高效液相色谱法测定干粉吸入剂中赖脯胰岛素含量

高效液相色谱法测定干粉吸入剂中赖脯胰岛素含量 高效液相色谱法测定干粉吸入剂中赖脯胰 岛素含量 高效液相色谱法测定干粉吸入剂中赖脯胰岛素含量 顾邱岚,王坚成,张强(北京大学药学院药剂系北京100083) 摘要:目的建立测定干粉吸入剂中赖脯胰岛素的高效液相色谱分析方法.方法采用c.硅烷键合硅胶为填料的色谱柱 (46mmx250mm,5m),流动相为0.1mol?L磷酸二氢钠_o.05mol?L硫酸钠一乙睛(pH3.0)(35:35:30),流速为l ml?min,,检测波长为214nm.结果赖脯胰岛素在质量浓度为05—100mg?I内呈良好的线性关系(r=0.9999), 低,中,高质量浓度的回收率分别为99,l%,100l%,99.7%,RSD分别为1.96%,0.98%.0.25%.结论该方法灵敏,操作 简便,测定结果准确可靠. 关键词:高效液相色谱法;赖脯胰岛素 中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1001—2494(2007)20—1577—03 DeterminationofInsulinLisproinLisproDryPowderInhalationbyHPLC GUQiu—lan,WANGJian—cheng,ZHANGQiang(SchoolofPharmaceuti calSciences,PekingUniversity,Belting100083,Chi ha) ABSTRACT:OBJECTIVET0establishaHPLCmethodfordetermininginsulinlisproininsulinlispropowderforinhalation. Cl8colum METHODSAseparationwasperformedonaphenomenexODS— n(4.6mmx250mm,5m),andmobilephasewas0.1 mol?L, NaH2PO4—0.05mol?INa2SO4-acetonitrile(pH3.0)(35:35:30),Theflowratewasl,0mL?min,.Thedetective wavelengthwas214nmRESULTSThecalibrationcurvewaslinearintheconcentrationrangeof0.5—100mg?L(r=0.9999). Thelow,middleandhighaveragerecoverywas99.i%,100.1%,99.7%andRSDswere1.96%,098%,0.25%,respectively CoNCLUSIoNThismethodwassensitive.convenient.accurateandreliablewithgoodprecision. KEYWoRDS:HPLC:lispro;nsulin 赖脯胰岛素(insulinlispro,IL)为人胰岛素(hu一 1TIaBinsulin,HI)分子结构中B链C一末端28位上的 脯氨酸与29位上的赖氨酸相互换位产物.这一氨 基酸序列的变换造成其不易形成多聚体形式,使其 体内容易吸收,显示出其他胰岛素制剂不可比拟的 速效作用j.该药物在临床上用于快速降血糖,其 制剂的商品名为优泌乐(Humalog),剂型为注射 剂,我国已进口. 干粉吸入剂(drypowderinhaler,DPI)是将一 种或多种药物制成一定范围的微小颗粒,单独或与 辅料混合后,经特殊的给药装置使药物以粉雾状进 入呼吸道和肺部,发挥局部或全身作用.美国食品 与药物管理局(FDA)在2006年1月批准了第1种 吸入型胰岛素(Exubera)上市,用于治疗患1型和2 型糖尿病的成年患者.笔者参照Exubera_3J,经处方 工艺筛选,制备了赖脯胰岛素肺部干粉吸入剂.目 前,国内还未见高效液相色谱法测定赖脯胰岛素的 相关报道.为了有效控制该药的质量,笔者参照胰 岛素含量测定的方法],建立了测定该药物含量的 高效液相色谱分析法,并对测定方法进行了相关的 方法学考察. 1仪器与试药 1.1仪器 岛津LC—IOA型高效液相色谱仪,SPD一 10Avp型紫外检测器(Shimadzu公司),N2000色谱 工作站(浙大智达公司). 1.2试药 赖脯胰岛素原料(批号:050104)及对照品(批 号:0501)(北京甘李生物制药有限公司,纯度 99.5%).赖脯胰岛素干粉吸入剂(自制),无水硫 酸钠,磷酸二氢钠,盐酸,磷酸均为分析纯,乙腈为色 谱纯. 2方法与结果 2.1处方制备 按处方比例分别称取赖脯胰岛素原料药和辅 料,等量递加混匀,过100目筛得到混合物,将混合 作者简介:顾邱岚,女,硕士研究生通讯作者:王坚成,男,博士Tel:(010)82802683Fax:(010)82802791E—mail:wang—jc@bj— ma.edu.cn 中国药学杂志2007年10月第42卷第20期ChinPh0,7nJ.2007October.Z.42No.20 物用球磨机研磨,过200目筛装胶囊. 2.2最佳检测波长的确定 称取赖脯胰岛素对照品适量,用0.01tool?L 盐酸配成含赖脯胰岛素13.50011?mL的对照品 溶液,用紫外分光光度计在200,400nm区域扫描, 以0.01tool?L盐酸为空白对照,赖脯胰岛素在 214nm处有最大吸收. 