为了正常的体验网站,请在浏览器设置里面开启Javascript功能!

【word】 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究

2017-12-30 14页 doc 35KB 28阅读

用户头像

is_594905

暂无简介

举报
【word】 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究【word】 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究 松扬保2009,35(3):66—69PlantProtection 南瓜叶枯病病原菌生物 杨克泽,徐秉良,梁巧兰,薛应钰,陈荣贤,梁志福 (1.肃农业大学草业学院,草业生态系统教育部重点实验室,中美草地畜牧业 可持续发展研究中心,兰州730070;2.甘肃武威金平果有限责任公司733000) 摘要本文对南瓜叶枯病病原菌瓜链格孢(Alternariacucumerina)进行了生物学特性研究,结果表明:温度,pH,光 照对其生长和产孢...
【word】 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究
【word】 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究 松扬保2009,35(3):66—69PlantProtection 南瓜叶枯病病原菌生物 杨克泽,徐秉良,梁巧兰,薛应钰,陈荣贤,梁志福 (1.肃农业大学草业学院,草业生态系统教育部重点实验室,中美草地畜牧业 可持续发展研究中心,兰州730070;2.甘肃武威金平果有限责任公司733000) 摘要本文对南瓜叶枯病病原菌瓜链格孢(Alternariacucumerina)进行了生物学特性研究,结果表明:温度,pH,光 照对其生长和产孢都有一定的影响.该病原菌菌丝生长,产孢和萌发的适宜温度为28?,pH为7时菌丝生长最 快,pH为8时最易产孢.25?下连续黑暗培养产孢最多.碳,氮源对菌丝生长和产孢量有一定的影响,碳源中甘 露醇组菌丝生长最快,山梨醇处理产孢量最多.氮源中牛肉浸膏最适宜菌丝生长和产孢,硫酸铵最差.该菌致死温 度为5O?. 关键词南瓜叶枯病;瓜链格孢;生物学特性 中图分类号:S436.429文献标识码:ADOI:10.3969/j.issn.0529—1542.2009.03.016 Studiesonbiologicalcharacteristicsofthepathogenofthepumpkinleafblight YangKeze,XuBingliang,LiangQiaolan,XueYingyu,ChenRongxianz,LiangZhifu (1.CollegeDPrataculture,GansuAgriculturalUniversity,KeyLaboratoryof GrasslandEcosystem,MinistryofEducation,SinoU.S.Centerfor GrazinglandEcosystemSustainability,Lanzhou730070,China; 2.WuweiJinpingguoCompanyCo.Ltd.,Lanzhou733000,China) AbstractThebiologicalcharacteristicsofthepathogenofthepumpkinleafblightwerestudied.Theresuitsshowed thattemperature,pHandlightaffectedthemycelialgrowthandsporulationofthefungus.Theoptimumgrowth