医药学-高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量

医药学-高效液相色谱法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量 作者:张淑萍，田嘉铭，白雪梅，李旺 【摘要】 目的利用高效液相色谱(HPLC)法测定炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量。方 法色谱柱为YWG-C18(250 mm×4.6 mm，10 μm)，以乙腈-5%醋酸水(65?35)为流动相，检 测波长为250 nm，流速为1.0 ml?min-1。结果甘草次酸对照品浓度在9.375,300 mg?ml-1 范围内线性关系良好，回归方程:A=31.545C-82.030(n=6, r=0.999 1)，炙甘草加样回收率 为99.81%;炙甘草汤为100.28%。结论HPLC法准确可靠，可为控制炙甘草和炙甘草汤质量提 供检测依据。 【关键词】 炙甘草;炙甘草汤;甘草次酸;高效液相色谱法 Abstract:ObjectiveTo determine the glycyrrhetinic contents in Zhi Gancao root and Zhi Gancao Decoction by HPLC. MethodsYWG-C18 column (250 mm×4.6 mm，10 μm) was used with Acetonitrile and 5% Acetic acid-water as mobile phase. The detection wavelength was 250 nm, and the flow rate was 1.0 ml?min-1. Results The linear relationship was good in the range of 9.375,300 mg?ml-1. The regression equation was:A=31.545C-82.030(n=6,r=0.999 1), the average recovery rate of Zhi Gancai and Zhi Gancao decoction were 99.81% and 100.28% respectively. Conclusion HPLC method is accurate and valuable for the quality control of Zhi Gancao and Zhi Gancao decoction. Key words:Zhi Gancao; Zhi Gancao decoction; Glycyrrhetinic acid; HPLC 炙甘草汤出自汉代张仲景的《伤寒论》，为治疗“心动悸、脉结代”的古代名方，由炙甘 草、生姜、桂枝、人参、生地黄、阿胶、麦门冬、麻子仁、大枣组成。近年来，大量的实验 研究证明，炙甘草汤确有抗心律失常的作用，对各种心脏疾病所致的心律失常均有较好的疗 效，且药理作用广泛而持久，极具开发价值,1,。炙甘草为炙甘草汤的君药，甘草次酸为甘 草提取物的有效成分之一。目前文献报道多为测定甘草酸的含量，而测定甘草次酸的含量的 少见报道,2,。为了探讨中药主要单体在中药配伍中的变化规律，实验采用HPLC法对炙 甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量进行了测定，为炙甘草汤的复方制剂研究提供一定的实验 依据。 1 仪器与试药 1.1 仪器 高效液相色谱仪(HP1100，美国Agilent。包括在线脱气机，四元泵，柱温箱，紫外检 测器，3D化学工作站)，A/D电子分析天平(1/10万，日本)，756紫外分光光度仪(上海分 析仪器总厂)，超声波清洗器(KQ-500B，江苏省昆山市超声波仪器有限公司)。 1.2 试药 甘草次酸对照品(中国药品生物制品检定所)，甲醇(色谱纯，美国)，乙腈(色谱纯， 天津科密欧)，蒸馏水为本室自制，其他试剂均为分析纯。方剂中九味中药均购自河北北方学 院中医门诊部，并按照《中国药典》(2000年版)各单味药进行检定。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱YWG-C18(250 mm×4.6 mm，10 μm)，流动相为乙腈?5%的醋酸 水=65?35;流速:1ml?min-1;检测波长:250 nm;柱温:25?;进样量:20 μl。 2.2 对照品溶液的制备精密秤取一定量的甘草次酸对照品，置5 ml容量瓶中，加流动 相溶液稀释至刻度摇匀，配成1 mg/ml甘草次酸对照品溶液备用。 2.3 供试品溶液的制备样品?为炙甘草汤，按传统工艺煎煮两次，合并煎煮液浓缩成 0.1 g/ml(含炙甘草)的溶液;样品?为炙甘草单味药材按上述方法制成0.5 g/ml(含炙甘 草)的溶液。精密吸取样品?、?各2 ml，分别加入6 ml甲醇进行醇沉，离心5000 r/min 5 min，上清液过0.45 μm滤膜备用。 2.4 阴性对照实验按炙甘草汤处方比例制成缺炙甘草的阴性对照品，依照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。 2.5 线性关系观察精密吸取上述甘草次酸对照品溶液18.75，37.5，75，150，300，600 μl分别置2 ml容量瓶中，加流动相溶液稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项分别进样20 μl进行测定。以甘草次酸含量(C)为纵坐标，峰面积(A)为横坐标，得线性回归方程:A=31.545C-82.030,r=0.999 1(n=6)，结果明甘草次酸含量在9.375,300 mg?ml-1范围内，本法线性关系良好。 2.6 精密度实验精密吸取上述对照品溶液，按“2.1”项重复进样6次，峰面积的RSD为1.3%，表明本法精密度良好。 2.7 重复性考察取同一批药材样品，按样品制备方法平行制备5份，按“2.1”项进行测定。炙甘草中草次酸含量的RSD为1.98%，炙甘草汤中甘草次酸含量的RSD为2.03%，表明重现性良好。 2.8 回收率实验精密秤取己知含量的炙甘草和炙甘草汤方药材粉末适量，分别定量加入甘草次酸对照品，按照供试品溶液的制备方法操作，按“2.1”项进行测定，结果见表1。表1 加样回收率实验结果(略) 2.9 样品测定精密吸取供试品溶液稀释至合适浓度，按“2.1”项进行测定，代入回归方程，计算炙甘草和炙甘草中甘草次酸的含量，结果见表2，色谱图见图1。表2 炙甘草和炙甘草汤中甘草次酸的含量(略) 3 讨论 3.1 流动相的选择实验选用了不同的流动相比例，结果表明在现用流动相比例下甘草次酸出峰时间适中，分离度最好。 3.2 波长的选择用756MC分光光度仪对炙甘草和炙甘草汤进行全波长扫描，结果显示在250 nm处均有较高的吸收峰。 炙甘草汤中甘草次酸的含量高于炙甘草，分析其原因，可能是复方中的其他成分对目标成分有增溶作用，或复方中的其它药材也含有目标成分，结果有待于进一步深入研究。 【参考文献】 ,1,郭春雨，宋 威，刘 芳，等.炙甘草汤抗心律失常的活性成分及药理研究概况,J,.长春中医学院学报，2001，17(2):63. ,2,惠寿年，董阿玲.国内对甘草化学成分的研究进展,J,.中草药，1999，30(4):245.