鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响

鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响 鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)对小鼠单核吞噬 细胞吞噬功能的影响 第21卷第5期 2005年10月 广东药学院学报 JOURNALOFGUANGD0NGCOLLEGEOFPHARMACY Vo1.21No.5 0ct.2005 鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响 黄清松,邹燕,林元藻,付柏绿 (1.广东药学院基础学院,广东广州510240;2.广州新海医院,广东广州510300;3.深圳市宝安区中医院, 广东深圳518133) 摘要:目的观察鸡蛋卵黄免疫球蛋白IgY对小鼠单核吞噬细胞吞噬功能的影响.方法用鸡卵黄免疫球蛋白IgY经口灌胃,观察小鼠 单核吞噬细胞碳粒廓清率和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬能力.结果鸡卵黄免疫球蛋白IgY具有提高小鼠单核吞噬细胞 碳粒廓清率及增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬能力.结论鸡卵黄免疫球蛋白IgY能提高小鼠单核吞噬细胞吞噬功能,具 有增强小鼠免疫功能的作用. 关键词:鸡卵黄免疫球蛋白;吞噬细胞;免疫功能;调节作用 0585—02 中图分类号:Q512.2文献标识码:A文章编号:1006—8783(2005)05—小鼠肝,脾血管内固定的吞噬细胞能吞噬碳粒,如 静脉注入碳粒,吞噬细胞可将碳粒从血流中除去,从定 量静脉注入墨汁起计时,问隔一定时间取静脉血,测定 血中碳粒浓度.根据血流中碳粒被廓清速度,可明 单核吞噬细胞的功能….巨噬细胞是一类参与免疫反 应的细胞,在调节淋巴细胞和免疫应答上起着重要作 用.当外来生物大分子或有害异物进入机体时,巨噬 细胞就会向异物存在处集结,进行吞噬活动,吞噬后形 成吞噬泡,在细胞内与初级溶酶体融合,将吞噬物消化 分解,发挥细胞免疫作用.根据碳粒的廓清率及吞 噬百分率反映单核吞噬细胞吞噬能力的变化,从而可 以反映免疫功能的增强与否.本实验通过用鸡卵黄免 疫球蛋白IgY灌胃,测定小鼠单核吞噬细胞碳粒廓清 率和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率,方 法和结果如下. 1材料 1.1动物 健康昆明种小鼠40只(由广东省实验动物中心提 供),体质量(20?2)g,雌雄各半. 1.2试药 印度墨汁(北京中西化工厂生产),用生理盐水稀 释5倍(实验临用前配制),使用时反复摇匀,使全部碳 粒均匀散于液体中.0.1%碳酸钠溶液(临用前配制). 1.3仪器 微量取血器(烟台黎明医用器材厂);721型分光 光度计(上海光谱仪器厂);PAl104型电子天平(上海 天平仪器厂);秒表;Nikon光学显微镜. 1.40.3%台盼蓝淀粉肉汤 牛肉膏0.3g,蛋白胨1g,NaC10.5g,台盼蓝0.3 g,可溶性淀粉6.0g,加蒸馏水至100mL,高压灭菌,置 基金项目:广东省医学科研基金立项课题(2005332) 作者简介:黄清松(1967一),男,大学本科,实验师,主要从事 细胞生物学与分子生物学研究. 冰箱保存备用. 1.5鸡红细胞悬液 用肝素抗凝从鸡翼取静脉血置于Alserver保存液 中,用PBS液调整鸡红细胞数为5,6×10个/mL,置 冰箱保存备用. 1.6鸡卵黄免疫球蛋白(IgY):本室研制,质量浓度 10mg/mL. 2方法 2.1碳粒廓清试验 2)g的健康昆明小鼠10只,雌 取体质量约(20? 雄各半,随机分成两组,第一组为对照组,每只小鼠经 口灌胃灭菌生理盐水1mL;第二组为实验组,每只小 鼠灌胃鸡卵黄免疫球蛋白IgY1mL,连续7d.第8 天,2组小鼠均尾静脉注射印度墨汁(按1:5稀释),剂 量0.2mIM20g体重,立即计时.注射后1min,10min 用微量取血器分别从眼眶内眦静脉丛准确取血20 L.将取得的血液加到2mL的0.1%碳酸钠溶液中 (盛于比色管中).用721型分光光度计,在650nm波 长处测定光密度(OD)值,取0.1%碳酸钠溶液校正零 点.取血完毕,用颈椎脱臼法处死小鼠.剖开小鼠腹 腔,取其肝脏,脾脏,用滤纸吸干脏器血污,称重,按下 式计算廓清指数K和吞噬指数: 廓清指数K=(1gOD1一lgOD2)/(t一t) 吞噬指数0:3?(W:体重,IF/肝重+脾重) W. 所有数据用?s表示,各组间差异显着性用t检 验,P<0.05表示差异有显着性. 2.2鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)对小鼠巨噬细胞吞噬鸡 红细胞功能的影响. 取体质量约(20?2)g的健康昆明小鼠10只,雌 雄各半,随机分成两组,第一组为正常对照组,给予正 常饲料和饮水,连续7d;第二组为实验组,给小鼠经口 灌胃鸡卵黄免疫球蛋白IgY1mL,连续7d.