temperaturewas28?:thesuitablepHwas8:thebesttemperatureforsporulationwas25?underdarkcondition. Bothcarbonandnitrogensourceshadaneffectonmycelialgrowthandsporulation.Thegrowthofmyceliawasthe fastestwithmannitol,andthenumberofsporulationwasthelargestwithsorbito1.Sodidthenitrogensources.Beef extractwasthemostsuitableforthegrowthofmyceliaandsporuiation,whileammoniumsulfatewasthepoorest. ThelethaltemperaturetOAlternariacucumerinawas50?. Keywordspumpkinleafblight~Alternariacucumerina;biologicalcharacteristics 据贾菊生,李新辉等报道_1],近年来,新疆瓜类 作物感染叶斑类病害日趋复杂,危害程度也与日俱 增,每逢7,8月间,瓜类作物因感染此类病害导致大 量叶片干焦,一些学者将此病命名为瓜类叶枯病. 经贾菊生等多年的病情观察和病原的研究鉴定,将 新疆瓜类作物上由链格孢菌侵染而形成的叶斑病分 为两个群组,一组是哈密瓜,西瓜被链格孢霉侵染后 形成的黑斑病类型,其病原被认为是瓜链格孢EA!一 ternariacucumerina(El1.etEv.)Elliott];另一 组是黄瓜被侵染后形成的褐斑病类型,被认为是由 南瓜链格孢(A.cucurbitaeLetendreetRoum) 引起. 近年来,在甘肃省武威市南瓜产区发生了严重 的叶枯病,南瓜栽培中后期,叶片出现较大面积的焦 枯和死亡,成为影响南瓜生产的关键性问题.为此, 作者经过初步比较鉴定,认为是由于感染瓜链格孢 菌[Alternariacucumerina(El1.etEv.)E11iott~ 而导致南瓜叶片出现了大面积的枯死.田间调查表 明,某些品种病叶率达100,给南瓜生产带来严重 损失.南瓜叶枯病主要危害叶片,发病初期病斑为 褐色小点,逐渐扩大呈深绿色圆形,直径2,5mm, 边缘呈水渍状,稍微隆起,病健部界限分明,具有明 收稿日期:2008—10—16修订日期:2008—10—20 基金项目:国家自然科学基金(30671267);甘肃省中青年基金(3XZ051一A25—015) *通讯作者Email;xubl@gsau.edu.cn 35卷第3期杨克泽等:南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究?67? 显的轮纹,后期导致叶片焦枯,死亡,脱落. 2001年,张派勇对温室甜瓜叶枯病的发生进行 了简单报道,认为甜瓜因感染瓜链格孢而引起叶枯 病,并提出了有效的防治[2].而关于南瓜叶枯 病的研究,在国内尚未见详细报道.为此,本文对南 瓜叶枯病生物学特性和营养条件等进行了研究,不 仅有利于进一步认识病原菌的本质,病害发生特点, 而且在其与土壤碳,氮等养分转化关系研究方面有 重要意义. 1材料与方法 1.1材料 南瓜叶枯病的标本采自甘肃省武威市金苹果公 司南瓜生产基地.对所采集的新鲜病叶用常规组织 分离法分离,切取5mm大小病健交界组织,用 0.1升汞溶液消毒3O,50S,后用灭菌水换洗4 次,置于PDA培养基中,放在28?生化培养箱中培 养48h.将培养后的菌种采用稀释纯化法进行单孢 分离和纯化,并保存在PDA斜面培养基上备用l3一. 1.2方法 1.2.1温度对瓜链格孢菌丝生长和产孢量的影响 1.2.1.1温度对瓜链格孢菌丝生长的影响 取培养7d的菌落,用打孔器沿菌落边缘打取 内径0.4cm菌饼移人PDA平板中央,每皿1块,分 别置于5,10,15,20,25,28,30,35,40?