乌苯美司对淋巴细胞的促细胞分裂作用

乌苯美司对淋巴细胞的促细胞分裂作用 药理与临床 ? 乌苯美司对淋巴细胞的促细胞分裂作用 3a 陆瑶华杜敏琼张 毅 翟晓波 沈炜明 a ( ) 上海市第六人民医院临床药学研究室, 上海 200233; 上海医药工业研究院, 上海 200040 3( ) 小鼠 乌苯美司 110 ƒ只后, 其脾细胞中 2参入增加; 加入小鼠脾细 摘要CD F 1 ip ΛgDN A H T dR 3() 胞培养液中的 1 0. 01, 0. 1, 1. 0 ƒ能提高淋巴细胞的2参入, 而 10 ƒ则不能。 经 1 Λgm lH T dR Λgm l 3() 预处理的人外周血细胞亦能提高淋巴细胞的2参入。 高浓度 1 100 ƒ能刺激促细胞分 H T dR Λgm l() 裂剂 或 对小鼠脾淋巴细胞的促细胞分裂作用, 且对 细胞的促分裂作用优于对 细 Co nA L P SB T 胞的作用, 当浓度< 50 ƒ时则无此作用。Λgm l 关键词 乌苯美司 淋巴细胞 促细胞分裂剂 () 研究表明, 乌苯美司 , 1为一 , 烘干, 再将滤纸片置于盛有0. 4 纤滤纸上u b en im ex m l 有效的氨肽酶抑制剂, 具有免疫激活作用, 并 闪烁液的测定杯中, 用液体闪烁计数器测定31, 2 () 脾细胞中 2的参入 。DN A H T dR cpm 具有多种抗肿瘤活性。本文通过测定 1 对 1. 2. 2 1 体外对小鼠淋巴细胞的促细胞分 淋巴细胞的促细胞分裂作用, 进一步阐明 1 裂作用 对小鼠免疫功能影响的作用机制。 将 正 常 小 鼠 脾 细 胞 悬 浮 于 20% 2FC S 1 材料和方法 21640 培 养 液 中, 使 终 浓 度 为 1. 5 ×R PM I 1. 1 实验材料7 国产 1 由四川抗菌素工业研究所化学制 10。 取出 3 置于陪替氏培养皿, 分别ƒm lm l 剂 研 究 室 提 供, 批 号 940818。 刀 豆 蛋 白 A 加入用 21640 液配制的浓度为 0. 001、R PM I() ( ) 美国 公司是 细胞的促细 Co nA D ifco T 0. 01、0. 1、1 和 10 的 1 溶液 0. 05 , ƒΛgm l m l() ( ) 胞分裂剂; 脂多糖 美国 公司L P S S igm a 、组再分别加入 或 使L P SCo nA L P S Co nA 是 细胞的促细胞分裂剂。B 终 浓 度 为 0.5 ƒ于 5% 2、37?和 饱 , Λgm lCO 1. 2 实验方法 和湿度下培养 18 。 离心收集非粘附细胞, h 1. 2. 1 1 体内促细胞分裂作用 ( ) 小 鼠 ?, 8, 12 周1 0. 25 CD F 1 ip m l 重悬于 4 培养液中, 加入 3 2m l m l F ico llH a2 ( ) 0. 1、1、10、100、1 000 只18 后, 取出 ƒΛgh 分离液, 于 20?以 400 离心 40 , p aqu e g m in 脾脏, 将脾细胞悬浮于无血清 21640 液 R PM I收集淋巴细胞层, 用无血清 21640 液洗 R PM I中, 洗 涤, 以 800 离 心, 用 5% 22g FC SR PM I 6 涤 3 次, 制成 1. 5×10的淋巴细胞悬液。ƒm l 6 1640 液制成1. 5 ×10ƒ的细胞悬液, 于每 m l 在 96 孔培养板上每孔加 200 Λl, 置 5% CO 2、( ) 个具塞玻璃管 11×10 中加入 3 , 于mm m l 37?和饱和湿度下培养 3 , 每组均设 3 复d 5% 、37?和饱和湿度下培养 3 , 培养终CO 2d 3 孔。 培养终止前 18 加入 2 3. 7ƒh H T dR kB q3止前 18 , 加入 37 2继续培养 18 , h kB qH T dR 3 ()孔, 测定淋巴细胞中 2的参入 。 H T dR cpm , 然后用多头细胞收集器将细胞收集于玻h 另将小鼠脾细胞分成去 细胞和去巨噬 T 细胞两个组分, 按下法制备去 细胞组分: 脾T 细胞中加入抗 血清 0.2 , 无血清 1. 