安捷伦1260液相色谱仪操作流程

安捷伦1260液相色谱仪操作及注意事项 1、配制流动相,水相置于棕色玻璃瓶中,有机相置于相应无色玻璃瓶中。水相和有机相必须过滤,滤膜选用0.45有机系滤膜(尼龙)。注意:过夜的流动相必须重新过滤。 2、流动相过滤后,置超声仪中超声20min。 3、将已超声的流动相轻轻换上,动作不要太剧烈,会产生气泡,注意不要把有机相和水相换反了(A是有机相,B是水相)。 4、将色谱柱接上,注意:流动相的流动方向必须和色谱柱上的箭头方向一致。 5、打开计算机电源、显示器开关,并输入密码。 6、依次从上往下打开液相色谱仪上的所有开关。 7、打开液相色谱在线工作站(online),输入密码。 8、打开的液相工作站上分为四个小部分,依次为进样器、泵、柱温箱及检测器。在第二个部分设置流动相的体积及溶剂瓶的总体积。 9、脱气:旋开purge阀开关,右击泵部分,选择“method”,选择B相100%,流速1ml/min,选择确定;右击泵部分,选择“control”,选择pump “on”,10秒后,调节流速为3ml/min,10秒后,调节流速5ml/min,开始水相脱气3min,水相脱气结束后,将流速按照5ml/min-3ml/min-1ml/min的流程往下调。然后开始有机相脱气,步骤同上,注意流速不可一下子从1ml/min调到5ml/min,需慢慢调节。流动相脱气结束后,旋紧purge阀开关。 10、建立样品的色谱:设置进样体积,选择洗针进样,注明洗针位置;设置流动相比例、流速及梯度洗脱条件,序列进样时设置样品运行时间和后运行时间;打开柱温箱,设置柱温;打开紫外检测灯,设置检测波长。全部设置好后,保存方法,不要覆盖别人的方法。 11、谱图保存路径的设置:View—preferences—data path(第二个选项)—remove旧的文件夹,add自己的文件夹。再打开Sequence—Sequence parameter—选择Data path为自己的文件夹即可。 12、设置进样序列,注意序列的填写。序列进样后,如想关闭泵及检测器,请点击Sequence —Sequence parameter选择shutdown—standby。 13、将样品按顺序摆放在自动进样器的托盘上。 14、注意泵压力是否正常,色谱柱是否漏液,如一切正常,关上柱温箱的盖子。待基线平稳后,点击Sequence进样。 15、进样结束后,需冲洗色谱柱,色谱柱很脆弱,需用心保护。 16、液相用完后,请关闭液相色谱在线工作站,依次关闭液相色谱仪上的开关,最后关闭计算机。 17、将自己的色谱柱换下时,需用连接管代替色谱柱连在液相上,不可以让其暴露在空气中。 18、从计算机中拷取谱图必须使用CD/DVD盘刻录,不可直接使用U盘。 19、请大家共同维护液相色谱仪,每次做完液相,请收拾液相台面,注意台面的整洁,并注意废液瓶,及时倒出废液。