零，按空格健后再开始设置。 注释符 曲线名 单位 通道1—6 量程 基线移动 时间常数 分度值(ms) 基线值(mv) L=NOT Res Mv 2 0.5 X 2S ?500 :500 W11.CO Res Mv 2 0.5 X 2S ?500 2 2.ORes mv 2 0.5 X 2S ?500 2 W / W 213 10 4 注意;在设置过程中，必须从上到下，从左到右设置。最好一次完成。 首先，在注释符一栏，可输入本次实验的观察项目，如:在光标处键入“1.CO”2再输入“2.0”等。最多可输入6项。则光标跳到曲线名一栏。按同样的方法，输2 入本次实验的曲线名，如呼吸。按? ?键，将光标移到“单位”一栏。按“0”键，然后按“Tab”键与“上下左右键”，来选择本实验各项指标。 参考下列指标:单位:“mv” 通道:“2” 量程:“0.5-1” 基线移动:0 时间常数:“2S” 分度值: W=500-2000 W2W=5-10 1/1 选好后，按ESC链返回主菜单。 (3)将光标移到运行一栏，按回车键。 屏幕左下角显示下级子菜单: 记录、监视、回放、搜索、检测、打印、返回 将光标先移到监视一栏，此时再将呼吸换能器固定在兔胸部，按回车键，则计算机可显示出呼吸波，此时的记录没有进入内存，也不能输入标号，只起监视作用。如波形不理想，可适当将换能器输入端固定好，或返回到设置表中，适当改变分度值或量程。选好波形，按Esc键。将光标移到记录一栏，按回车健。则记录开始进入内存。同时，可自动标序号(如开始观察第一项同时，则输入预先设置的第一项目的注释符。 (4)记录完全都观察项目后，按ESC楗。将光标移到返回一栏，按回车健，将光标移到保存数据一栏，按回车键， 则本次实验的文件将存盘。 (5)然后，再做回放，打印等过埕(操作均与上面相同。 5.观察项目 32 动物生理学实验指导 浓度:将装有NaHCO和的锥形瓶通过一细塑料管(1)增加吸入气中的CO23 插入气管套一侧管中。滴入及滴HCl，使NaHCO和HCl反应所产生的CO随着吸3 2气进入气管。 注意:一旦呼吸有所变化，应迅速停止CO的吸入，吸入过量的CO会造 22成兔的死亡。 观察吸入高浓度的CO对呼吸运动的影响及去掉锥形瓶后呼吸运动的恢复过程。 2 (2)缺O对呼吸运动的影响:闭塞一侧气管插管约20秒钟，使兔处于缺O22的状况后，再观察呼吸运动的变化。 (3)增大无效腔后对呼吸运动的影响:将气管套管开口端连接一长约50cm的橡皮管，使无效腔增大后，观察对呼吸运动的影响。 (4)血液酸碱度对呼吸运动的影响:用5ml注射器，由耳缘静脉注入3%的乳酸溶液2ml，使血液的pH值降低后，观察呼吸运动的变化。 (5)观察迷走神经在呼吸运动中的作用:在观察一段正常的呼吸运动后，先剪一侧迷走神经。观察此时的呼吸运动节律有否明显变化?然后，再剪断另—侧迷走神经，观察以上变化。 33 动物生理学实验指导 实验十三、离体小肠平滑肌的生理特征 一、实验目的 观察离体情况下小肠平滑肌的运动情况及某些因素对其运动的影响。 二、实验原理 肠道平滑肌有壁内神经丛，因此有自动节律性收缩的特性。离体肠段虽然失去外来神经的支配，但肠壁神经丛仍存在，在适宜的条件下，仍能保持平滑肌收缩的特性及肠壁神经丛的作用。离体肠段运动的实验装置，还可用来研究各种化学因素对平滑肌的影响。 三、实验对象 家兔 四、实验器材和药品 麦氏溶皿、CPRS智能生理记录系统、张力换能器、温度计、烧杯2个、弹簧夹、台氏液、0.1%肾上腺素、0.01%乙酰胆硷、1N NaOH、1N HCl。 五、实验步骤和观察项目 1.恒温麦氏溶皿的准备 将烧杯加入自来水至2,3处，加入热水使水温度达38?时。将装有台氏液的麦氏溶皿中放入烧杯中。 2.实验装置 CPRS智能生理记录系统-肌肉张力换能装置 (1)连线 张力换能器的插头插入主机背面的第二通道，另一头与小肠平滑肌相连。 (2)CPRS智能生理记录系统的操作步骤 打开电源; 键C:,,CD CPRCN回车 C:,CPRCN,CPRS回车 屏幕显示CPRS生理智能计算机程序目录，将光标移到“单导生理记录程序”一栏，回车。 屏幕显示第一窗口为描记曲线基线值; 第二窗口为左下角显示操作主菜单:文件、设置、运行、刺激、定标、出口 此时，将张力换能器输入端置零，稍待片刻后，闪动的基线值基本稳定在500mm以内。 