HPLC测定壮药剑叶龙血树中白藜芦醇和7,4’-二羟基黄酮的含量

HPLC测定壮药剑叶龙血树中白藜芦醇和7,4’-二羟基黄酮的含量 HPLC测定壮药剑叶龙血树中白藜芦醇和7,4’-二羟基 黄酮的含量 年 月第 卷第 期 中国中医药信息杂志测定壮药剑叶龙血树中白藜芦醇 和 , ’一二羟基黄酮的含量 闵建国 ,周艳林 吕高荣 ,尹文清 ,刘华钢。,邹节明 .广西师范大学药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室,广西 桂林 ; .桂林三金药业股份有限公司,广西 桂林 ;.广西医科大学药学院,广西 南宁 摘要:目的 建立一种同步测定剑叶龙血树中白藜芦醇和 ,二羟基黄酮含量的方法。方法 以反相键合 硅胶为填料,甲醇一乙腈一.%磷酸 : : 为流动相,检测波长为 ,柱温 ?。结果 白藜芦醇和, ’一 二羟基黄酮分别在. ?. , . 和. ?., . 范围内呈良好的线性关系, 平均加样回收率分别为 .%、 ./, 分别为. %、 . %。结论 本方法简便、灵敏、准确度高,可用于 建立剑叶龙血树质量控制标准。 关键词:剑叶龙血树;白藜芦醇; , , 二羟基黄酮;高效液相色谱法: . / ..? .. .中图分类号:. 文献标识码: 文章编 号: ? ? ? ,?’ , ? ’。,. ,?,. 。,. , &, ; ... ... ., : , ’..?一 . % : :. ? . , .? . .. 一 .. , . %. %,. % . %, ., ,. .. . . . ;; , ’ ; 剑叶龙血树为百合科植物剑叶龙血树 为全面评价其质量提供依据。. . .的含脂木材,收载于 《广 仪器与试药 西壮族自治区壮药质量标准》第一卷,壮药名为榧勒垄,具有活 高效液相色谱仪, 二极管列阵检测器美 血散瘀、定痛止血、敛疮生肌等功效,用于跌打损伤、瘀血作 国 公司 ;超声波清洗仪上海 公司 ; 痛、妇女气血凝滞、外伤出血和脓疮久不收口?。现代研究 电子分析天平瑞士梅特勒 。 明其主要含有黄酮类、二苯乙烯类、甾醇类、皂苷类等化合物, 剑叶龙血树均采自广西崇左,经作者邹节明鉴定为百合科 具有抗菌、抗炎、抗氧化活性,镇痛、止血、活血等药理作用 。 植物剑叶龙血树 . .. 目前,剑叶龙血树用作提取龙血竭的原料,其质量控制多集中 ;白藜芦醇对照品批号? 、, 一二羟基黄 在测定二氢查耳酮的代表性成分龙血素 、 ,尚未见测定其中 酮对照品批号 ? 均由中国药品生物制品检定 黄酮类、二苯乙烯类代表性成分的研究报道。。本研究建立同 所提供。 步测定剑叶龙血树中白藜芦醇和, 二羟基黄酮含量的方法, 方法与结果 . 色谱条件 基金项目:广西科学研究与技术开发桂科攻 , 色谱柱为 . 【【,,流动相 ? ;广西医药产业人才小高地项目 为甲醇一乙腈一 .%磷酸 : : ,流速. / ,检测波 通讯作者:尹文清,:, :长 ,柱温 ?。在上述色谱条件下,供试品中目标峰分..离较好,白藜芦醇和 , 二羟基黄酮对应的保留时间分别约. . . 为 .和 .。色谱图见图 。 表 白藜芦醇和,二羟基黄酮加样回收率试验结果? 厶 注: .混合对照品: .剑叶龙血树药材:.白藜芦醇:. , 二羟基黄酮 图 剑叶龙血树图 . 对照品溶液的制备 精密称取 ?