无光照保湿 培养7d,用十字交叉法每2d测量1次菌落的直 径,取其平均值并计算菌丝平均生长速度.每个处 理5个重复. 1.2.1.2温度对瓜链格孢产孢量的影向 从培养7d的瓜链格孢PDA平板,在距离菌落 中心1cm处取直径0.4cm的3个菌饼于5mI无 菌水中,加1滴吐温一8O激烈振荡使孢子脱落,取 50L孢子悬浮液用载玻片平板计数法在光学显微 镜下随机检查10个视野(40×10)的孢子数量并取 平均值. 1.2.2pH对瓜链格孢菌丝生长和产孢量的影响 用0.1mol/L的NaOH或HC1将PDA培养 基调节pH为5.0,6.0,7.0,8.0,9.0等5个梯度后 再灭菌,用内径为0.4cm的无菌打孔器沿菌落边缘 打取菌饼移人PDA平板中央,每皿1个,每个处理 5个重复.在室温下培养,按1.2.1中的方法测量 菌丝生长和产孢量. 1.2.3光照对菌丝生长和产孢量的影响L5 将已接种的PDA培养基分为5组,在25?条 件下培养24h后作如下处理:25?持续光照培养 96h(光照培养箱);25?持续黑暗培养96h;25? 黑暗12h与光照12h交替培养96h;紫外线照射 2h后于25?连续黑暗培养96h;紫外线照射2h 后于25?持续光照培养96h.每处理重复5次. 按1.2.1中的方法测量菌丝生长和产孢量. 1.2.4不同碳源对瓜链格孢菌丝生长和产孢量的 影响.: 试验所用的基本培养基为查彼(Czapek)培养基: 1L蒸馏水中含1gKHzPO4,0.5gMgSO~?7H2O, 0.01gFeSO4?7HeO,30g蔗糖,0.5gKC1,2g NaNO3.制平板时1L培养液中加入17g琼脂.分 别以相同质量的葡萄糖,麦芽糖,淀粉,乳糖,甘露醇 和山梨醇代替基本培养基中的蔗糖,配成不同碳源的 培养基,并以不加碳素的培养基为对照.沿菌落边缘 取直径为0.4cm菌饼接人平板中央,室温培养,每个 处理重复4次.7d后观察菌落形态和孢子形成情 况,并按1.2.1中的方法测量菌丝生长和产孢量. 1.2.5不同氮源对瓜链格孢菌丝生长和产孢量的 影响 分别以相同质量氮的甘氨酸,硫酸铵,硝酸铵, 氯化铵,DL-蛋氨酸,牛肉浸膏和尿素替代基本培养 基中的NAN().,配成不同氮源的培养基,并以不加 氮素,补加2g0.1mol/LNaC1的培养基为对照. 同1.2.1中的方法测量菌丝生长和产孢量. 1.2.6瓜链格孢菌致死温度测定 移取直径为0.4CFI’I的菌饼到无菌试管中,加入 2mL的无菌水,置于40,45,5O,55,6O,65,70?的 恒温水浴中加热10min,取出后立即在冰水中冷却 至室温.将处理后的菌饼接种到PDA平板上,7d 后观察其生长情况,每个处理5个重复. 1.2.7温度对瓜链格孢分生孢子萌发的影响 孢子萌发采用悬滴法[3,在发病的南瓜叶片上, 用南瓜叶片煎汁液经灭菌制成孢子悬浮液,采用凹 玻片悬滴法放在保湿培养皿内,分别置于5,15,20, 25,28,30,35,40?的恒温箱中,每个温度设2次重 复,24h后镜检,测定不同温度下分生孢子的萌 发率. 1.2.8不同营养液对瓜链格孢分生孢子萌发的影响 设置10南瓜叶片煎汁,10蔗糖液,1O葡 萄糖液,蒸馏水4个处理,以无菌水做对照,配制成 不同营养的孢子悬浮液,用悬滴法做孢子萌发试验, 每个处理2次重复,置于28?的恒温箱中,24h后 镜检孢子萌发率. ? 68?舡物锯2009 2结果与分析 2.1温度对瓜链格孢菌丝生长及产孢量的影响 在25~30?的温度范围内菌丝生长较好,其中 28?生长最快,与其他温度差异显着.产孢量以 28?最多,平均每个视野103.5个,瓜链格孢菌在 5?以下和4O?以上几乎不生长也不产孢(表1). 表1温度对瓜链格孢菌丝生长及产孢量的影响” 温度/?菌短牛长速率/cm?d孢了量/个?视野 0.089f 0.344e O.353e 0.550d 0.829b 0.883a 0.781C 0.336e 0.033f 1)同列不同小写字母表示0.05水平下差异显着性. 