按空格键; (1)则在主菜单文件一栏出现红色光标，按回车键; 显示子菜单:文件名、读文件、保存数据、部分删除、全部删除, 首先，红色光标落在“文件名”上，按回车键; 34 动物生理学实验指导 出现输入实验名:(不得超过11个字)按回车键确认;其它文件根据需要按“??”和回车来确认;确定好后，按ESC键退回主菜单。 (2)用??键将光标移到设置一栏，按回车键。 屏幕显示设置表:同时表中基线值在闪动，提示将换能器输入端置零，然后按空格键，再开始设置。出现设置表格: 注释符 曲线名 单位 通道1—6 量程 基线移动 时间常数 分度值(ms) 基线值(mv) Mv 2 0.5 X DC 离体小肠 ?500 L=NOT :1000 W1Mv 2 0.5 X DC 1.Ach 离体小肠 ?500 2.NEmv 2 0.5 X DC 离体小肠 W / W ?500 21 4 在设置过程中,必须从上到下，从左到右，最好一次完成设置过程。 首先，在注释符—栏，可输入本次实验项目， 如:在光标处键入“1 Ach，2 NE”等。每次键好后按回车键。最多可输入6项，则光标跳入曲线名一栏，按同样的方法输入本次实验的文件名:“离体小肠”。按“上下左右”光标键，将光标右移到“单位”一栏。先按O键，然后按“Tab键”与“上下左右键”， 选择单位“mv”。然后将光标移到“通道”一栏，按同样方法选择通道“2”。再将光标移到“量程”一栏，选择“0.5ms”。基线移动:“O”; 时间常数:“DC”。分度值:W1:“1000- 2000”，W2/W1=4。基线值:“?500”即可按回车键确认。最后按ESC键退回主菜单。 (3)将红色光标移到运行—栏，按回车键。 将光标先移到监视一栏;此时，再将离体小肠与张力换能器连接，按回车键;则计算机则可显示小肠收缩波形，此时的记录没有进入内存，也不能输入标号， 只起监视作用。如果观察的波形很好，就可按ESC键退出。按“上下左右”健将光标移到记录—栏，按回车键， 则记录开始进入内存，同时屏幕在曲线下自动标号。如开始观察，则按你事先设置好的观察项目的“标号”。 (4)记录完全部观察项目后，按ESC键停止记录。将光标移至“返回”一栏，按回车键，进入文件一栏，按回车键，进入保存数据一栏，按回车键。保存本次实验记录，以防止数据丢失。 5.观察项目 (1)正常小肠运动曲线 观察离体小肠平滑肌收缩节律、波形和幅度。注意:收缩曲线的基线升高，表示小肠平滑肌紧张性升高。收缩曲线下降，表示紧张性降低。 (2)肾上腺素的作用 将0.1%肾上腺素1-2滴加入麦氏溶皿内，观察小肠运动的反应。当效应明显后，立即从排水管放出麦氏溶皿内含肾上腺素的台氏液，加入新鲜温台氏液，如此反复3次，以洗涤或稀释残留的肾上腺素，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后，进行下一项。 35 动物生理学实验指导 立即更换台氏液。 (3)乙酰胆碱的作用 用滴管向麦氏溶皿内滴入0.01%乙酰胆碱1-2滴。观察到明显效应后，立即从排水管放出麦氏溶皿内含乙酰胆碱的台氏液，加入新鲜温台氏液，如此反复3次，以洗涤或稀释残留的乙酰胆碱，使之达到无效浓度，待小肠运动恢复后，进行下一项。 (4)阿托品的作用 在麦氏溶皿内滴加0.01%阿托品4-5滴，约2分钟后，再加入0.01%乙酰胆碱1-2滴，观察肠道运动的变化。 (5)盐酸的作用 在肠道恢复正常后，滴加1-2滴1N HCl溶液入麦氏溶皿内，观察肠道运动的变化。 (6)氢氧化钠的作用 在肠道恢复正常后，滴加2滴1N NaOH入麦氏溶皿内，观察肠道运动的变化。 六、注意事项 1.台氏液要现配现用。在实验过程中，台氏液的温度应保持在38?，但不能过高。麦氏溶皿内溶液的液面应保持在同一水平。 2.每次加入试剂效果明显后，应立即更换麦氏溶皿内的台氏液，待肠段活动恢复正常后，再进行下一项实验。 36 动物生理学实验指导 实验十四、影响尿生成的因素 一、实验目的 观察一些生理因素对尿液分泌的影响并分析其作用机理。 二、实验原理 尿是血液通过肾单位时经过肾小球滤过、肾小管重吸收、分泌和排泄而形成的。凡影响上述过程的因素都可影响尿的生成而引起尿量及其某些成份的改变。影响肾小球滤过作用的主要因素是有效滤过压，其大小取决于肾小球毛细血管内的血压以及血浆的胶体渗透压和囊内压;影响肾小管重吸收机能的主要是小管液溶质浓度和肾小管上皮细胞的机能状态，后者又为多种激素所调节。 三、实验 实验动物 兔。 实验器材 CPR信号生理记录系统、兔解剖台、手术器械、张力换能器、膀胱套管、输液架、注射器、丝线、大小烧杯、温度计、纱布、缝针等。 