下减压干燥恒重的白藜芦醇、 , 二羟基 黄酮对照品适量,置量瓶中,加甲醇超声溶解,并稀释至 刻度,作为对照品储备溶液浓度分别为 . 、 ./。 分别吸取白藜芦醇、, 二羟基黄酮的储备液各 ,移至 . 样品测定量瓶中,加甲醇稀释至刻度,作为混合对照品溶液。 取不同批次的剑叶龙血树粉末过 号筛约 . ,各. 供试品溶液的制备 份,精密称定,按“ . ”项下方法制备供试品溶液,分别测定其 精密称取剑叶龙血树粉末过 号筛 .,置具塞锥形瓶 中白藜芦醇和, 二羟基黄酮的含量,结果见表 。 中,准确加入甲醇 ,精密称重,超声处理功率 ,频率 表 剑叶龙血树中自藜芦醇和 . 二羟基黄酮含量测定结果%,放冷,再称定质量,加甲醇补足减失质量,摇匀, 滤过,取续滤液作为供试品溶液。 . 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液 、 、 、 、进样测定, 以峰面积为横坐标,进样量为纵坐标,计算得回归方程。白藜芦 醇:, .× 。.×, . ; , 二羟 基黄酮:, . ×。 一 . ×。, . 。结果 表明,白藜芦醇、 , 二羟基黄酮分别在 . ~. 、 讨论 . ~ . 范围内与峰面积呈良好的线性关系。 本试验建立了剑叶龙血树中白藜芦醇和 , 二羟基黄酮的 . 精密度试验 含量测定方法, 个成分在甲醇中具有良好溶解性,故选择甲醇作 精密吸取混合对照品溶液 ,在上述色谱条件连续进 为提取溶剂,试验对比了回流和超声提取的效果,结果 种方法效 样测定 次,测得白黎芦醇、 , 二羟基黄酮的峰面积 分 果相当,故选择相对简便的超声提取,考察了 、 、提 别为 . %、 .%,测试结果表明精密度良好。 取时间下测定值,结果表明 基本提取完全。 . 稳定性试验 本试验对比了甲醇一冰醋酸、乙腈 甲酸、乙腈一磷酸等不 取同一份供试品溶液,室温下放置,分别于 、 、 、 、 同流动相洗脱,结果发现二元溶剂系统下,白黎芦醇与, 二 、 测定,测定白藜芦醇、 , 二羟基黄酮的峰面积,结 羟基黄酮难以实现有效分离,故最终选择以甲醇 乙腈一磷酸溶 果 值分别为 . %、 . %,表明供试品溶液在内具 液三元溶剂系统洗脱,二者分离良好,且其他峰无干扰。 白藜芦醇和 , 二羟基黄酮的最大吸收波长分别为 、 有良好的稳定性。 . 重复性试验 ,对比不同波长下的测定结果,其影响不大,故选择 取同一批剑叶龙血树粉未 批 份,按“ . ”项 作为检测波长。 下制备供试品溶液,进样分析,测得白藜芦醇的平均含量为 剑叶龙血树树脂的形成是在受外来真菌浸染后而产生的 植物防卫素,药材采收时,割取含脂部分的木材,不同批次样品 . %,.%; , 二羟基黄酮的平均含量为 .%, . %。表明该方法的重复性良好。 测定结果表明含量差异较大,试验对比测定了不含脂的木材部 位与纯树脂部位两成分的含量,结果发现,不含脂的木材部位 . 加样回收率试验 基本检测不出白黎芦醇和 , 二羟基黄酮,故选择这 个代 准确称取已知含量的剑叶龙血树粉未 . ,共 份,置于 表性成分进行质量控制,既能有效地控制其中具有主要活性的 具塞锥形瓶中,分别精密加入白藜芦醇、 , 二羟基黄酮对照 品储备溶液各 ,按 “. ”项下方法制备供试品溶液,测定 黄酮类及二苯乙烯类成分的含量“,也可有效地指导药材的采 收炮制,避免混入太多不含脂的木材。 并计算回收率,结果见表 。