利用指纹图谱技术鉴定新疆油葵杂交种纯度的研

利用指纹图谱技术鉴定新疆油葵杂交种纯度的研 利用指纹图谱技术鉴定新疆油葵杂交种纯度的研 利用指纹图谱技术鉴定新疆油葵杂交种纯度的研 本文以新疆推广种植的油用向日葵品种(康地 4、 5、 6、7的父母本及杂交种，G101的父母本及杂交种)为材料，利用蛋白质电泳技术和RAPD分子标记技术对供试油葵杂种进行纯度鉴定的研究。 应用蛋白质电泳技术的研究结果表明: (1)适宜的同工酶和种子蛋白凝胶浓度及交联度能提高电泳结果的清晰度和分辨率; (2)通过几种提取剂的比较，确定用1mol/L尿素作为种子蛋白提取剂，此提取剂提取的蛋白丰富，但差异性较小; (3)利用酯酶和过氧化物酶对供试品种进行纯度鉴定，康地6号杂交种的酯酶谱带与其父母本的特征谱带互补，其纯度鉴定结果与田间检测结果基本一致;G101杂交种的过氧化物酶谱带中出现新谱带，用此谱带鉴定G101杂交种纯度的结果也与田间鉴定结果基本一致。应用RAPD分子标记技术的研究结果表明: (1)用不同提取(CTAB法、SDS法)及不同材料(真叶、种子)进行DNA的提取，确定了利用SDS法从向日葵种子中快速、简捷提取总DNA的方法; (2)对RAPD技术中的反应因子(浓度、Taq酶浓度、引物浓度、dNTPs浓度等)及反应条件(退火温度，延伸时间等)进行优化，确定了适用于油用向日葵RAPD分析的反应体系; (3)用100个引物对供试品种进行筛选，筛选结果是:引物OPB05在康地6号、康地7号的杂交种中扩增出各自双亲的特征谱带;引物OPB03扩增出康地4号杂交种的谱带既包括来自父本的特征谱带也包括来自母本的特征谱带;康地6号杂交种利用引物OPC14也扩增出了父母本互补的特征谱带 (4)利用筛选出的引物对三个品种的杂交种进行纯度鉴定，鉴定结果与田间鉴定结果接近。 中文摘要8-9英文摘要9-11文献综述11-25 一、 向日葵鉴定方法概述11-13 (一) 形态学鉴定法11-12 1( 种子形态观察法11-122( 幼苗形态鉴别法123( 田间小区鉴定法12 (二) 生化鉴定法12-13 (三) 分子标记鉴定法13 二、 蛋白质电泳技术在品种鉴定和纯度检验上的应用13-18 (一) 利用种子储藏蛋白鉴定品种纯度13-15 1( 种子储藏蛋白电泳技术13-142( 应用研究进展14-153( 储藏蛋白电泳在向日葵杂交种纯度鉴定上的应用15 (二) 利用同工酶鉴定品种15-18 1( 同工酶的概念和应用原理15-162( 同工酶电泳的应用16-173( 同工酶电泳技术在向日葵杂种鉴定上的应用17-18 三、 RAPD分子标记技术研究进展及在种子纯度检验上的应用18-22 (一) RAPD技术的研究及应用现状18-20 1( 遗传图谱构建18-192( 系统学、遗传多样性及种质分类研究193( 标记、定位目的基因19-20 (二) 利用RAPD标记技术进行品种纯度的鉴定20 (三) RAPD技术在品种真伪及纯度鉴定中的应用20-21 (四) 影响RAPD技术深入应用的因素及RAPD程序的优化21-22 四、 其他分子标记技术在品种鉴定上的应用22-24 (一) RAPD-DGGE22 (二) 限制性酶切片段长度多态性22-23 (三) 扩增片段长度多态性23-24 五、 本研究拟解决的关键问题24-25第一章 利用蛋白质电泳技术对新疆油用向日葵杂交种进行纯度鉴定的研究25-34 1( 前言252( 材料和方法25-272(1 实验材料25-262( 1(1 植物材料252( 1(2 生化试剂25-262(2 研究方法26-272(2(1 向日葵种子贮藏蛋白的提取262(2(2 向日葵种子贮藏蛋白的凝胶电泳262(2(3 向日葵子叶同工酶的提取262(2(4 油用向日葵酯酶和过氧化物酶的凝胶电泳26-272(2(5 同工酶染色273( 结果与分析27-313(1 同工酶和种子蛋白凝胶浓度及交联度的确定27-283(2 种子贮藏蛋白电泳结果28-293(3 过氧化物酶电泳结果29-303(4 酯酶电泳结果30-31 4( 讨论31-34 4(1 凝胶的浓度和交联度对条带的清晰度和分辨率有较大影响31 4(2 合适的蛋白提取剂及电泳系统是利用种子贮藏蛋白进行杂交种鉴定的前提31-32 4(3 利用同工酶进行油用向日葵杂种纯度鉴定是可行的32-34第二章 向日葵总DNA不同提取方法比较及在RAPD-PCR中的应用研究34-39 1( 前言342( 材料和方法34-362(1 实验材料342( 1(1 植物材料342( 1(2 生化试剂及仪器342(2 PCR扩增反应及程序34-352(3 提取方法35-362(3(1 CTAB法352(3(2 SDS法35-363( 结果与分析36-373(1 用CTAB法和SDS法对向日葵真叶及种子进行总DNA的提取363(2 RAPD-PCR扩增结果36-37 4( 讨论37-39 4(1 利用SDS法从向日葵中提取总DNA是一条快速、简便、有效的方法37-38 4(2 掌握提取过程的关键要素是获得高质量DNA的前提38-39第三章 油葵RAPD-PCR反应条件的优化及RAPD技术在油葵杂交种纯度检验上的应用39-51 1( 前言392( 材料和方法39-402(1 材料392(2 生化试剂与仪器39-402(3 方法402(3(1 油葵基因组DNA的提取402(3(2 RAPD-PCR反应条件403( 结果与分析40-463(1 油葵RAPD反映体系的建立40-433( 1(1 模板浓度的确定及模板浓度对扩增结果的影响40-413( 1(2 MgCl2浓度及TaqDNA聚合酶浓度的确定41-423( 1(3 dNTPs浓度的确定423( 1(4 引物浓度的确定423( 1(5 退火温度的确定42-433(2 不同品种最佳引物的筛选 43-463(3 生产用杂交种的纯度鉴定46 4( 讨论46-51 4(1 RAPD技术中的相关影响因素的探讨46-49 4( 1(1 模板浓度及纯度的控制46-47 4( 1(2 Tap酶的浓度及质量47 4( 1(3 扩增程序47-48 4( 1(4 污染问题48 4( 1(5 扩增条带的确定48-49 4(2 RAPD技术的可靠性49 4(3 RAPD分子标记技术在种子纯度检验方面的优越性49-51结 论51-52 参考文献 52-58