药品 生理盐水、3,戊巴比妥钠、20,葡萄糖、0.l,肾上腺素，垂体后叶素，10,尿素等、垂体后叶素、速尿、10,NaOH、0.3,肝素。 四、实验步骤和观察项目 1(手术准备 (1)动物的麻醉与固定:用3,戊巴比妥钠按 lml / kg的剂量由耳静脉缓慢注入，麻醉后仰卧固定与手术台上。 (2)腹部手术 方法一:输尿管插管法:从耻骨联合向上沿中线作4~6cm长的切口。沿腹白线打开腹腔，将膀胱轻拉到腹腔外，暴露膀胱三角，仔细辨认输尿管，分离其周围组织，分别用线在两侧输尿管近膀胱处作结扎，在结扎线上方剪一斜口，用充满肝素生理盐水的塑料细管分别向肾脏方向插入，用线结扎固定，可见到尿液慢慢流出。将双侧输尿管插管一并插入铁支架上的玻璃滴管中，记录尿滴。腹部切口用38?左右的温热生理盐水纱布覆盖住。 方法二:膀胱输尿管插管法:剪去下腹部手术野兔毛。在耻骨联合向上沿中线作4~5cm长的切口。沿腹白线打开腹腔，将膀胱轻轻拉出，仔细辨认输尿管进入膀胱的位置，用注射器抽干净膀胱内的尿液，然后在膀胱中间作一纵形切口，将膀胱底的肌内组织向外翻，用止血钳轻轻撑开可见一对乳头状突起的输尿管口。用充满肝素生理盐水的细塑料管，分别从两侧的输尿管口顺着输尿管的方向缓缓插入，此时可见尿液从插管内慢慢流出，用线在输尿管膀胱处结扎固定。手术结束后用38?左右的生理盐水纱布覆盖住切口。将两根插管一并插入铁支架上的玻璃滴管内，开始记录尿滴。 2(实验设置 将张力换能器的插头插入主机背面的第二口，在张力换能器的金属片上接一塑料弹片，记录尿量时可以避免尿液直接滴在换能器的金属片上，造成短路。导尿管 37 动物生理学实验指导 的记滴头对准换能器的弹片，并与换能器保持一寸左右的高度，在铁支架上固定好，以备记录尿量用。 开机，进入CPRS程序，然后选择本次实验的二道记录程序回车。以后的操作方法与实验七基本相同。只是实验的设置稍有不同。见下列设置表: 注释符 曲线名 单位 通道 量程 基线移时间常分度值 基线值 动 数 W1=250 <500 L=NOC/min 2 0.25 x 0.2S 尿滴 T C/min 2 0.25 x 0.2S <500 尿滴 1. W2/W1=104 C/min 2 0.25 x 0.2S <500 尿滴 2. 3. 4. 5. 3(观察项目 (l)记录对照条件下每分钟尿分泌的滴数，连续计数5分钟，求其均值，并观察动态变化。 (2)静脉注射38?生理盐水20毫升，记录每分钟尿分泌的滴数。 (3)静脉注射0.l,肾上腺素0.2毫升，记录每分钟尿分泌的滴数。 (4)静脉注射38?20,葡萄糖20毫升，记录每分钟尿分泌的滴数。 (5)静脉注射垂体后叶素l—2单位，记录每分钟尿分泌的滴数。 (6)静脉注射10,尿素5毫升，记录每分钟尿分泌的滴数。 (7)切断两侧迷走神经，以中等强度电刺激连续刺激一侧迷走神经离中端，观察尿分泌的变化。 (8)同法刺激内脏大神经，观察尿分泌的变化。 六、注意事项 1(兔子尿道短，不论雄、雌性都应作膀胱颈部尿道口结扎。 2(进行每一项观察均须待前项作用的影响基本消失后方可进行。 七、思考题 大量饮水与静脉注射生理盐水对尿量有何影响,为什么, 38 动物生理学实验指导 实验十五、骨骼肌的单收缩与复合收缩 一、实验目的 观察刺激频率与肌肉收缩的关系，了解肌肉单收缩与复合收缩形成的原因。 二、实验原理 给具有兴奋性的肌肉一个短促的阈刺激，肌肉就发生一次迅速的收缩，称为单收缩。若给予两个或两个以上的阈刺激时，可因刺激的频率不同而呈现不同的收缩形式。如果两个或多个刺激的间隔大于该肌肉单收缩的全部时间，则引起波型上互相分开的两个或多个单收缩;若后一个刺激落在前一次收缩的舒张期，就会形成两个或多个单收缩不同程度的总合，其收缩幅度比单收缩高。在一定范围内，刺激间隔越小，收缩幅度就越高，称为复合收缩。若多个刺激引起波型呈锯齿状的收缩曲线，称不完全强直收缩，若多个刺激间隔进一步缩小，使后一个刺激落在前一个收缩的收缩期内，肌肉就处于完全持久的收缩状态，产生一个没有舒张期的持续的收缩曲线，叫做完全强直收缩。 三、实验动物 青蛙或蟾蜍 四、主要器材及试剂 中式小剪l把、眼科剪l把、普通镊子2把、探针1支、锌铜弓1支、玻璃分针4支、玻璃蛙板l块、蛙尸缸1个、棉线1种、CPRS智能生理记录系统1套、张力换能器1个、肌槽1套、烧杯1个、吸管1支、培养皿1个、任氏液。 五、实验步骤和观察项目 1.制备坐骨神经腓肠肌标本 (1)用蛙针破坏蛙的脑、脊髓，在荐尾关节水平上方1.5厘米处横端脊柱，弃去前半段，保留后半段备用。 (2)剥离皮肤 先剪去尾椎和泄殖腔附近的皮肤，然后从脊椎的断断向下撕去皮肤，将其全部剥去，直至趾端。将剥掉皮肤的标本放在蛙板上，滴上任氏液。 (3)分离标本为两部分 沿脊柱正中将标本均匀地剪成左右两半，一半浸入盛有任氏液的烧杯中，另一半作进一步剥制。 (4)分离坐骨神经 先在标本的腹侧面用玻璃分针分离坐骨神经的腹腔段，剪断脊柱，使坐骨神经与一小段脊柱相连。将标本转至背侧，沿股二头肌及半膜肌所形成的肌沟分离坐骨神经大腿段，直至腓肠肌。剥离要细心，用眼科剪剪去神经干的分支，而不能撕扯。将分离出来的坐骨神经搭于腓肠肌上。去除膝关节以上的全部肌肉，刮净股骨上附着的肌肉，仅保留坐骨神经及股骨。 39 动物生理学实验指导 (5)分离腓肠肌 在跟腱上扎一根线，提起结扎线，剪断结扎线后的跟腱，腓肠肌即可游离。在膝关节下方将其它所有组织全部剪去，至此，带有股骨的坐骨神经腓肠肌标本制备完成。 (6)标本的检验 将坐骨神经腓肠肌标本放在蛙板上，用铜锌弓刺激坐骨神经，若腓肠肌迅速发生收缩反应，说明标本机能良好。将标本放入盛有任氏液的培养皿中，供实验之用。 (具体方法见实验二图)。 2.连接仪器并装置标本 将换能器的输出线接至CPRS智能生理记录装置的2通道，电刺激信号接至肌槽的电极上。然后把制备好的坐骨神经-腓肠肌标本股骨固定在肌槽上。将固定肌肉的棉线另一端接在张力换能器上，保持适度松紧，将坐骨神经搭在肌槽的电极上即可开始实验。 3. CPRS智能生理记录系统的操作步骤 打开电源; 键C:,,CD CPRCN回车 C:,CPRCN,CPRS回车 屏幕显示CPRS生理智能计算机程序目录，将光标移到“单导生理记录程序”一栏，回车。 屏幕显示第一窗口为描记曲线基线值; 第二窗口为左下角显示操作主菜单;文件、设置、运行、刺激、定标、出口 此时，将张力换能器输入端置零，稍待片刻后，闪动的基线值基本稳定在500mm以内。 按空格键: (1)则在主菜单文件一栏出现红色光标，按回车键; 显示子菜单:文件名、读文件、保存数据、部分删除、全部删除; 首先，红色光标落在“文件名”上，按回车键; 出现输入实验名:(不得超过11个字)按回车键确认;其它文件根据需要按“??”和回车来确认;确定好后，按ESC键退回主菜单。 (2)用??键将光标移到设置一栏，按回车键。 屏幕显示设置表:同时表中基线值在闪动，提示将换能器输入端置零，然后按空格键，再开始设置。出现设置表格: 注释符 曲线名 单位 通道1—6 量程 基线移动 时间常数 分度值ms 基线值mv QD mv 2 0.5 X DC ?500 W1:500 L=NOT QD mv 2 0.5 X DC ?500 QD mv 2 0.5 X DC W2 / W1 ?500 25 40 动物生理学实验指导 注:在设置过程中，必须从上到下，从左到右，最好一次完成设置过程,不要来回改变参数。 首先，在注释符—栏，可输入本次实验项目，每次键好后按回车键。最多可输入6项。则光标跳入曲线名一栏，按同样的方法输入本次实验的文件名:“QD”。按“上下左右”光标键，将光标右移到“单位”一栏。先按O键，然后按“Tab键”与“上下左右键”， 选择单位“mv”。然后将光标移到“通道”一栏，按同样方法选择通道“2”。再将光标移到“量程”一栏，选择“0.5~1”。基线移动:“X”; 时间常数:“DC”。分度值:W1:“250-1000”，W2/W1=10-25。基线值: “?500”即可按回车键确认。最后按ESC键退回主菜单。 (3)将光标移到“刺激”一栏。按回车键。 屏幕显示:Hz、V、ms(即频率、电压、波宽) 参考指标:Hz:10 V:1-9.9(在记录过程中，电压可从1伏到9.9伏逐渐增加，来找出中等强度的单个阈上刺激。) ms:1 以上指标调节，均用“上下键”和“Tab键”来选择，选好后，按回车键确定。按ESC键返回。 (4)将红色光标移到运行一栏，进入记录状态。 4.观察项目 (1)调节电刺激器强度，找到阈刺激，观察骨骼肌的单收缩曲线。 (2)在上一项的刺激强度基础上，给予多个刺激，调节刺激频率由慢到快，分别记录出多个单收缩、不完全强直收缩和完全强直收缩的曲线。 (3)注意:连续按动计算机小键盘上的“+”键两次，给骨骼肌一次刺激，产生一个单收缩;按动一次的话，则是一次连续刺激，刺激的频率是我们在“刺激”一栏中所选定的刺激频率。可通过选择刺激频率来确定骨骼肌的不完全强直收缩和完全强直收缩两种收缩形式。 