2.2pH和光照对瓜链格孢菌丝生长和产孢量的影响 该病原菌能适应较宽的pH范围,在pH为5, 9时,菌丝直径和产孢量较好,其中pH为7时菌丝 生长最快,pH为8时产孢量最多;pH8与pH9之 间,菌丝生长速率和产孢量差异都不显着;pH为8 时菌丝生长次之,而pH为5时菌丝生长速率最慢 产孢量最少,说明该菌在中性条件下生长快,但在偏 碱性条件下容易产孢;pH5,pH6和pH7之间产孢 量无明显差异,产孢量都较少(表2). 该菌在25?条件培养24h后进行不同光照处 理后菌丝生长和产孢量有一定差异.12h光暗交替 培养96h的菌丝生长速率最大,与其他4种条件形 成显着差异;紫外线照射2h后持续黑暗菌丝生长 速率最小.产孢量以持续黑暗培养96h最多,紫外 照射2h后持续黑暗96h次之,持续光照培养96h 产孢量最少(表2). 表2不同pH和光照条件下瓜链格孢菌丝生长速率及产孢量(25oC) pH生长速率/cm?d孢子量/个?视野光照条件生长速率/cm?d孢子量/ 个?视野1 50.91c26.4b持续光照1.O1b18.5c 60.97b27.8b持续黑暗1.O0b41.2a 71.11a21.4b12h光暗交替1.06a28.7b 80.99b53.9a紫外照射2h持续光照0.95C21.3d 90.97b53.6a紫外照射2h持续黑暗0.94c37.0a 1)同不I司小写字母表不0.05水半r差异显着性. 2.3碳源对瓜链格孢菌丝生长及产孢量的影响 与其他生物一样,碳和氮也是南瓜叶枯病病原 菌生长繁殖的必需元素之一.该病原菌在山梨醇, 甘露醇,淀粉,乳糖,葡萄糖,麦芽糖培养基上都能生 长,并且都与缺碳对照差异显着.最适碳源为山梨 醇,甘露醇产孢量最少但菌丝生长速率最大,该菌在 葡萄糖和蔗糖培养基上生长速率和产孢量比较接 近,在麦芽糖培养基上生长最慢.缺碳时菌丝几乎 不生长产孢量为0,说明碳源是病原菌生长的必需 元素(表3). 表3碳,氮源对瓜链格孢菌丝生长及产孢量的影响 碳源生长速率/cm?d孢子量/个?视野氮源生长速率/crn?d一1孢子量 /个?视野_- 甘露醇0.8Oa3.6e牛肉浸膏O.86a90.1a 山梨醇0.78a52.1a蛋氨酸0.65b16.7e 乳糖0.77ab17.3C甘氨酸0.56C24.1d 淀粉0.74b11.1d缺氮0.51d5.6f 葡萄糖0.69C30.5b硝酸钠0.49d36.4c 蔗糖0.64d26.3b硝酸铵0.42e24.6d 麦芽糖0.57e18.8c尿素0.41e43.7b 缺碳0.O0f0.0f硫酸铵0.38f15.0e 1)l司列不l司小写字母表不0.05水半差异显着性. 2.4氮源对瓜链格孢菌丝生长及产孢量的影响 7个供试氮源均能明显促进病原菌的生长, 在不同氮源的Czapek培养基平板上,病原菌的培 养性状差异较大.在牛肉浸膏培养基上菌丝生 长最快且产孢量最多,与其他氮源差异显着.硫 酸铵上的菌丝生长最慢,生长较差,产孢量也较 少.硝酸钠和甘氨酸的菌丝生长速率比较接近, 尿素和硝酸铵的菌丝生长速率几乎一样.缺氮 时菌丝生长较快但只是稀疏的气生菌丝,且几乎 不产孢(表3). ffedbaCef O7O82520O O29?9O 35卷第3期杨克泽等:南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究?69? 2.5致死温度 7d后,经过4O?和45?恒温水浴处理10min 后,菌丝块在PDA平板培养基上分别形成平均直径 为0.64cm和0.46cm的菌落,而经5O?恒温处理 lOrain后,在PDA培养基上未形成菌落,由此可 知,该病原菌的致死温度为50?,10rain. 2.6温度对孢子萌发的影响 采用凹玻片悬滴法对瓜链格孢分生孢子萌发测 定表明,在10~35?温度范围内该分生孢子都能萌 发,25~30?范围内萌发较好,28?孢子萌发率最 高,说明该孢子的最适温度为28?,在5?以下, 4O?以上不能萌发(图1). \ 替 辖 H’ 5lO152O2528303540 温度/? 