细胞角蛋白在正常皮肤组织中的表达

细胞角蛋白在正常皮肤组织中的达 细胞角蛋白在正常皮肤组织中的表达 作者:孙 莉，李 红，刘淑梅，徐志秀【摘要】 目的 观察7种细胞 角蛋白(cytokeratins，CK)在正常皮肤组织的表达，并探讨其意义。 应用免疫组织化学S-P法对20例不同部位的正常皮肤组织进行 CK7(K72.2)、CK8(C-51)、 CK10(DE-K10)、CK14(LL002)、 CK17 (E3)、 CK18(DC10)、 CK19(KS19.1)标记，观察不同细胞角蛋白 的表达情况。结果 在正常皮肤上皮组织中，7种细胞角蛋白的表达 和分布有所不同。结论 有选择地检测一组CK的联合表达，有助于各 种皮肤上皮组织的识别。 【关键词】 细胞角蛋白;皮肤;免疫组织化学 【Abstract】 Objective To observe immunohistochemical expression of seven cytokeratins on skin and to assess its diagnostic value.Methods Immunohistochemical markers， including CK7(K72.2)，CK8(C-51)，CK10(DE-K10)，CK14(LL002)， CK17(E3)， CK18(DC10)and CK19(KS19.1) were used by S-P immunohistochemical staining methods. The expression of cytokeratins was observed.Results The expressions and distributed patterns of 7 cytokeratins were differentiated on normal skin epithelial tissues of 20 cases.Conclusion Comprehensive analysis of a selective cytokeratin group， can assist distinguished of various skin epithelial tissues. 【Key words】 cytokeratins;skin;immunohistochemistry 哺乳动物的细胞质含有复杂的细胞骨架蛋白，包括微丝、微管和中 间丝。中间丝有细胞角蛋白?、细胞角蛋白?、结蛋白、波形蛋白、 胶质纤维酸性蛋白、神经纤维等6种。上皮细胞胞质中的骨架蛋白除 微丝(肌动蛋白)、微管蛋白外，主要是细胞角蛋白(cytokeratins， CK)。CK是上皮细胞的特征性标记物，由生物化学和免疫学方法根据 CK分子量的不同，分为20种，是一个庞大复杂的家族。不同类型的上皮细胞和同类型上皮细胞的不同分化阶段，表达不同的CK。当上皮组织发生瘤变甚至癌变后，仍然表达与正常组织基本相同的CK类型。皮肤的上皮性肿瘤，包括表皮和皮肤附属器肿瘤，类型繁多，组织形态复杂，有时鉴别诊断十分困难。研究不同CK在正常皮肤组织的表达，可能对表皮和皮肤附属器肿瘤的诊断具有一定价值。 1 材料与方法 1.1 材料 所有正常皮肤的研究标本均来自胜利油田中心医院2003,2004年收检的病例，包括5例乳腺癌根治手术切除标本中远离肿瘤的胸部皮肤，5例直肠癌手术切除标本远离肿瘤的肛旁皮肤和10例不同部位的色素痣切除标本的切缘皮肤。 1.2 试剂 第一抗体为7种不同的细胞角蛋白单克隆抗体，包括CK7(K72.2)、CK8(C-51)、 CK10(DE-K10)、CK14(LL002)、CK17(E3)、CK18(DC10)、CK19(KS19.1)，均为工作液;免疫组织化学检测系统采用过氧化物酶标记的即用型UltraSensitiveTM S-P试剂盒;显色试剂为高敏感二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒。以上试剂购自福州迈新生物技术开发有限公司。 1.3 方法 复查胜利油田中心医院2001,2004年收检的所有皮肤上皮性肿瘤病例的存档切片，从中选取所有皮肤附属器肿瘤及部分皮肤癌病例为研究对象。对存档蜡块重新切片，进行免疫组织化学染色。抗原修复，CK7标记皮肤附属器肿瘤采用胰酶消化法，胰酶浓缩液和稀释液1?3混匀，滴片后37?孵育15min;CK8、CK10、CK14、CK17、CK18、CK19等6种抗体染色标记的切片，采用柠檬酸缓冲液高温高压法，高压锅内置pH 6.0的0.01mmol/L柠檬酸缓冲液，加热至沸腾，放入切片，密闭高压锅继续加热，喷汽后2min停止。S-P法免疫组化标记，DAB显色。以PBS代替一抗做空白对照。 1.4 结果判定 所有免疫组化染色结果在光镜下进行观察和评判。7种CK阳性表达位置均为细胞质。参照许良中等,1,的方法，综合考虑切片中阳性细胞占所观察同类细胞数的百分比和阳性细胞着色强度两项，半定量判断结果。根据显色程度判断阳性强度，分为4级，无着色为阴性，记0分;浅黄色为弱阳性，记1分;棕黄色为中度阳性，记2分;棕褐色为强阳性，记3分。根据阳性细胞数量在观察的同类细胞中所占比例，分为4类，即阳性细胞?2%为“个别”，记0分;阳性细胞数3%,20%为“少量”，记1分;21%,60%为“中量”，记2分;60%为“大量”，记3分。综合评价值由两类记分分值的乘积表示，0,3分为(-)，4分为(+)，6分为(++)，9分为(+++)。 1.5 统计学方法 计数资料使用PSMS ,.,医学统计学软件包进行处理，进行χ2检验，数值较小者使用确切概率法检验，P0.05为有显着性意义的标准。 2 结果 20例正常成人皮肤组织标本中不同CK的表达和分布见表1。不同CK在皮肤组织中的表达强度及阳性细胞数量的综合半定量评价见表2。 表1 7种CK在20例正常皮肤组织中的表达情况(阳性例数/可观察例数) 注:与表皮其他成分比较，*P0.01;与外毛根鞘、皮脂腺细胞比较，**P0.05;与表皮及汗腺上皮细胞比较，***P0.05 表2 7种CK在正常皮肤组织中的不同表达(半定量判断)