六、注意事项 1.装置标本时，不要人为地将肌肉拉长，尽可能保持其自然长度。 2.随时用任氏液湿润标本，以保持标本的正常机能。 3.每次刺激的强度和时间应保持一致，以便进行比较。 41 动物生理学实验指导 实验十五、 反射弧的分析和反射时的测定 一、实验目的 分析反射弧的组成部分，并探讨反射弧的完整性与反射活动的关系。 二、实验原理 反射弧的结构和机能完整性是实现反射活动的基础。反射弧的任何一部分受到破坏，均不能出现反射活动。 脊髓是中枢神经系统的低级部位，机能比较简单，便于观察，所以本实验用去掉脑髓的动物(称为脊动物)来进行，以肌肉的收缩所引起的肢体屈曲作为观察脊动物反射活动的 指标。 三、实验动物 青蛙或蟾蜍 四、主要器材及试剂 支柱台一个、双鼓夹1个、蛙肌夹1个、中式小剪1把、普通镊子2把、探针1支、玻璃分针2支、500ml烧杯1个、小滤纸片若干、培养皿3个、蛙尸缸1个、秒表1块、纱布1块、棉线1种、棉球若干、1%可卡因、0.5%及1%HSO、清水。 24五、实验步骤和观察项目 1.制备脊髓蛙 用左手拇指和食指捏住青蛙腹部脊柱，右手将中式小剪伸入蛙口中，在鼓膜的后方(约在延髓与脊髓中间)剪去脑部，即为脊髓蛙。放置几分钟后，用钓子钓住蛙的下颌，挂在支柱台上。 2.观察项目 (1)用0(5%HS0溶液浸泡蛙右后肢的中趾趾尖，观察其反应。同时用秒表24 记录从浸泡时起至蛙腿发生屈曲所用时间，反复观察三次，求其平均值，此性即为反射时。每次蛙腿屈曲后，应立即用清水洗净蛙脚趾上的残留硫酸，并用纱布轻轻揩干，以免烧坏感受器，影响再次实验。 (2)绕右后肢趾关节上方将皮肤作一环形切口，用镊子剥去切口以下的皮肤(注意趾尖皮肤应剥离干净)。稍停片刻，再用0.5%HS0溶液浸泡裸露的中趾趾尖，观24 察蛙腿是否屈曲。反复观察三次，每次作完后用清水洗净。 (3)用1%HS0溶液浸过的小滤纸片，贴在剥皮腿的股部内侧或其它部位的24 皮肤上，观察剥皮腿是否有屈曲反应。反复观察三次，每次作完后立即用清水冲洗净。 (4)沿左腿股二头肌和半膜肌之间分离，找出坐骨神经，在神经下穿线备用。用0.5%HS0溶液浸泡此腿中趾趾尖，观察蛙腿有无屈曲反应，反复作三次。每次24 做完后立即用清水冲洗净。然后在坐骨神经上放一浸过1%可卡因的小棉球，约经0.5min后，用0.5%HS0溶液浸泡该腿中趾趾尖，观察蛙腿是否出现屈曲反应。如24 果有反应出现，则以后每隔0.5min用同样的方法刺激一次，直到不引起反应为止。 42 动物生理学实验指导 S0溶液的小滤纸片贴在左侧(5)当左后肢反应刚刚消失，立即用浸过1%H24 背部，该侧后肢可出现搔抓反射。每隔0.5min重复一次，直到不能引起左后肢的反应为止。 (6)用镊子夹住右后肢，出现屈曲反射后，再用探针插入脊髓管内上下抽动，破坏脊髓，使蛙全身松弛。再刺激全身任何部位，观察有无反射出现。 六、注意事项 1.每次用硫酸浸泡蛙趾的部位应相同，以免因刺激强弱售部位不同而影响实验结果。 2.硫酸浸泡蛙趾的时间只能是几秒到半分钟内，时间不能过长，以免烧伤皮肤和感受器。 3.硫酸刺激后是否出现屈曲反应，都应立即，以清水洗净残留硫酸，保护感受器。每次刺激后应隔2~3min，再进行下一次刺激，以免互相影响。 4.蛙趾在浸入硫酸时，趾部不能接触器皿。 七、思考题 1.反射时的长短说明什么问题? 2.用本实验所观察到的现象说明反射弧的五个部分在反射活动中的作用是什么? 3.在不损坏反射弧结构的前提下，用什么方法可以使机体在受刺激时不发生反射活动? 注意:可卡因的作用是首先麻醉传入神经纤维，然后才麻醉传出神经纤维。氯仿也有同样的作用，可替代可卡因。 43 动物生理学实验指导 实验十六 去小脑动物的观察 一、实验目的 本实验的目的是了解小脑对躯体运动的调节作用。 二、实验原理 小脑是躯体运动的重要调节中枢。小脑前叶与骨胳肌张力的调节有关，小脑后叶具有协调随意运动的机能，绒球小结则与身体的平衡功能有关。因此，当小脑受到损伤时，就会出现相应的功能失调现象。 三、实验动物 鸽、小白鼠 四、主要器材及试剂 剪毛剪1把、手术刀1把、止血钳4把、分离钳1把、骨刮1把、普通镊子1 把、探针1支、锐匙1把、纱布2块、棉球若干、酒精灯1个、乙醚、止血海绵。 五、实验步骤、实验观察 鸽一侧小脑损伤 (一)选择动物 选取大小相近，精神状态、活动机能相近的鸽两只，一只进行去小脑术，另一只作为对照。 (二)手术 用布将鸽子包住，仅露出头部。