食管-贲门双原发癌(双源癌)患者家族史、临床病理、生存期及甲基化分析.pdf.doc

食管-贲门双原发癌(双源癌)患者家族史、临床病理、生存期及甲基化.pdf.doc 郑州大学 硕士学位论文 食管/贲门双原发癌(双源癌)患者家族史、临床病理、生存期 及甲基化分析 姓名:付文静 申请学位级别:硕士 专业:病理学与病理生理学 指导教师:王立东 201205 硕士 研究 生: 付文 静 摘 要 源癌发生 在 同 一个体， 遗 传 背景 和环 境 因 素 相似， 为 研究 食管 癌和贲门 癌发病 机 制 差异及 其 想换 关系 的一种 理 想模 型 ， 对 其 进 行 深入 研究 有助 于 解 食管 癌的 发病特点 和分 子 机 制 。 双 源癌患 者 的同 一个体， 基因 和外 界环 境 影响 完 全相同 ， 并具 有相同 的遗 传 型 ， 与单一的食 管 癌和贲门 癌相比 ， 对 阐述 遗 传 因 素 ， 特 别 是表 观遗 传 ,谆,,对 食管 癌发生 的遗 传 具 有重 要 意 义 。 富 含 ,,二 联 核 苷 的区 域 称 作 ,,海, 浯笮 ? ,,,,, 采 用 家 访和问卷 调查 、 住 院 病理 核 查 以及电 话 随 访等方 法 ， 收集整 理 河 南、 ,,研 究 方 法 ? 杂 交、 洗 涤 、 延 伸 和扫描 等过 程。 ,,双 源癌和单发食 管 , 贲门 癌患 者 家 族 史分 析 ,,双 源癌和单发食 管 , 贲门 癌患 者 临床 病理 分 析 ,,双 源癌和单发食 管 , 贲门 癌患 者 生存 期 分 析 ,,双 源癌患 者 中临 床 分 期 、 分 化 程度 和大体形 态分 析 , ,,,,, ,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,,,, ,,甌,, , ,,,, , , , ,,,,, ,,,琺 ,,,,, , ,,,,, ， ,,,,( ,， ,,, ,,,,,,( ,， ,,( ,,( ,,,瓹 ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, 食’’?管’’’,’’’’贲 ‘。 门双。 源 癌 , , , , , , , , , 联合甲 基 化敏 感 性, , , 限制性 内 也 ( , , 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 , , , , , 已有一系列关 于 双源癌的研究报道 ，对双 源癌临 床 病 理特 征和 预 后 影响 因 素 进 行 了初步探 训 , , 。 本 研究旨 在 扩 大 双源癌患者例数，在 实验 室 原 有的工 作基 础 上 进一步 比较 双 源癌患者和 单 发 食 管 ,贲 门 癌患者的临 床 病 理、 家 族 史及 生 存 期 关 系，针 对流 行 病 理特 征及 其预 后 进行 分 析 ，为临 床 评 价和 肿 瘤 早 期预 防 提供 流 行 病 学依 据 采 用 家 访和 问卷 调查 、 住 院 病 理核 查 以 及 电 话 随 访等方 法 ，收集 整 理河 南 、 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 , , (, 彻 馨, , 诿虐 ? , 分 期 单 发 贲 门 癌 的 标准 。 , 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 , , 双源 癌和 单发 食 管 癌,贲 门 癌患者基 本 情况 , , , 渲 心 , , 例，女, , , , 校号 , , , , 簂 ，男 性 , 岁 ，平 均 年龄 , , , 岁 : 女, , , , 炅 , , , 岁 ，平 均 年龄 , , , 岁 。 单发 双源 癌、 单发 食 管 癌、 单发 贲 门 癌患者男 女性别 比 例分 别 为, , 、 , , 和 , , 。 , , 双源 癌患者和 单发 食 管 癌,贲 门 癌患家 族 史 , , , 。 见表 , , 。 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 可 以 更加深 入 阐明双 源 癌患者的 流 行 病 理学特征 ，为临 床 诊 疗 和 早 期发 现、 预 , 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 参 考 文 献 , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 【 , 浚 , 俅 灿 胧笛椴? 硌 г又 尽, , , , , , : , , , , ( 王 , , , , 呱 荷海 , 涡 溃 , 龋 , 彻 荜 诿 潘 , 窗 ?