2.3色谱条件 色谱柱:PhenomenexC1R柱(4.6mm×250mm,5 Ixm),流动相:0.1tool?L磷酸二氢钠’().05tool? L硫酸钠一乙睛(35:35:30),以磷酸调节pH为 3.0,柱温:35?流速:1.0mL?min..,紫外检测波 长:214nm,进样体积:20IxL. 2.4系统适用性考察 在”2.3”测定条件下,取质量浓度为1Omg? L的赖脯胰岛素对照品溶液2OL进样,按照高效 液相色谱法(《中国药典))2oo5年版)系统适用性试 验方法,计算色谱柱的理论塔板数3607,分离度 3.4.色谱图见图1. 2.5标准曲线的绘制 取赖脯胰岛素对照品精密称定,以0.01tool? L盐酸配制成1g?L..的对照品储备液.将其以 流动相逐级稀释成质量浓度为0.5,1,5,20,50,100 mg?L的溶液.按”2.3”色谱条件测定,以质量浓 度(p)对峰面积(王,)做图得标准曲线:Y=22848p一 377.36,r:0.9999. 2.6精密度实验 精密称定赖脯胰岛素对照品,以流动相配制成 质量浓度分别为0.5,10,100mg?L..,按”3.2”测 定测得低,中,高3种质量浓度的日内RSD(凡=5) 分别为1.42%,0.40%和1.O%,日问RSD(凡=5) 分别为2.81%,1.02%和0.96%. 2.7最低检出限及最低定量限 取”2.6”项下低质量浓度溶液以流动相逐步稀 释,按S/N?3及S/N?10确定最低检出限为 0.01mg?L,,最低定量限为0.05mg?L一. 2.8空白辅料的影响 按处方比例制备不含赖脯胰岛素的辅料溶液, 依照”3.2”色谱条件进行测定,结果显示,辅料对测 定无影响.结果见图1C. 2.9回收率实验 按处方比例称取赖脯胰岛素原料药和辅料,用 流动相配成质量浓度为0.5,10,100mg?L的低, 中,高3种溶液,各质量浓度样品平行处理3份,进 ChinPharmJ.2007October,Vo1.42No.20 16AB1cIif1 ————,—L—————...\——,一——————, 1———————————一 iij?ijj?ij t/mint/mmt/min 图l样品色谱图 A一赖脯胰岛素对照品;B一赖脯胰岛素干粉吸入剂样品;C一辅料;1 一赖脯胰 岛素 Fig1Typicalchromatogramsofinsulinlispm A—standard;B—drypowdersamples;C—excipients;1,insulinlispro 样2OL,记录色谱图.根据峰面积计算各样品实 测质量浓度,并计算回收率.低,中,高3种质量浓 度样品得回收率分别为99.1%,100.1%,99.7%, RSD分别为1.96%,0.98%,0.25%.结果见1. 表1回收率测定结果 Tab1Resultsofrecovery 2.1O胶囊中赖脯胰岛素含量的测定 精密称取胶囊量的干粉制剂置100mL量瓶中, 用流动相定容,以”2.3”色谱条件进行测定,测定3 批次.结果见表2. 表2胶囊中赖脯胰岛素含量的测定结果.n=3 Tab2Determinationofinsulinlisprocontentsincapsules. n=3 3结论 参照胰岛素含量测定的高效液相色谱方法J, 通过调整流动相的pH及有机相和水相的比例来改 善赖脯胰岛素出峰时间和峰形.经实验研究,我们 确定0.1tool?L磷酸二氢钠_().05tool?L硫酸 钠.乙睛的比例35:35:30比较合适.将胰岛素和赖 脯胰岛素的混合溶液在该色谱条件下进样2OL, 发现色谱图中赖脯胰岛素出峰时间比胰岛素提前1 min.研究结果表明,在本实验建立的方法操作简 便,重现性好,结果准确. REFERENCES [1]BURGEMR,RASSAMAM,SCHADEDS.Lispminsulin:ben— efitsandlimitations[J].TrendsEndocrinolMetab,1998,9(8): 337—341 中国药学杂志2007年10月第42卷第20期 高效液相色谱法同时测定赤丹丸中6种有效成分的含量 赵铁,李玉灵,姜清华,徐英宏,菅凌燕(中国医科大学附属盛京医院药剂科,沈阳I10003) 摘要:目的建立高效液相色谱法测定赤丹丸中丹参素钠,黄芩苷,黄芩素,汉黄芩素,汉黄芩苷和丹参酮?A含量的方法. 方法AgilentZorbaxExtend—Cl8(4.6mm×250mm,5m)柱;流动相组成为A:甲醇,B:水(磷酸调pH3.0),C:乙腈,进行梯 度洗脱;流速1,0mL?min一;检测波长280nm.结果丹参素钠线性范围16.4,327.0mg?I’.,平均回收率为97.5%,RSD 为1.31%;黄芩苷线性范围15.8,316.0mg?L一,平均回收率为97.4%,RSD为1.02%;黄芩素线性范围10.3,206.0mg? L..,平均回收率为99.3%,RSD为0.68%;汉黄芩素线性范围12.6,251.0mg?L’.,平均回收率为100.2%,RSD为1.76%; 汉黄芩苷线性范围11.3—225.0mg?L,,平均回收率为99.4%,RSD为 2.6%;丹参酮?A线性范围5.04,100.7mg?L一, 平均回收率为97.8%,RSD为1.4%;结论本方法测定结果准确可靠, 可用于测定赤丹丸中6成分的含量. 