剪去头 后部及颈上部的羽毛，然后将浸有乙醚的棉 球放在鼻孔处进行轻度麻醉，在鸽头下垂， 眼睛微闭时即可。沿鸽头正中线切开头后部 和颈部皮肤后，可见到后头骨及头后部肌肉， 用烧红的探针将一侧头后部肌肉由上至下烫 开，暴露该处头骨，然后在矢状窦的一侧， 用骨刮刮去骨膜，再用手术刀削去骨松质， 打开后头骨，剪开硬脑膜，即是小脑。用锐 匙将一侧小脑挖去，然后向挖去小脑的部位 放入止血海绵进行止血，待出血停止后，缝 合皮肤。另一只鸽做假手术，即削去骨松质， 打开后头骨，不挖去小脑，然后缝合皮肤。 (三)实验观察 手术后约20分钟，观察并比较两只鸽的姿势、活动状态有何不同。 44 动物生理学实验指导 (四)注意事项 (1)手术时勿损伤矢状窦及半规管。 (2)手术时勿堵住鸽的鼻孔，以免窒息死亡。 小白鼠一侧小脑损伤 (一)选择动物 选取两只大小相近，活动状态相近的小白鼠，一只进行去小脑术，另一只作为对照。 (二)手术 把浸有乙醚的棉球与两只小白 鼠一起用烧杯罩住，进行轻度麻醉， 然后将其俯卧固定。剪去头顶部的毛， 沿头部中线切开皮肤，暴露顶骨和顶 尖骨，以左手拇、食二指捏住液压油 部两侧，透过透明的顶间骨即可看到 小脑的位置，用探针在尽量远离中线 处穿透一侧顶间骨(进针约2mm)将 针伸向前方，自前向后，将一侧小脑 捣毁。取出探针，以棉球止血。另一 只小白鼠做假手术。 (三)实验观察 待小白鼠清醒后，观察并比较两 只小白鼠的活动状态、姿势平衡及肢 体的屈曲和肌肉的紧张度有何不同, (四)注意事项 (1)动物麻醉要浅，手术过程中若动物苏醒，可随时用麻醉时用浸有乙醚的棉球追加麻醉。 (2)左手持动物头部时，力量不能太大，以免将眼球挤出。 (3)对照动物做假手术，除了不损伤小脑外，其它手术相同。 六、思考题 通过本实验，你观察到去小脑后动物的哪些异常现象,由这些现象你能推理出小脑的哪些主要机能, 45 动物生理学实验指导 附录一、生理实验常用试剂 一、各种生理盐溶液的配制 生理盐溶液为代体液，用于维持离体组织、器官及细胞的正常生命活动。它必须具备下列条件:既渗透压与组织液相等;应含有组织、器官维持正常机能所必须的比例适宜的各种盐类离子;酸碱度应与血浆相同，并具有充分的缓冲能力;应含有氧气和营养物质。 动物的种类不同，体液的组成各异，渗透压也不一样。因此，作为代体液的生理盐溶液，在组成成分上要有相应的区别。如两栖类动物体液的渗透压相当于0.65% NaCl溶液;哺乳类动物体液的渗透压则相当于0.9%NaCl溶液;海生动物体液的渗透压约相当于3.0%NaCl溶液。 对氧和营养物质的需要，不同的动物及组织也有差异，如两栖类动物的组织器官对氧和营养物质的 需要程度明显低于哺乳动物。 由于研究的目的不同，生理盐溶液的组成成分也可作变动。生理实验中最常用的大体有三种:蛙心灌注多用任氏液:哺乳动物的实验多用乐氏液;而哺乳动物的离体小肠实验多用台氏液(表1)。 这些代体液不宜久置，一般临用时配制。为了方便可事先配好代体液所需的各种成分较浓的基础液(表2)，使用时按所需量取基础液于量杯中，加蒸馏水到定量刻度即可。配制生理盐溶液时，容易起反应而沉淀的主要是钙离子，所以氯化钙应最后加。 表1. 常用生理盐溶液及其成分 任氏液 乐氏液 台氏液 生理盐水 药 品 名 称 用于两栖类 用于哺乳类 哺乳类(小肠) 两栖类 哺乳类 6.5g 9.0g 8.0g 6.5g 9.0g 氯化钠(NaCl) 0.14g 0.42g 0.2g 氯化钾(KCl) 0.12g 0.24g 0.2g 氯化钙(CaCl) 0.2g 0.1~0.3g 1.0g 碳酸氢钠NaHCO 3 0.01g 0.05g 磷酸二氢钠NaHPO — 24 0.1g 氯化镁(MgCl) — — 2 1.0g 1.0g 葡 萄 糖 2.0g(可不加) 1000ml 1000ml 1000ml 1000ml 1000ml 加 蒸 馏 水 至 表2.配置生理盐溶液所需的基础溶液及所加量 成 分 浓 度(%) 任 氏 液 台 氏 乐 氏 液 液 20 32.5ml 45.0ml 40.0ml 氯化钠(NaCl) 10 1.4ml 4.2ml 2.0ml 氯化钾(KCl) 46 动物生理学实验指导 10 1.2ml 2.4ml 2.0ml 氯化钙(CaCl) 表2.