橹 , 蠷 , 隋 鞍椎谋 泶 铩 綣】 ( 郑州 大学 学 , , , , , , , , 甌 , , , , , , , 賜 , , , , , ， , , ， , , , , 綣】 ( , , , , ( , 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 表 , , 窗 ? 颊吆 偷 シ? 彻馨? 颊咝 员 稹 ? 炅 洹 ? 易 迨泛 土俅 卜制诘 谋冉蟦 , , , 壁竺 一 男 , , ( , , ( , , , , , ?, 馹 , , , 。 , , , 鯻 ?, , , , , , , , , , , , , , , , ’, ～ ～ ～ ～ ～ ～ ～’ ～’ ’ ～’ ’～ ’ ’, ’ ’ ’ ’ ’ ’ , , , , ?。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 。 ’。 。 。 。 。 。 。 ’’ 丝, 垄 旦 塑 墨墼堡 垒曼 , , 第 一部分 : 食 管 ,贲 门 双 原 发 癌, , 窗 , 患者家 族 史、 临 床 病 理及 生 存 期分 析 , 生存 分 析 : 舣源癌患者生 存 率低 于 单发 食 管 癌和 单发 贲 『, ? 颊, , , , , , 第 二部 分 : 食 管 ,贲 门 双源 癌 甲基 化 分 析 食 管 癌 是世 界上 最常 见的恶 性 肿 瘤 ? ， 其 发病 受 环境 和 遗传因素 的影 响 ， 具 双源 癌 来 自 同一个 体 ， 基 因和 外 界环境 对 其 影 响 完 全相 同， 并 具 有相 同的 遗传表 型 ， 正 是由 于食 管 ,贲 门 双 源 癌 高 度 的基 因相 似 性 ， 与单一的食 管 癌 和 贲 门 癌 相 比， 对 阐 述 遗传因素 ， 特 别 是表 遗传, 谆, , 对 食 管 癌 发生 的遗传具 有重要意义。此 外 ， 食 管 ,贲 门 双 源 癌 研究 有助 于区分 家 庭成员相 同的环境 因素 和 个 体 问 不同的遗传因素 对 肿 瘤 发生 的影 响 。 富 含 , , , :塑盏 那 , 虺 谱 鰿 , 岛， 其 大小 为, , , , , 相 关 性疾病， 二者 可能具 有 相 似 的致 病 危 险因素和 发病机 理 。 ,,,,,,,,酒 ,,杉 觳 獾 ,,,,,个 ,,,位 点 ; 人类 干 细胞 中 观 察 到 的非 , , 管 边 侧贴 样 本 号 标 签 并用 透 明胶 带包 裹 ，同时 用 记号 笔 在 管 , , 谏 鲜龉苤 校 , , , , 血样 加 入 对 应 , 管 中 ，颠 倒混 , 小 心 倾 倒上清 ，吸 水 纸 沥 干, , 蠹 尤 隖 , ,, , , , , , , , 第 二部 分 : 食 管 ,贲 门 双源 癌 甲基 化 分 析 , , , 橇 蚯馑 嵫未 , , , , 加 入 , 淼 腄 , , , 振 荡 器 上, , , 煸 萳 , , 焕胄幕 , 离 心 , , , , , , , 。 , 断 裂 , , 混 匀 , , 离 心 机 中 , , , , , , 蟹跤 , 琹小 时 。 , , ;煸 萳 , , , , , 匦赂 巧 闲碌 母 稍颿 , , 重 悬 , , , 琑 , 使 用 完毕 即 冻存 。 , , , 煸 萳 , 杂交 , , 蚩 T咏 缓 校 , 咏 缓 谐 牡 娣 湃朐 咏 缓 兄校 , , , , 匦, 蠓饪 诘 腗 , , , 湃 , , , , 置 ，对 应 , , , , 恢 梅 庞 贖 , 第 二部 分 : 食 管 ,贲 门 双源 癌 甲基 化 分 析 , , 咏 宦, 蟹跤 , , , , , ? 惫, , , ?, , , , 醇 加 ,, 甔, 中 ，剧 烈混 匀 , 秒，室 温 过 夜 待 用 。 , , 放 置 于第 一 个 , , , , 中 ，同上步 上 下 提 拉 , , , , 注 意 芯片 完全 被 , , , , , , 校 , , 酒, 胖 , , ， 糜 赽, , , ? 糜 贔, , , 上 , , , , , 露 任 榷 ㄔ, , ，将 , , , , , , , , 将 , , , , , , , , , , , , 尤 氲, 个 , , , , 上下 提 拉 , 次 ，注 意 缓 慢 轻柔 ，每次 都 要 , , , 上 下 提 拉 , 次， 注 意非 常 缓慢 轻 柔 ， 每 次 , , 取 出后， 立 刻 芯 片 正 面 向上 水 平 放置 于 , , , , , , , , ( , , , 真空 泵 中 干 燥 芯 片 , ( , , , 质控 说 明 , , , , , , , , , , , , , , , , , , 琻 , , , , 琻 , , , , , , , ， , , , , 通 过 芯 片 图像分 析软 件对 芯 片 灰度 扫 描图进行 分 析， 可以得 到 芯 片 上 每 个 , 脑 , 夹 藕 胖 担, 玫紺 , 点的 水 平 值 , , , , , ， 化 差 异 位 点的 筛 选 。 