金黄色葡萄球菌3M测试片法

金黄色葡萄球菌3M测试片法 金黄色葡萄球菌3M测试片法 操作步骤 1. 样品稀释 1.1 固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌 均质杯内，8000r/min-10000r/min均质1min-2min，或置盛有225ml稀释液的无菌 10的样品匀液。 均质袋中，用拍击式均质器拍打1min-2min,制成1: 1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25ml样品，置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水 的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 1.3 按照以上方法制备1:10的匀液后，用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸调节该样 品匀液的PH至6.0,8.0。 2(接种和培养 选择2个到3个适宜稀释度的样品匀液，每个稀释度接种两张测试片。将测试片置于平坦实验台面处，揭开上层膜，用吸管吸取样品匀液1ml垂直滴加到一张测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡的产生，切勿使上层膜直接落下，将压板放置在上层膜中央处，轻轻的压下，使样液均匀的覆盖于圆形的培养面积上，切勿扭转或滑动压板，拿起压板，静置至少1min以使培养基凝固。将测试片的透明面朝上置于培养箱内，堆叠片数不超过20片，36?1?下培养24?2h。培养24?2h后，如果测试片上没有菌落生长或菌落全部使典型紫红色，检验完毕;如果培养24?2h时测试片出现除典型紫红色以外颜色的菌落，如黑色、蓝绿色等，需使用确认反应片进一步确认。 3(确认反应 当需要使用确认反应片时，将上层膜掀起，将确认反应片置入测试片的培养范围内，再将上层膜放下覆盖再确认反应片上，用手指以滑动的方式轻轻将测试片与确认反应片压紧，包括确认反应片的边缘，此步骤可使测试片与确认反应片紧密接触并除去气泡，最后把插入确认反应片的测试片放在36?1?的培养箱内培养1h-3h. 4(结果计算与报告 4.1 判读 培养24?2h时在测试片上呈典型紫红色的菌落为确认的金黄色葡萄球菌，无需用确认反应片作进一步确认;如果培养24?2h时出现典型紫红色以外的其他菌落，需要用确认反应片进行确认，有粉红色晕圈的菌落为金黄色葡萄球菌。没有粉红色晕圈的菌落不是金黄色葡萄球菌，不应被计数。如果整个培养面积呈粉红色而没有明显的晕圈，说明金黄色葡萄球菌大量存在，结果记录为“多步可计”，然后进一步稀释后重新检验。 4.2 金黄色葡萄球菌测试片计数的报告 培养时间一到应立即计数，可目测或用放大镜辅助计数。 选择菌落数在15,150之间的稀释度，两张测试片菌落平均数乘以稀释倍数，即为 每克(或毫升)样品中金黄色葡萄球菌数，以CFU/G(CFU/ML)示。 如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15，计数稀释度最低的测试片上的菌落数乘以稀释倍数报告;如果所有稀释度的测试片上均无菌落生长，以“小于1乘以最低稀释倍数”报告。如果所有稀释度的菌落总数都大于150，计数最高稀释度测试片上的菌落数乘以稀释倍数报告。计数菌落数大于150的测试片时，可计数一个或两个具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数后乘以30即为测试片上估2算的金黄色葡萄球菌(圆形生长面积为30cm).