配置生理盐溶液所需的基础溶液及所加量 成 分 浓 度(%) 任 氏 液 乐 氏 台 氏 液 液 5 4.0ml 2.0ml 20.0ml 碳酸氢钠NaHCO 3 1 1.0ml 2.0ml 磷酸二氢钠NaHPO — 24 5 2.0ml 氯化镁(MgCl) — — 2 1.0g 1.0g 葡 萄 糖 2.0g(可不加) 加 蒸 馏 水 至 1000ml 1000ml 1000ml 二、常用血液抗凝剂的配制及用法 (一)肝素 肝素的抗凝作用很强，常用来作为全身抗凝剂，尤其是进行动物循环方面的实验，肝素的应用更有其重要意义，纯的肝素每10mg能抗凝100ml血液。用于试管内抗凝时，一般可配成1%肝素生理盐水溶液。方法是取已配制好的1%肝素生理盐水溶液1mL加入试管内，加热100?烘干，每管能抗凝5~10ml血液。用于动物全身抗凝时，一般剂量:兔10mg/kg体重;狗5~10mg/Kg体重。 (二)枸橼酸钠 常配成3~5%水溶液，也可直接使用粉剂，3~5mg可抗凝1ml血液。枸橼酸钠可使血液中的钙形成难于离解的可溶性复合物，从而使血液不凝固。但抗凝作用较差，且碱性较强，不宜作化学检验用，可用于红细胞沉降速度测定等。生理学实验常用5~10%的水溶液，这一浓度只能用于体外抗凝。如果倒流入体内，会使动物发生枸橼酸钠休克。 (三)草酸钾 1~2mg草酸钾可抗凝1ml血液。如配成10%水溶液，每管加0.1ml，可使5~10ml血液不凝固。 三、生理实验中常用药品介绍 (一)乙酰胆碱 乙酰胆碱的作用与刺激胆碱能神经的效应相似，在体内易被胆碱酯酶所分解，所以作用时间短暂，如果同时应用毒扁豆碱，可以延长作用时间。乙酰胆碱在空气中极易潮解，应密闭保存，使用时临时配成溶液，生理实验常用乙酰胆碱浓度为0.001%。 (二)肾上腺素 肾上腺素的作用与刺激肾上腺素能神经的效应相似，见光易分解，应避光保存。如由无色变成红色，即失效。在生理实验中，常以盐酸肾上腺素注射液临时稀释成0.01%水溶液。 (三)阿托品 47 动物生理学实验指导 对抗乙酰胆碱，能解除迷走神经对组织器官的作用。用乙醚麻醉时，可阻抑气管粘液分泌，防止气管堵塞。一般使用浓度为1%的硫酸阿托品溶液。 (四)双氧水 双氧水的强氧化剂，能将血块、坏死组织等除去，但不稳定，作用时间很短。3%双氧水一般用于慢性手术中清洗创口;5%双氧水用于埋藏电极时，清洗颅骨和止血。由于双氧水的作用不稳定，容易失效，常以30%的浓度保存，临用时再稀释。 (五)促胰液素 促胰液素的制备方法简单易行，而且效果比较满意。常用预备实验动物(狗 或猪)的十二指肠，不需购买。下面介绍两种制备方法。 1.粗制法 (1)在急性实验的狗或猪刚死后，马上截取它的十二指肠和上段空肠1m左右即可，用自来水缓慢冲洗，冲净肠内容物。用线结扎肠管的一端，向肠管内注入0.5%HCL约500ml，再结扎肠管另一端。静候0.5-1h后，将肠管里的盐酸倒入烧杯中，并用手轻轻地挤出残余的盐酸，此液内即含有促胰液素。将其煮沸后加入氢氧化钠溶液，使呈碱性反应(pH8-9)，然后再慢慢地加入盐酸溶液，使略呈酸性反应(pH5-6)，此时就有大量沉淀物析出，将此液体过滤，即得含有促胰液素的液体。如果不急用，可将此液放入冰箱保存，或者将从肠管里倒出的盐酸溶液放入冰箱内暂时保存，使用时再照上法制备。 (2)在急性实验的狗或猪刚死后，马上截取它的十二指肠和上段空肠1m左右，用自来水缓慢冲洗干净。顺肠管纵向剪开平铺在木版上，用解剖刀刮下全部粘膜放入研钵，再加细碎玻璃约5g和0.5%HCL10-15ml共同研磨。将研碎的稀浆倒入瓷杯中，再加0.5%HCL100-150ml，煮沸10-15min，用10-20%NaOH溶液趁热中和，边加边用玻璃棒搅拌，不时的用pH试纸检查，待到中性时过滤即可。急性实验的促胰液素可以调至弱酸性(pH5-6)。已制好的促胰液素应保持在冰箱中。 2.精制法 在急性实验的狗或猪刚死后，马上截取它的十二指肠和上段空肠1m左右，用自来水缓慢冲洗干净。轻轻刮取其粘膜，用相当于粘膜体积四倍的酒精来 进行沉淀或皂化其中的脂肪，过滤后，将滤液在低抽提，取上清夜加入0.1N CaCL2 温真空中蒸发，待蒸发到剩原来体液的1/4时，加入1%醋酸(每100ml加3ml醋酸)混匀。15min后用离心机沉淀。取出沉淀下来的胶性物，反复用无水乙醇抽提，弃取不能抽提的沉渣，然后浓缩乙醇提取液，用相当于此液四倍的丙酮沉淀，再取沉淀物用丙酮洗干，即可得到较纯净的促胰液素。这样制备的胰液素可以长期保存。 四、生理实验常用的骨骼肌松弛药 在生理实验中，骨骼肌松弛药主要用于需完全消除动物的躯体活动，以免影响实验观察，例如，某些应用微电极技术的急性实验，还有些实验需在不受麻醉药干扰而动物又能安静不动的条件下进行。