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【doc】口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析

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【doc】口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析【doc】口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析 口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析 华西口腔医学杂志2004年4月第22卷第2期 WestChinaJournalofStomatologyVo1.22No.2April,2OO4?Io3? [文章编号]1000-1182(2004)02-0103-03 口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析 王志勇,李声伟,胡勤冈4,田卫东 (1.四川大学华西口腔医院颌面外科,四川成都610041; 2.南京大学医学院附属口腔医院外科,江苏南京210008) [摘要]目的通过分析口腔鳞癌...
【doc】口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析
【doc】口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化 口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析 华西口腔医学杂志2004年4月第22卷第2期 WestChinaJournalofStomatologyVo1.22No.2April,2OO4?Io3? [文章编号]1000-1182(2004)02-0103-03 口腔鳞癌中树突状细胞的免疫组化分析 王志勇,李声伟,胡勤冈4,田卫东 (1.四川大学华西口腔医院颌面外科,四川成都610041; 2.南京大学医学院附属口腔医院外科,江苏南京210008) [摘要]目的通过分析口腔鳞癌中浸润性树突状细胞的特征性表型,以探讨其在肿瘤微环境中的功能状态.方 法选择未经任何非手术治疗的初发口腔鳞癌患者标本34例作为实验组,30例口腔正常粘膜组织作为对照组. 通过免疫组化技术标记组织中树突状细胞(DE)的CD1a,HLA-DR和CD83抗原,观察两种组织中的IX:表达3种抗 原的状况,结果进行统计学分析.结果所有病例均未见明显CD83IX:,但均有CD1aIX:,其在口腔鳞癌组织中 的浸润程度低于正常口腔粘膜组织,差异有显着性(P<0.05).在口腔鳞癌组中有27例癌实质内的IX:表达HLA- DR抗原,其HLA.DR的阳性表达率为79.41%.结论口腔鳞癌组织中的IX:,其浸润程度下降并存在功能成熟障 碍. [关键词]树突状细胞;口腔癌;免疫组化 [中图分类号]R739.8[文献标识码]A AnalysisofDendriticCellinOralSquamousCellCarcinomaWANGZhi-yor~..LI..删 ,lg.TIANWei-dor~'.(1.Dept.ofOralandMaxiUofacialSurge0,WestChinaCollegeofStom atolgy.SichuanUniversi- ty.Chengdu610041.Ch/na;2.Dept.ofOralandMaxillofacialSurger),StomatologicalHospi tala~iaeUCollegeofMedicine. ?n,ngUniversity.Nanjing210008.Ch/na) [Abstract]ObjectiveToelucidatethefunctionalstatusofdendriticcells(IX:)inthetissueoforal$quan'loUScellcarcinoma byaIlalyngcharacteristicphenotypeofthem.Methods34specinremfromoralsquamouscellcarcinomac娜primarilytreated withsurgerywereselectedastestgroup.Inaddition-30specimensofnormalmueo6afromoralmucocelecasesweIeusedasc0n- tro1.DistributionofIX:expressingCD1a.HLA-DRandCD83intunlortissueandnormalmu~~llSmernb础wasobservedby