2 T h ym l? “八五”国家重点科技攻关项目 85292220221721640 液 10. 8 , 于 37?下 保 温 60 R PM Im l 用无血清培养液洗涤 2 次, 重悬于 10. 8 , m in 无血清培养液中。 1 后洗净细胞, 调节细 m l h 6 胞浓度至 1. 5×10ƒ去巨噬细胞组分的制; m l 3 4 备参照或 等报道。M o sie rIsh izu k a 1. 2. 3 1 体外对人外周血淋巴细胞的促细 胞分裂作用 取 20 人新鲜静脉血, 肝素抗凝后制 m l ( 得人外周血中棕黄层细胞 其中含淋巴细胞 ) 和单核细 胞, 悬 浮 于 20% 221640 FC SR PM I 6 ()培养液中 终浓度为 4×10ƒ。取 3 置 m lm l , 培养前 24 给予 1 后 小鼠脾细胞 图 1h 3于 陪 替 氏 培 养 皿 中, 加 0. 2 ƒ1 0. 05 Λgm l 中- 的参入速率 D NA HTdR , 于 5% 、37?和 饱 和 湿 度 下 培 养 18 m lCO 2 明 1 对淋巴细胞有促进细胞分裂的作用。, 洗涤后用 2液分离并收集淋h F ico llH ap aqu e 2. 2 1 体外对小鼠脾淋巴细胞的促细胞分 巴细胞, 其余过程同上所述。裂作用 2 结果 表 1 显示, 经低浓度的 1 处理可提高小3鼠脾淋巴细胞的2参入达 50, 100% , H T dR 2. 1 1 体内对小鼠脾细胞的促细胞分裂作用 ( ) 而高浓度 1 10 ƒ却无此作用。 另外, 1 Λgm l如图 1 所示, 1> 10 ƒ只时能增加脾细Λg 预处理亦不会刺激 或 对淋巴细 Co nA L P S 3 胞 中2的参入, 并且参入速率的DN A H T dR 胞的促细胞分裂作用。 ) ( 增加与 1 > 1 只浓度的增加相平行。说ƒm g 3 ()表 1 1 体外对脾淋巴细胞- 参入的影响 HTdR cpm 实 验 实 验 I? 1 处理 ( )ƒΛgm l ( )( )不加其他促分裂剂 加 1 组不加 1 组 不加其他促分裂剂 加 1 组不加 1 组 ƒƒ加 加 Co nAL P S ( )( )2, 712 1. 00 0 5, 588 1. 00 18, 653 24, 298 ( )10 3, 409 0. 61 16, 930 16, 375 - - ( )( )1 8, 997 1. 61 14, 884 21, 012 6, 238 2. 30 ( )( )0. 1 8, 494 1. 52 24, 708 23, 081 5, 098 1. 88 ( )( )0. 01 8, 717 1. 56 17, 210 22, 394 5, 804 2. 14 ( ) 0. 001 6, 426 1. 1517, 637 21, 008 - - 2. 3 1 体外对人外周血淋巴细胞的促细胞分裂作用 3表 2 显示, 经 1 预处理的中棕黄层细胞能使淋巴细胞2参入提高 2, 3 倍, 表明 1 对 H T dR 人外周血淋巴细胞有促细胞分裂作用。 3 θ() 1 体外对人外周血淋巴细胞- 参入的影响 ? 表 2HTdR x s 淋巴细胞培养液 外周血来源1 处理cpm 加 1 组ƒ不加 1 组 0 1. 00 2, 168?86. 02A 4, 791?180. 58 2. 21 1 980?40. 5 0 1. 00 B 2, 822?82. 56 2. 88 1 θ() 表 3 加入脾细胞培养液的 1 在体外的促细胞分裂作用 ?x s Co nA L P S 不加其他促分裂剂 1 ( )ƒΛgm l 加 1 组ƒ不加 1 组 加 1 组ƒ不加 1 组 加 1 组ƒ不加 1 组 cpm cpm cpm 100 ?137. 1?820. 2?470. 43, 6104. 98 27, 4051. 58 11, 8142. 89 708?27. 