图1温度对瓜链格孢分生孢子萌发的影响 2.7不同营养液对分生孢子萌发的影响 由图2看出:分生孢子以在1O的南瓜叶片煎 汁中萌发率最高,1O葡萄糖液和1O蔗糖液对孢 子的萌发具有一定促进作用,在蒸馏水中萌发率很 低,在无菌水中几乎不能萌发,说明分生孢子的萌发 需要一定的营养条件. 琴? 一.嘲.圉圉霹 不同营养液 图2不同营养液对瓜链格孢孢子萌发的影响 3结论与讨论 在甘肃武威地区,南瓜叶枯病病原菌瓜链格孢 生长和萌发的最适宜温度范围为25,30?,28? 最适宜产孢,5?基本不产孢.pH对该菌生长有一 定影响,pH6,8时生长旺盛,pH小于5或大于9 抑制其生长,最适pH为8.病原菌连续黑暗培养 96h产孢量最多;黑暗12h与光照12h交替培养 96h的菌丝生长最快;紫外照射2h后对菌丝生长 具有抑制作用,对产孢量的影响不显着;该病原菌能 够利用多种碳,氮源生长并产孢;氮源中牛肉浸膏具 有明显促进作用,牛肉浸膏产孢量最多,缺氮组最 少,具有明显差异;碳源中山梨醇产孢量最多,甘露 醇和缺碳最少,存在显着差异;研究还表明该病原菌 的致死温度为50?左右,分生孢子的萌发需要一定 的营养条件,在南瓜叶片煎汁中萌发率最高. 本文对南瓜叶枯病病原瓜链格孢生物学特性 研究结果与邹凤莲等对番红花链格孢菌生物学特 性研究结果l6一基本一致.瓜链格孢菌生长和产孢 最适宜温度为28?,而番红花链格孢菌为25?, 但对碳,氮源利用有些不同.从瓜链格孢菌丝生长 与温度的关系来看,该菌最适温度较高且适温范围 较宽,15,3O?范围内能够生长.对pH的适应 范围和对碳,氮源的需求也较宽,这表明该菌对环 境的适应性较强.因此,在进一步研究南瓜病害的 流行规律与流行分区时应予以重视.当培养基碳, 氮源变化时瓜链格孢的菌丝形态和色泽发生了明 显变化,这一特点有可能用于研制和开发适宜的鉴 别性培养基,进行病原菌的快速鉴定.本文仅对甘 肃武威地区南瓜叶枯病病原菌的生物学特性进行 了初步研究,自然界不同地理来源的同一种真菌不 同个体间生物学特性方面存在较大差异_8],因此, 今后有必要对不同地理来源瓜链格孢菌株问的生 物学特性进行比较研究. 参考文献 [1]李新辉,贾菊生.新疆瓜类由链格孢霉(Alternaria)侵染所致两 类叶斑病的纪录及鉴别[J].新疆农业,2002,39(6):348351. [2]张派勇.温室甜瓜叶枯病的发生与综合防治[J].植物保护, 2001,12(2):31—33. [3]方中达.植病研究方法[M].北京:中国农业出版社,1998:56. [4]徐秉良,马书智.百合疫病病原菌的鉴定及培养基的筛选口]. 植物保护,2005,32(3):287—290. [5]陈凤美,刘群,蒋继宏,等.银杏内生链格孢菌G1009生物学特 性研究[J].西北林学院,2005,2O(4):112一l14. [6]邹凤莲,汪志平,卢钢.番红花链格孢菌的分离及其生物学特 性研究_J].浙江大学(农业与生命科学版).2006,32(2): 162—167. [7]江明,黄俊斌,HsiangT,等.杂交狗牙根叶枯病病原鉴定及其 生物学特性研究[J].植物保护,2005(3):275—76. [8]张敬泽,张天宇,王瑾.链格孢属种问培养性状的分类研究 |_J].浙江农业大学,1997,23(5):511—514. ?踯加?如如如m0
/
本文档为【【word】 南瓜叶枯病病原菌生物学特性研究】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑, 图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。 本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。 网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。

历史搜索

    清空历史搜索