immur~histochemistry.ThenumberofIX:expressingtheantigens,whichrepresentedthedensityofIX:iIl扛gintotissue-was countedbymicroscope.ThedensityofIX:andtherateofIX:expressingHIA-DRinoralcar? in0nlagroupandcontrolweIestaffs- ficaUycomr~ed.ResultsTherewasnoCD83IX:inallcases,butCDlaIX:wasfoundinallsamples.Thedensityof CDlaIX:intulnortissueWassignificantlylowerthanthatinnornlalmucousmembrane(P<0.05).HIA-DRantigenexpressed onthesurfaceofIX:intumoralepitheliuna0f27-casecarcinomaspecimensandinnormalmucousepithelium0f23cases.Therate ofHLA-DRpositiveexpressionofTIDChadnostatisticsignificancebetweenthetwogroups.ConclusionThelowerdensityof IX:infiltratingintumortissuemightreflectthemicroenviromentalimmunodeficiencyofhostswithoral$qua/nouscellcarcinoma. andthefunctionalmatureofIX:mightbeinhibitedbytheinanunosuppresslveactionoforal$quanlouscellcarcinoma. [Keywords】dendriticcell;oralcarcinoma;immunohistoehenfistry 树突状细胞(dendriticcell,DC)是目前已知功能 最强的抗原提呈细胞,其抗原提呈能力是其他抗原提 呈细胞的10,100倍….诸多的研究证实,DC能在 体外摄取肿瘤抗原,并在体内激活初始T淋巴细胞产 生抗原特异性,从而在肿瘤免疫中发挥至关重要的作 用.然而,荷瘤宿主本身DC并没有激发机体免疫系 统产生有效的抗肿瘤效应,说明肿瘤免疫抑制作用对 DC有一定影响.因此,对肿瘤微环境中的DC,即肿 [收稿日期]2oo2—12—31.[修回日期]2oo3—10—10 [作者简介]王志勇(1967.),男,江苏人,主治医师,博士 [通讯作者]胡勤刚,1:o25.3609574 瘤浸润性DC(tumorinfiltratingdendriticcell,TIDC)的 研究有助于加深对肿瘤免疫逃逸机制的认识.本文 采用免疫组化技术,对34例口腔鳞癌TIDC的特征性 表型进行分析,以探讨口腔鳞癌TIDC在机体肿瘤免 疫中的功能状态. 1材料和 1.1材料 1.1.1标本收集在南京市口腔医院2001年, 2002年收治的口腔鳞癌患者中,筛选出初发并且未 经任何非手术治疗患者的手术切除标本34例,作为 实验组.本组资料,男性23例,女性11例,平均年龄 华西口腔医学杂志2004年4月第22卷第2期 ? i04?WestChinaJournalofStomatolo~Vo1.22No.2ril,2OO4 55岁,年龄范围38,73岁. 另外,收集该院的口腔粘液腺囊肿的手术切除标 本3O例,以其携带的正常粘膜上皮作为对照组.所 有标本均经HE切片复查并重新证实诊断. 1.1.2主要试剂和设备选用单克隆抗体:鼠抗人 CDlamAb(购自NeoMarkers公司,美国);鼠抗人CD83 mAb(购自Serotec公司,英国);鼠抗人HLA—DRmAb (购自NeoMarkers公司,美国).免疫组化成套试剂盒 (购自NeoMarkers公司,美国);0.25%胰蛋白酶(购自 上海华精生物技术公司);国产家用微波炉(格兰仕公 司). 1.2方法 1.2.1标本处理及切片制作所有手术切除后的标 本,均沿纵向剖开取材,经10%中性福尔马林固定 后,石蜡包埋制成组织蜡块.将石蜡包埋好的组织 块,制成4,5厚的连续切片,置于60cc烘箱内烘 烤6h以上备用. 1.2.2免疫组化染色(S-P法)操作步骤为:按有关 试剂的产品#说明#进行操作.简化其操作程序,常规 脱蜡至水,滴加过氧化物酶阻断剂10min后行抗原 修复.依次滴加封闭血清5min,一抗37cc,2h,生物 素标记的二抗37cc,30min,链亲和素过氧化物酶液 37cc,20min.每步骤后均用缓冲液(PBS或TBS)洗 涤5min,DAB显色,苏本素复染,干燥,中性树胶封 片. 抗原修复方法操作步骤为:针对CDla,HLA.DR, CD83采用不同的抗原修复方法.CDla于1mmol/L EDTA(pH80)修复液中,高压锅煮75min.HLA— DR,于PBS缓冲液中(pH7.4),微波加热4.5min(国 产微波炉,750W,中高档火力).CD83,于01%胰蛋 酶CaClz溶液中,37cc消化10min20S. 