2 18, 733?581. 4 3, 951?156. 8 1 0. 98 1. 08 0. 97 754?25. 8 16, 304?535. 9 3, 965?140. 3 0. 01 1. 04 0. 94 0. 97 725?25. 1 17, 345?499. 8 4, 088?160. 5 0 1. 00 1. 00 1. 00 θ() 表 4 加入去巨噬细胞和去 T 细胞脾细胞中的 1 在体外的促细胞分裂作用 x ?s 1 脾 细 胞 促 分 裂 指 数 去 细胞组 培养液全脾细胞组去巨噬细胞组T 不加 1加 1100 Λgƒm l 不加 1加 1100 Λgƒm l 不加 1加 1100 Λgƒm l 不加其他abc2. 5 1. 4 2. 2 1. 0 1. 0 1. 0促分裂剂 2Co nA ( ) ( )( )( )( )( )13. 8 1. 0 18. 9 1. 4 2. 2 1. 0 3. 3 1. 5 1. 9 1. 0 4. 3 2. 3 ( )( )( )( )( )( )8. 5 1. 0 17. 6 2. 1 3. 4 1. 0 4. 4 1. 3 6. 3 1. 0 12. 3 2. 0 L P S ) ) ) 508?7. 9 4531?108. 2 601?18. 0 acpmb cpmccpm 加入促细胞分裂剂或和 1 培养时细胞的 cpm 值ƒ ) () 1促分裂指数 M I= 每种细胞单独培养时的 cpm 值 加 1 组的M I) 2括号内为培养液中加促细胞分裂剂时加 1 组与不加 1 组的比率=M I 相应的不加 1 组的M I 2. 4 加入脾细胞培养液的 1 在体外的促细对去巨噬细胞脾细胞的作用较低, 与全 L P S 胞分裂作用脾细胞相比, 和 的促分裂指数分 Co nA L P S 表 3 显示, 仅在加入 1 100 ƒ时, 脾 Λgm l 别下降 84% 和 60% 。对去 细胞的脾细胞, T 3( 细 胞的2参入才有所增加 与对照组 H T dR 的促分裂指数也明显降低, 但 仅Co nA L P S ) 相比, 约提高到 5 倍; 与促细胞分裂剂同时 受到轻微影响。 与 1 相结合时, 尽管 1 使 对脾细 Co nA 100 能刺激 加入脾细胞的 ƒ1 和Λgm l Co nA胞的促分裂指数增加 40% , 但使 的作用 L P S 对脾细胞的促细胞分裂作用, 当 1 103() ) 应; 而高浓度 100 ƒ ƒ只能刺激脾细胞 中2的参 Λgm l时的促细胞分裂作ΛgDN A H T dR 用主要针对 细胞。这种高低浓度的促细胞 入速率。 B 本文采用 1 预处理含淋巴细胞和巨噬细分裂作用机制尚有待于进一步研究。 3本研究初步揭示了 1 促进 或延缓 胞的脾细胞, 然后收集淋巴细胞, 测定其2D T H H 动物肿瘤发生的作用机理, 从而为 1 进一步 参入, 观察 1 在 0. 001, 10 ƒ时的 T dR Λgm l 应用于临床提供了依据。作用。结果发现, 1 为 10 时, 没有促细ƒΛgm l 胞分裂作用。5 参 考 文 献等报道, 1 不仅能提高 细胞, M ülle r T 3而且也能提高 细胞的2参入。 本文 B H T dR ( ) 沈炜明, 胡其乐, 陈荣秀等. 新药与临床, 1995; 14 4:1 结果与此相符。 197 培养液中加入 1 100 显示出对脾 ƒ, 沈炜明, 强文安, 杜敏琼等. 中国医药工业杂志, 1995; Λgm l2 细 胞 有 很 强 的 促 细 胞 分 裂 作 用, 并 能 促 进 ( ) 26 9: 401 或 的促细胞分裂作用。 表 4 显示 Co nA L P S . , 1967; 158: 1573M o sie r D ESc ience 3 高浓度 1 主要对 细胞有促细胞分裂作用。 