前一类实验可在已用药物麻醉的基础上加用骨骼肌松弛药;后一类实验则先行短时程的麻醉以完成准备手术，待动物清醒，再用骨骼肌松弛药消除躯体的运动机能。由于所用药物剂量能使包括呼吸肌在内的全 48 动物生理学实验指导 部骨骼肌麻痹，必须用人工呼吸机能呼吸。常用的有以下几种: (一)氯化铜箭毒 易溶于水，溶液甚为稳定，可储存较长时间而不失效，并能耐受高压消毒。箭毒类属于非除极型骨骼肌松弛药，可与神经-肌肉接头突触后膜的胆碱能受体结合，阻断乙酰胆碱的作用而产生肌松效应。箭毒从胃肠吸收很慢，需用静脉(不能从口给药)给药，致骨骼肌的顺序，一般是眼肌、面肌最先，而后为颈肌(出现垂头)、四肢及背部肌肉，再后为腹壁及肋间肌，最后为膈肌，终致呼吸停止。其他骨骼肌松弛药作用顺序与此大致相同。 乙醚与箭毒有协同作用，两者合用时箭毒剂量减至常量的1/3即可。哺乳动物静脉注射常用剂量为1mg/kg体重。 (二)三碘季胺酚 易溶于水，溶液稳定，可久置，属非除极型骨骼肌松弛药，对神经-肌肉接头产生竞争性阻滞作用。它对迷走神经有选择性阻滞效应，可导致心动过速。在猫，能引起组织胺释放，并能抑制胆碱脂酶，使血压短暂下降。对狗无明显组织胺释放作用，不致引起血压下降，所以此药用于狗比箭毒安全。其肌松作用仅及箭毒的/5-1/7。哺乳动物静脉注射常用剂量1-2mg/kg体重，也有比此剂量更高的。 (三)瑚珀酰胆碱 易溶于水，溶液不稳定，易分解，应用时临时配置。为除极型骨骼肌松弛药，其作用强度因动物种属而异。由于作用时引起肌肉除极，可出现束颤。它有烟碱样效应，能兴奋副交感神经而使胃肠运动增强，引起排尿和流涎。对支配心脏的植物性神经有刺激作用，可导致心率失常，甚至血压下降。大剂量对神经节有阻滞作用。此药作用时间短暂，肌肉活动在单次注射后10min左右即见恢复，故需要在相应时间内重复给药，或采取静脉滴注法以维持药效。哺乳动物常用剂量一般为1mg/kg体重，必要时加大剂量。 附录二 常用实验动物部分生理参数 红细胞 白细胞 红细胞 血红蛋白 心率 体温 呼吸频率 动物种类 12(10/升) (千个/升) 压积(%) (克/升) (次/分) (?) (次/分) 8000 44.0 马 6.0,9.0 80,150 30,45 37.5,38.5 8,16 6.0 8200 35.0 牛 90,140 40,80 37.5,39.5 10,25 14800 39 猪 6.0,8.0 100,150 60,80 38.5,39.5 10,30 9600 34.0 山羊 15.0,19.0 70,140 60,80 38,39.5 12,30 7.5 13200 40.0 125 猫 110,130 38.5,39.5 10,30 6.7 11500 45.5 165 狗 70,120 37.5,39 10,30 5.4 9900 42.0 134 280 60 豚鼠 37.8,39.5 6.2 8100 41.5 134 兔 120,140 38,39.5 50,60 7.3 9800 46.0 152 大鼠 216,600 38.5,39.5 66,144 8.6 9200 45.0 142 376 36.5 94 小鼠 5.4 11300 40.0 130 227 39.7 40 猴 49 动物生理学实验指导 23400 鸡 3.0,3.8 40,42 127,142 120,200 40,42 15,30 附录三 常用消毒药物配制及用途 消毒药名 常配浓度及方法 用途 新洁尔灭 1?1000 洗手，浸泡手术器械 器械消毒，实验室场面，喷洒动物笼架，3%~5% 来苏尔 实验台消毒 1%~2% (煤酚皂溶液) 洗手、皮肤洗涤 5% 器械消毒、实验室消毒 石碳酸 1% 洗手、手术部位及皮肤洗涤 10% 消毒动物排泄物、分泌物、严重污染区域 漂白粉 0.5% 实验室喷雾消毒 10%~20% 生石灰 污染的场面和墙壁的消毒 福尔马林 10%甲醛溶液 器械消毒 (40%甲醛溶液) 40%甲醛溶液 实验室熏蒸消毒 乳酸 100立方米4~8ml 实验室熏蒸消毒 碘酊* 皮肤消毒，待干后用75%酒精脱碘 红汞消毒液2% 红汞2g 粘膜消毒 升汞消毒液1% 升汞0.1% 洗手，手术部位皮肤洗涤 硼酸消毒液2% 硼酸2g 洗涤直肠，鼻腔，口腔，眼睛膜等 雷佛奴尔消毒液1% 雷佛奴尔1g 各种粘膜消毒，创伤洗涤 *碘酊的配制:碘3克~5克，碘化钾3克~5克，75%酒精加至100毫升 50 动物生理学实验指导 51