实验对照:以PBS代替一抗作为阴性对照,以扁 桃体组织作为阳性对照. 123计数及统计方法由3位病理科主治医师阅 片.每张切片任意取DC分布最密集的5个区,在光 镜高倍视野下(HPF×40)计数CDla阳性细胞的数 目.以5个高视倍视野下CDla阳性细胞平均数代表 该标本切片中的DC浸润程度.采用成组资料样本 均数的t检验统计分析实验组与对照组的DC浸润 程度.结合形态观察每例标本的DC表达HLA.DR 的状况,以Y检验比较两组HLA—DR阳性表达率. 2结果 2.1DC的形态与分布 在光镜下,DC的形态不规则,有长短不一的树状 突起.在口腔粘膜组织中,DC主要位于上皮组织的 基底层和棘层中,分布比较均匀,散在(图1).上皮 深层的结缔组织内也有少量分布.在口腔鳞癌组织 中,DC分布不均匀,常密集呈灶.在癌实质内,DC数 量较多,其树状突起常与癌细胞密切接触(图2).癌 旁问质内DC,数量相对较少. 图1正常黏膜组织中,DC主要位于上皮组织的基底层和棘层 中,分布比较均匀,散在免疫组化S-P法×10 Fig1DistributionofDCinnormalmucoustissueSP×10 幽2u腔鳞癌组织中D(=分布不均匀,常密集呈灶,其树状突起 常与癌细胞密切接触免疫组化S-P法×40 Fig2DistributionofDCinoralsquamouscellcarcinomaSP×40 22抗原表达状况 CDla在所有被检测的组织中均有强阳性表达, 表达部位为胞浆和胞膜.CD83在癌组织和正常口腔 粘膜上皮均未见明确表达. HLA—DR其特异性较差,但在粘膜上皮和癌实质 内,结合形态分析,可以观察DC的HLA—DR表达状 况.它表达于DC的胞膜;在34例癌组织中,有27例 癌实质内存在HLA—DRDC.30例正常口腔粘膜上 皮中,有23例显示HLA—DRDC. 2.3DC浸润程度 231CDlaDC的浸润程度CDla阳性DC在口 腔鳞癌组的浸润数目(HPF下)少于正常口腔粘膜组, 其差异有显着性(P<O05),结果见表1. 华西口腔医学杂志2004年4月第22卷第2期 WestChinaJcumalofStonmtolo~vVo1.22No.2April.2004'lo5' 表1口腔鳞癌组织与正常粘膜上皮中CDlaDC均数 的比较 Tab1ComlmrisonofCDlaDCineanbetweenoralsqua- lnouseellcareJllOlllaandnormalillllt2Osa t=2.0l3P<0.05 2.3.2DC表达HLA.DR的状况口腔鳞癌组的癌 实质内浸润的DC表达HLA.DR的阳性率(HPF下)较 正常粘膜上皮者升高,但其差异无显着性(P> O.05).结果见表2. 表2口腔鳞癌组织与正常粘膜上皮中DC的HLA-DR 阳性表达率的比较 Tab2ComparisonofthepositiverateofDCexpress~ HLA-DRbetweenoralsquamouscellcarcinoma andIIOITflalmucosa =0.0703P>0.05 3讨论 DC是目前已知功能最强的抗原提呈细胞.在体 内,它经历不成熟到成熟的发育过程.随着发育成 熟,DC能表达一系列分化抗原,其中最直接与其功能 有关的是CDla,MHC—I类分子,mA—DR,CD80,CD83, CD86,CIM0等.CDla是一种递呈脂类抗原的分子, 目前被公认为DC的主要特征性标志,已广泛地应用 于DC分离,纯化和体外培养的鉴定.笔者采用CDla 免疫组化技术标记DC,结果表明,口腔鳞癌中CDla DC的浸润程度明显低于正常口腔粘膜上皮.这一结 果与Lissoni等的临床对照研究相似.他们发现癌 症患者外周血中成熟和不成熟DC的百分比明显低 于健康者.由于DC是唯一能够激活初始型T细胞 增殖的抗原提呈细胞,而且DC表面CDla抗原可调 节T细胞问的相互作用.因此,在口腔鳞癌微环境 中,CDlaDC的缺乏反映了肿瘤具有抑制DC的浸润 从而限制由其诱导的抗肿瘤细胞免疫反应. CD83属于免疫球蛋白超家族成员,它高表达于 激活状态DC的表面,被认为是成熟DC的特异性标 志?J.HLA—DR是MHC一?类分子,能与经胞内处理 的抗原多肽结合而高表达于成熟DC的表面,以利于 DC的抗原提呈.mA—DR的不表达或低表达说明DC 提呈外源性抗原能力低下.CD83的不表达表明无激 活状态DC的存在.本研究结果显示,在34例口腔 鳞癌实质内有27例存在mA—DRDC,其阳性表达率 为79.41%,较正常口腔粘膜上皮内DC的mA—DR表 达率升高,但差异无显着性.在另一方面,笔者采用 扁桃体组织作为阳性对照,在阳性对照均显示为阳性 结果时,鳞癌组织和正常粘膜上皮中,未发现明显表 达CD83的DC.一般认为,正常黏膜中的DC(也即是 Langerhans细胞)是不成熟的Dc,通常不表达CD83抗 原.