B , , . ,Ish izuk a M B raun W M a t sum o to TJ Imm uno l 4 1971; 107: 1027 ( ) 1 低浓度 < 1 时对脾淋巴细胞 ƒΛgm l , , . M u lle r W E GZah n R K A rende s J et a lB io ch em 5 有促细胞分裂作用, 用 1 预处理巨噬细胞和 , 1979; 28: 3131P h a rm aco l M ITO GEN IC E F F EC T O F U B EN IM EX O N L YM PHO C Y T E S 3 a 2, 2, , 22, L U Y ao H u aDU M in Q io n gZHA N G Y iZHA I X iao Bo SH EN W e iM in g ( , ′, ;200233D ep a r tm en t of C l in ica l P h a rm acy S h ang h a i S ix th P eop les H osp ita lS h ang h a i a ), 200040S h ang h a i I nstitu te of P h a rm aceu tica l I nd u stry S h ang h a i 32A BSTRACT T h e in co rpo ra t io n o f H th ym id in e in to DN A o f sp leen ce lls in c rea sed b y ( )( ) 10 ƒƒ1. 1 0. 01, 0. 1, 1. 0 ip o f Λgm o u se o f u b en im ex Λgm lw h ich w a s added to cu ltu re 32ƒ, 10 m o u se sp leen ce ll in c rea sed H th ym id in e in co rpo ra t io n in to lym p ho cy te sb u t Λgm l d id 3. 1 2no tH um an p e r ip h e ra l b u ffy co a t ce lls p re t rea ted w ith a lso in c rea sed H th ym id in e in co r2 () . 1 100 ƒpo ra t io n in to lym p ho cy te sΛgm len h an ced th e m ito gen ic ity o f bo th Co n A an d L P S o n m o u se sp leen ce lls an d ex h ib ited a h igh m ito gen ic effec t o n B ce lls in p refe ren ce to T , 1 50 ƒ.ce llsb u t th is effec t w a s no t seen w h en w a s b e low Λgm l , , Key W ord s u b en im ex lym p ho cy tem ito gen 1996 年 8 月 20 日收稿 ] 2 P a tS97- 15 在 ZrC l- S iO 催化下将羰基化合物硫缩醛化 - 16 次磷酸引发卤代烃的脱卤反应 J ang DO [ T e t rah e2 S9742 , 1996; 37: 5367等[ , 1996; 37: 4621d ro n L e t t ney H K T e t rah ed ro n L e t t 水溶性碘代烷烃或芳烃和溴代烷烃在次磷 酸、醛或酮和 1, 22乙二硫醇于无水二氯甲烷中在 ZrC l2N aH 24 和偶氮二异丁腈的作用下, 以水为溶剂回流, 可脱去卤 的催化下, 反应得硫缩醛或硫缩酮, 17 例收率接近理 CO 3 S iO 2 论量。 该反应速度快, 条件温和。 素得相 应 的 烃 类, 收 率 优。 溴 代 芳 烃 在 同 一 条 件 下 收 率 50% 以下。 氯代烃不反应。[ 史 翔摘 周伟澄校 ][ 史 翔摘 周伟澄校 ]