第8天后 二组均给予正常饲料和饮水,且给小鼠腹腔注射 585 广东药学院学报,2005,21(5) 0.3%台盼蓝淀粉肉汤1mL,每天1次,连续2d,第10 天,2组小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液1mL,注射后轻揉 小鼠腹部,使鸡红细胞分散均匀.25rain后,用颈椎脱 臼法处死小鼠.剖开小鼠腹腔,用不带针头的注射器 吸取腹腔液,进行涂片,自然凉干后,用甲醇固定20 min,用吉姆萨染液染色15rain,晾干后在高倍镜下观 察计数.结果见表2. 3结果 3.1碳粒廓清试验 碳粒廓清试验结果见表1.从表1可见,IgY组与 正常对照组比较,其廓清指数差异有显着性. 3.2鸡卵黄免疫球蛋白IgY对小鼠巨噬细胞吞噬鸡 红细胞功能的影响. 鸡卵黄免疫球蛋白IgY对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红 细胞功能结果见表2.从表2可见,IgY组与正常对照 组比较,其吞噬指数差异有显着性. 表1鸡卵黄免疫球蛋白IgY对小鼠单核吞噬细胞碳粒廓清试 验的影响 Tab.1InfluenceofIgYonCarbonExpurgatoryFunctionin mice(?S.n=10) 组别 取血时间及对应吸收度廓清指数吞噬指数 正常对照组0.67?O.080.34?O.030.03?O.035.39?O.23 lgY组0.38?o.06o.09?o.01o.08?o.356.46兰 与对照组比较:P<0.05,一P<0.叭 表2鸡卵黄免疫球蛋白IgY对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响 Tab.2InfluenceofIgYonphagocyticindexinmice(?S,n=10) 与对照组比较:P<0.叭 4讨论 单核巨噬细胞系统被激活,需要持续每天给药1 至数次,连续数日.单核巨噬细胞系统一旦被激活,常 伴有肝,脾等巨噬细胞的增生,因而被激活的巨噬细胞 可持续数日.在廓清试验中,印度墨汁的质量是实验 结果准确的基础.单核巨噬细胞对于被吞噬的颗粒异 物的大小有严格的要求.颗粒过大则不被吞噬,过小 则被其他吞噬细胞(如小吞噬细胞)所吞噬.IgY抗体 安全环保,来源丰富,造价低,抗体含量高,热稳定性 好,又能增强免疫力,如应用于食品添加剂,具有广 阔的前景. 参考文献: [1]沈玉清.免疫学与免疫检验学[M].北京:中国医药科技出版 社.1989.138. [2]黄清松.HBV—STF对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能的影响 [J].广东药学院学报,1997,13(2):129. [3]陈奇,邓文龙,张世玮.中药药理研究方法[M].北京:人民卫 生出版社.2000.757. [4]林元藻,黄清松,李春梅,等.抗加特纳杆菌卵黄免疫球蛋白 (IgY)的研究[J].广东药学院学报,2004,20(5):517. (收稿日期:2005—06—03;修回日期:2005—07—05) (上接第584页) 说明本方法可有效杀伤肿瘤细胞.MTT法检测淋巴细 胞的杀伤活性,只有活细胞线粒体脱氢酶可以还原 MTF为蓝色物质,作用后在酶标仪上检测630nm的吸 收值能表示存活细胞的量,结果发现VB15转染组与 对照组相比淋巴细胞杀伤活性差异有显着性(见表1, P<0.05). 由于TCR与肿瘤的免疫监控,肿瘤抗原的识别,T 淋巴细胞的激活,细胞毒T淋巴细胞的功能,信号传导 以至肿瘤细胞凋亡有着密切的关系,通过T细胞对不 同抗原的基因优势取用,用特异性TCRVI5基因转染修 饰无能的或无应答的T细胞,应用TCR作为肿瘤的基 因治疗靶向性好的特点,进行TCR识别和杀伤癌细胞 的体内外生物学作用的研究,对于该方法临床应用于 肿瘤治疗有重要的意义,具有良好的研究价值和应用 前景. 586 参考文献: [1j陈慰峰,金伯泉.医学免疫学[M].北京:人民卫生出版社, 2004.146. [2]黄树林,肖兰凤.活化PBL作用肝癌细胞的表型分析与TCR VB基因亚家族的优势取用[J].世界华人消化杂志,1998,6 (12):1033. [3]TimothyM.Clay,MaryC.Custer,JessicaSachs,eta1.Effi- cienttransferofatumorantigen-reactiveTCRtohumanpefiph— eralbloodlymphocytesconfersanti-tumorreactivity[J].The JournalofImmunology,1999,163:507. [4]LazouraE,ApostolopoulosV.RationalPeptide-basedvaccine designforcancerimmunothempeuticapplications[J].CurrMed Chem,2005,12(6):629. [51ColeDJ.Characterizationofthefunctionalspecificityofacloned T.cellreceptorheterodimerrecognizingtheMART-1melanoma antigen[J].CancerRes,1995,55:748. (收稿日期:2005—03—31)