关键词:赤丹丸;丹参素钠;黄芩苷;黄芩素;汉黄芩素;汉黄芩苷;丹参 酮?A;梯度洗脱 中图分类号:R917文献标识码:A文章编 号:1001—2494(2007)20—1579—03 SimultaneousDeterminationofSodiumSalvianicABaicalin,Baicalein,Wogonin,WogonosideandTanshi- none11AinChidanPillsbyHPLC ZHAOTie,LIYu—ling,JIANGQing—hua,XUYing—hong,JIANLing— yan(DepartmentofPharmacy,AffiliatedShengjing HospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang110OO4,China) ABSTRACT:OBJECTIVETodevelopaquantitativemethodforthedeterminationofsodiumsalvianicA,baicalin,baicalein,wogo— nin,wogonosideandtanshinone11AinChidanpillsbyHPIC,METHODSAcolumnofAgilentZorbaxExtend—Cl8(4.6mlTI×250 mm,5Ixm)wasused.Themobilephasecomposedofmethanol(A),wateradjustedtopH3.0withphosphoricacid(B)andacetoni— trile(Cwithgradientelution.Theflowratewas1.0mL?min—withUVdetecti onwavelengthat280nm.RESULTSThelinear rangeofsodiumsalvianicAwas16.4—327.0mg?L,.Thelinearrangeofbaicalinwas15.8,316.0mg?L,.Thelinearrangeof baicaleinwas10.3, 206.0mg?L,.Thelinearrangofwogoninwas12.6—251.0mg?L’..Thelinearrangeofwogonosidewas 11.3—225.0mg?L, andthelinearrangeoftanshinone11Awas5.04—100.7mg?L,.Theaveragerecoveryofsodiumsalvianic A,baicalin,baicalein,wogonin,wogonosideandtanshinone11Awere97.5% (RSD=1.31%),97.4%(RSD=1.02%),99.3% (RSD=0.68%),100.2%(RSD=1.76%),99.4%(RSD=2.6%)and97.8%(RS D=1.4%),respectively.CONCLUSION Themethodissensitive,rapidandaccurate. KEYWORDS:Chidanpills;sodiumsalvianicA;baicalin;baicalein;wogoni n;wogonoside;tanshinone11A;gradientelution 赤丹丸是本院生产的一种纯中药制剂,由赤芍, 丹参,黄芩等5味中药组成,具有清热解毒,祛瘀止 痛,化湿作用,用于妇科急慢性盆腔炎,附件炎等. 有关黄芩和丹参提取物中各种成分的含量测定方法 以前均有报道,为了更好地控制药品内在质 量,现对其中6种有效成分的含量进行测定. [2] [3] [4] [5] STECKELH,MUELLERBWInvitroevaluationofdrypowder inhalers1I:influenceofcartierparticlesizeandconcentrationon invitrodeposition[J]./ntJP ,1997,154(1):31I37. FDA.EXUBERA~(insulinhuman[rDNAorigin])InhalationPowder USPackageInsert. 021868161.Nf. 809. USPharmacopeia[S].23Edition,1995:807— Ch.P(2005)Vol1I(中国药版2005年版,二部)[s].2005: 623. [6] [7] YuDG,GAOQH,HUJD,eta1.Studyonthepre—treatment methodsofdeterminationofinsulininmicroemulsionsbyRP— HPLC[J].JChinaMedUniv(中国药科大学),2004,35 (4):334-337. zHANGX.ZHANGQ.Q1xR.Determinationofinsulinen— trappedinliposomebyHPLC[J]_ChinJModAppln(中国 现代应用药学杂志),2001,18(6):451-453. (收稿日期:2006—12-17) 基金项目:辽宁省自然基金项Et资助(20042189) 作者简介:赵铁,男,硕士Tel:(024)83956566E—mail:zhaotieaaa@yahoo.con.cn 中国药学杂志2007年10月第42卷第20期ChinP MJ.2007October.Vol,42No.20?1579?