至于肿瘤组织内的DC,Chen等对肝癌的研究 发现在肝癌结节中的DC不表达CD83抗原.这些结 果与笔者的研究结果相一致.本研究结果说明,口腔 鳞癌中浸润的DC经历肿瘤抗原刺激,产生一定程度 的HLA.DR表达,但其表达程度并未达到有意义的高 表达,而不表达CD83进一步表明口腔鳞癌中TIDC 是非激活状态的不成熟DC.Ishida等对荷瘤宿主 这类DC的功能分析表明,其抗原摄取能力,迁移进 入引流淋巴结以及刺激初始型T细胞的功能均被完 全抑制.因此,这类DC存在功能成熟缺陷,因而难 以完成其抗原提呈功能. 至于TIDC功能成熟缺陷以及浸润程度下降的可 能机制,有实验研究证明:一,癌细胞可诱发DC的凋 亡,从而导致DC在肿瘤微环境中的数量下降J,二, 肿瘤细胞分泌的血管内皮生长因子,可于造血前体细 胞水平抑制nt.3扩增造血前体细胞和DC而导致荷 瘤宿主DC的数量减少,而且还可抑制Fit.1诱导 DC转录因子NF-KappaB的激活而致DC成熟程度降 低和功能缺陷].三,肿瘤分泌的其他一些因子,如 IL-10可以抑制DC的分化成熟,下调共刺激分子的表 达,并可抑制DC在肿瘤内的聚集;TGV-~可显着 抑制DC的产生和DC的分化成熟口. 综上所述,口腔鳞癌组织的DC,其浸润程度下 降,并存在功能成熟缺陷.这反映了口腔鳞癌对肿瘤 微环境内DC免疫功能的抑制作用. [参考文献] [1]InabaK,PackM,InabaM,eta1.Highlevels0famajorhistocompat— ibilitycomplex1/??selfpeptidecenrplexOI1dendriticfromtheTcellar?? easoflymphnode[J].JEXPMad,1997,186(5):665-672. [2]LissoniP,VigoreL,FerrantiR,eta1.Circulatingdendriticcellsin earlyandadvancedcancerp,~tients:diminishedperee~tinineta.q/.~c dise~dJ].JBiolRegulHomeestAgents,1999,13(4):216-219. [3]ZhouU,TedderTF.Humanbloaddendriticcellsselectivelyexpress CD83,amemberoftheimmunoglobulinsuperfamfly[J].Jlromunol, 1995,154(8):3821—3835. (下转第131页) 华西口腔医学杂志2OO4年4月第22卷第2期 WestChinaJournalofStomatolo~VO1.22No.2April,2OO4'131' 本研究74例RMS患者治疗中采用了下述原则: ?在确诊的基础上,查清病变累及的范围和器官. ?在术中冰冻切片检查的监测下,尽量较广泛地切除 原发病灶.?术后配合放疗控制可能残余的病变,并 可辅助化疗预防和治疗远处转移. 本研究的扩大切除是指按常规在原发肿瘤边界 外1cm的正常组织切除肿瘤外,对其邻接区的组织 器官亦尽可能纳入切除范围.第一次手术的彻底性 是影响预后的关键,RMS原发灶治疗以区域性扩大 切除为主.但手术治疗范围和方法应根据患者的年 龄,肿瘤的大小,病理分型,临床分期,病变部位和临 床生物学行为决定.通过对74例RMS患者的观察 及随访,可见多形型分化最高却最少见,转移亦发生 较晚,预后是最好的;胚胎型最常见且多见于l5岁以 前儿童及婴儿-6J,早期即沿血道和淋巴道引起广泛转 移至肺,局部淋巴结,骨,肝,肾,胰等;腺泡型预后最 差,发展快,早期就转移至肺,局部淋巴结,胸膜等. 儿童患者的RMS多系胚胎型,加之患儿的体质弱,难 以耐受大的手术,且手术切除对患儿的颌面部发育有 较大的影响,因此一般采用放疗与化疗联合治疗,但 效果较差;本研究l2例婴幼儿患者复发高达63%,而 5年生存率仅为42%.对于临床工,?期高分化,症 状不明显的患者采用局部病灶切除术并补充适当剂 量的放疗,其5年生存率最高,达到了75%;对分化 较差并有症状的患者,除采用扩大切除术并制定严格 的放疗外,必要时配合化疗,5年生存率也可达 7l%,本研究随访的所有临床工,?期患者,复发仅为 25%,5年生存率达到了75%;临床?,?期的患者入 院时多已有远处转移,有手术指征者一般先采用术前 辅助性化疗或放,化疗,使原发肿瘤缩小或转移灶得 到理想的控制后再行扩大切除,从而提高手术切除 率,降低致残率;不具备手术指征的患者,则采用放疗 或放,化疗来减缓肿瘤的生长,控制远位转移以延长 患者的生存时间,但这些患者的5年生存率只有 41%,患者多死于远位转移导致的病情恶化,与Hessa 等和彭大为等的报道相似.Golubicic等[9采用 放疗治疗患者的5年生存率也同样较低.如何提高 此类患者的5年生存率是目前研究的重点. [参考文献] [1]梁传余,罗清礼.头颈部横纹肌肉瘤(附68例分析)[J].