第 二部 分 : 食 管 ,贲 门 双源 癌 甲基 化 分 析 , , 菏 彻 馨 , 橹 , 脱 Q鵇 , 共有的 , , , , 虲 , , ( , , , ( , , , , , , , 细 胞 凋 亡 ， 又 称 为 程 序 性细 胞 死亡 ， 在 肿 瘤 的 发 生和发 展 中 扮 演着 一 个 重 要 : : : : 家 族 是 由 : : : : : : : : : : : : : : ， 从 而 减 少 在 : : 酶 的 活 性。 通 过 抑 制 : : : : ， 第 二部 分 : 食 管 ,贲 门 双源 癌甲 基 化 分 析 , , ,,,, ,,,,,,,,,: ,,,,( ,,珿 , ,,,,部 , ,,, ,,,,, , , ,,,,,,,,,,,,,,( ,( ,,,,,,,, ,,( ,,， ,,,,,,,( ,琎 , ,,襛 ,瓹 ,,, ,, 【 ,】 ,,,( ,,,,,,,,,,,,,,( 第 二部 分 : 食 管 ,贲 门 双源 癌 甲基 化 分 析 ,,,,,,,,( ,,, ,,,,,,,( ,,， ,,， ,,, , , ,,,,, ,,,,,: ,,,,,,( 第 三部 分 食 管 癌 是世 界上 最常见的六 大恶 性 肿 瘤 之 一 【 , ，具有 显 著 的地 域分 布差 异和 明显 的家族 聚集。食 管 癌 有 两种 不 同 的临 床 病理 学特征: 食 管 鳞癌 和 贲 门 腺 癌 。 众所周 知 ，食 管 癌 是一个 多 阶 段演 进的过 程，经 过食 管 上皮 基 地 细胞过 度 增 生 , , , , , , , , , , , 恢 狈 ? 刮J彻馨 , , 【 , 。 , , , , , , , , ，不 典 型 增 生, , ，, , , , , ，原 , ( , , , , , 位癌 , , ，, , , 组 织 病理 学检 查。但是此方 法 不 仅 给 病人 带来巨 大痛 苦，而 且 不 易发 现 早 期 患 , , , , , , , , 等 ; 另 , , 谆, , 潜 砉 垡 糯 , , 奘 蔚 囊恢 种 匾7 绞 剑 珼 , 甲 基 化在 体内有 重要 基 化位 点 的分 析 比 较 上 。, , 谆, , 侵冈 贒 , 甲 基 转移酶的作 用 下 将 甲 基 , , , , , , , , , 瓺 , , 是一种 催 化基 因 甲 基 化形成 并 维持甲 基 化在 肿 瘤 发 生中 起着 重要的作 用 ，研究表明肿 瘤 细胞中 一些 抑癌 基 因 高度 甲 大肠腺 癌 发 生相 关的热 点 基 刚 , 牵 珹, 基 因 失 活 是大肠肿 瘤 发 生的早 期 分 子事 件，但稳 定 于 肿 瘤 发 生发 展 的全 过程【 , , , , 基 因 甲 基 化和 食 管 癌 患者 的关系 , 甒 , , 萬 矧 认 为, , , 虻 募谆, , , 皆 贐, , , 食 管 患 基 化改 变。, , , 虻 募谆, , 梢 栽 げ釨 , , , 食 管 患者 是否 发 展 为高度 不 典 型 , , , , , 明, , , 蛞 匀 笔 В, 槐 浞绞 焦 惴 翰 斡柚 琢鲂 纬 桑 , 觳 鈖 , 基 因 有 无改 变对 判 断 患者 肿 瘤 的易感性 以 及 预测肿 瘤 的预后 ，具有 十 分 重要的临 床 意义 。宋常 山 织 的, , , 蚣 谆, , 剩, 崾緋 , 基 因 功 能异常 甲 基 化等 【 , 】检 测, 例 河南 林 州 和 , 例 广 东揭阳患者 食 后 功 能失 活 可能是南 、 管 癌 组 织 、 癌 旁组 织 和 切 缘 组 , , , , 等 【 , , 治鍪彻馨 ? 颊 遬 , 基 因 表达 缺 失 和其基 因 甲 基 化 人 , , 谆, 襦堰 剩瓺 , 甲 基 转移酶, , , 甿, , , , , , , , , , 蚨 嗵 , 泄 兀 , , 鳰 , , 基 因 变异型 , 和 , 的食 管 鳞状 细胞癌 , 是一类 新的肿 瘤 相 基 因 全 长 , 波形蛋 白 , , , , ，是五种 主要的中 间 丝 之 一，存 在 于 各种 正常 和病理 性 间 质 来源的组 织 ，如 纤维母细胞、 内皮 细胞、 淋 巴细胞等 正常 细胞和 肉瘤 、 淋 巴瘤 、 黑色素瘤 等 肿 瘤 。波形蛋 白 是负责 维持细胞骨 架 完整 性 的蛋 白 之 一。 , , , , 取, , 渴 褂 眉 谆, , 匾煨 訮 , 检 测食 管 癌 和 胃 癌 组 织 中 , , 辠, 基 因 甲 基 化表达情 况 ，发 现 肿 瘤 组 织 中 有 甲 基 化异常 改 变，而 正常 组 织 中 无改 变。, , , , , 有 关 食 管 癌 相 关 基 因 的甲 基 化的报道很多 ，究竟是 那 些 主要基 因 的甲 基 化 改 变影响 了食 管 癌 的发 生和 发 展 ，是否 可以 找 到 一个 基 因 甲 基 化的改 变作 为早 期 检 测食 管 癌 患者 的分 子指 标，或者 找 到 一个 靶 向治疗 的分 子指 标，提 高食 管 癌 患者 的预后 ，有 关 问 还没 有 明确的 。食 管 癌 是一个 多 阶 段研究的过 程， 疾 病发 生的分 子机 制还不 清楚 有 待 人 们 的进一步研究和 探讨。 , , , , ,, , , , ,, , , , ,, , , , ,, , , , , , , , , , , , , , , ,, , , , , , , , , 口 , , , , , , , , , , 瓹 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , 琂 , , , , , , , , , , , , ( , , ( 隅 ， ， 邵迪，崔 安 芳 ，朱 缪 娈 ，等 ( 甲 基 化作 用 于 肿 瘤 【 , 浚 , 泄 , 蒲 г貉 П г, , , , , , : ? ? , , , 琀 , , , , , , , , , , , ( , , 刁 郭 秀 枝，范洪 涛 ，周涛 ，等 ( , , , 蚣 谆, , 脱R翰 ?喙 匦缘 难 芯拷 , 埂 綣 】( 暨 南 大学 , ( , 学报, 窖О , ，, , ，( , , , , , ( 闫 俊 红 ( 刘 建 亮 ( , , 谆, , 贾 轮 琢龅姆 肿 踊 , 啤綣 】( 医学综 述，, , ，, :, , ( , , ( , , , , , 甌 , , , 【 , 】 , , ( , , ( 【 , 】 , , , 【 , , , , , , , , , , , , , , 簄 , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 甁 , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , : , , , , ( , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , ( 【 , 】 , , , , , , , , , 【 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 瓽 , , , , , , , , : , , ( , , , , , , , , , , , , , , ，, , , : , , , , , , , , , , , ( , 琓 , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , 琒 , , , ( , , , , , , , , , , , , 【 , 】姚 群 峰 ，周 宜开 ，任 恕 ( 基 因 启动 子异常 甲 基 化以 及 其作 为肿 瘤 生物标志 物的研究进 【 , 】, , , , , , , , , , , , , , , , , 瓸 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 甀, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , : , , , , , 琗 , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , 。, , ，, , , :, , , , ( , , , , , , , 琇 , , , , , , , , , , 瓽 , , , , , , , , , , , , , , , , 琒 , , , , , , 【 , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , 現 , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 【 , , , , , , , , ( , , , 】 , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , ( , ( , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , ( , , , 【 , 】 , , , , , , , , ，, , ，, , , , , , , (