华西医 学,1997,12(2):203204. [2]Salwa-ZurawskaW,BiczyskoWA.Usefulnessofinmmndli0dlcal testingandelectronmicroscopyinthediagnosisofelMl丑lrhab— domyosarcoma[J].MedSciMonit,2OO2,8(1):39-46. [3]陈世范,马德选,应月强.电镜在横纹肌肉瘤诊治中的价值[J]. 安徽医科大学,1998,33(3):222.223. [4]黄宝生.横纹肌肉瘤骨侵蚀x线表现(附4例并复习文献) [J].实用放射学杂志,1995,11(11):672-676. [5]HaglwaraA,IncneY,NakayamaT.The"botry~dsign":Acharac— tefisficfeatureofrhabdomyosareomasintheheadandrIed【[J].NeI radiology,2001,43(4):331—335. [6]贾问炬.儿童1:1腔及颌面部胚胎性横纹肌肉瘤[J].华西1:1腔医 学杂志.1991,9(2):123—124. [7]HessaA,SchroderU,SchroderR.Rhabdom~intheareaof thehead—neck:Asynopsisofs0l1lecas?.therapeuticpossibilitiesand prognoses[J].Laryngorhinootologie,1998,77(10):557—563. [8]彭大为,沙允文.横纹肌肉瘤57例临床分析[J].江苏医药, 1990,16(6):316-317. [9]Golubicicl,NikitovicM,4~oanJ.Roleofradiotherapyincombined therapyofsofttissue?xminchildrenandadolescents[J].SipAria CelokLek,2000,128(5-6):172—178. (本文编辑邓本姿) (上接第105页) [4]王正昕,曹雪涛.肿瘤浸润性树突状细胞的研究进展[J].国外 医学免疫学分册,1998,21(6):326-329. [5]ChenS,AkbarSM,TanimotoK,eta1.AbselrlceofCD83一positivem— tureandacfivmeddendriticcensatcallcernodules,mmpadents出 h印旧tocd】ll】arCaFcin(M]D~:relevancetohepatocarcinogenesis[J].Can— cerLett,2000,148(1):49—57. [6]IshidaT,OyamaT,CAtl'bolleDP,eta1.DefectivefunctionofLanger- hanscellintumor-beatinganimalsistheresultofdefectectivematulya— tionfromhemopoieticprogenitors[J].JImmunol,1998,161(9): 4842-4851. [7]PirtskhalaishviliG,ShurinGV,GambottoS,eta1.Transductionof dendriticcellwithBcl—xLincreasetheirresistancetoprostateC~llcer- inducedapoptosisandanfittrmoreffectinmiee[Jj.JImrnunol,2OOO, 165(4):1956-1964. [8]OhmJE,ShurinMR,EscheC,eta1.Effectofvascularendothelial factorandFh3一ligandondendriticcellgenerationt[J].J Immunol,1999,163(6):3260-3268. [9]OyamaT,RanS,IshidaT,eta1.Vasod_arendothelial乎factet affectsdendriticcellmaturationtlltheinhibitionofn~harfactor- tcBactivationinhemopoieticprogenitor~ells[J].JImmund,1998, 16o(3):1224—1232. [10]GirolomoniG,Ricciondi—CastagnoliP.Dendriticcellsholdpr0tr~sefor immtmotherapy[J].JImrmnolToday,1997,18(3):102—104. [11]张毅,武汉磐,张雁云,等.转化生长因子口对鼠造血祖细胞 产生树突状细胞的调控作用[J].中华医学杂志,1999,79(3): 178—180. (本文编辑王晴)
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