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化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki-67表达的影响

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化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki-67表达的影响化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki-67表达的影响 化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki-67表达 的影响 国医论坛2008年11月第23卷第6期 ?44?FORUMONTRADITIONALCHINESEMEDICINENov2008,Vo1.23,No.6 ? 实验研究? 化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki一67表达的影响 宁夏医学院中医学院(750004)俞洋 摘要:目的:通过实验性增殖性玻璃体视网膜病变 (PVR)动物模型的建立,观察化瘀散结片对实验性 PVR家兔增殖相关基因表达的影响.方法:采用"玻 璃体内注入...
化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki-67表达的影响
化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki-67表达的影响 化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki-67表达 的影响 国医论坛2008年11月第23卷第6期 ?44?FORUMONTRADITIONALCHINESEMEDICINENov2008,Vo1.23,No.6 ? 实验研究? 化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki一67表达的影响 宁夏医学院中医学院(750004)俞洋 摘要:目的:通过实验性增殖性玻璃体视网膜病变 (PVR)动物模型的建立,观察化瘀散结片对实验性 PVR家兔增殖相关基因表达的影响.方法:采用"玻 璃体内注入异体培养兔视网膜色素上皮(RPE)细 胞"法建立PVR模型,在造模同时给予化瘀散结片 治疗,连续灌胃28d,通过免疫组织化学方法观察化 瘀散结片对增生膜核蛋白Ki一67表达的影响.结果: 化瘀散结片能有效抑制增生膜内细胞的增殖,高剂 量治疗组总体效果优于低剂量治疗组.结论:化瘀散 结片能有效防止PVR的形成与发展,其机理可能 与抑制增生膜内细胞的增殖有关. 关键词:增殖性玻璃体视网膜病变;视网膜色素上皮 细胞;中药;免疫组织化学;Ki一67;实验研究 PVR是由于多种原因导致的玻璃体及视网膜 表面的细胞增殖和收缩,造成牵拉性视网膜脱离的 病变.实验表明PVR是一种以细胞增殖为主的病 变J,本实验采用玻璃体内注人体外培养兔RPE细 胞造成实验性PVR模型,通过观察玻璃体内视网 膜前膜内与细胞增殖相关指标的变化,探讨化瘀散 结片治疗PVR的作用环节及其作用机理,为开发 治疗本病的中药复方制剂提供新思路和新方法. 1材料与方法 1.1实验动物一级日本大耳白兔23只,雌雄不 拘,体重2,2.5kg,双眼正常,由四川省实验动物 专委会养殖场提供. 1.2主要药品与仪器抗Ki一67多克隆抗体为美 国Santacrus公司产品;二抗及相应试剂盒购自北 京中山生物技术有限公司;化瘀散结片由成都中医 药大学附属医院制剂科提供,制成混悬液备用;道诺 霉素由意大利生产,临用前用无菌生理盐水配制成 0.05mg/mI溶液;Mias一2000计算机图象分析系 统,四川大学图形图像研究所研究开发. 1.3造模方法20只动物造模前用0.25%氯霉素 眼液滴双眼,3次/d,共3d.术前散瞳至瞳孔直径8 mm,1的卡因角膜表面麻醉,充分暴露眼球,用 4.5号针头于6点钟角膜缘后3,4mm处穿透巩 膜,进入玻璃体腔,抽取0.1mI玻璃体液,用另一 空针抽取密度为1×10个/mI的RPE细胞悬液 (细胞源自成都中医药大学眼科实验室)0.1mL,于 相同位置穿透巩膜,当瞳孔区见到针尖抵达玻璃体 中央时,将针尖斜面向上,缓慢注入RPE细胞悬液. 术毕双眼点0.25氯霉素眼液,3次/d,共7d. 1.4分组及给药方法动物适应性饲养1周后,随 机分为3只动物作为正常对照组,其余2O只动物随 机分为模型对照组,阳性对照组,化瘀散结片高剂量 治疗组,化瘀散结片低剂量治疗组,每组5只动物. 高,低剂量组分别以临床成人剂量20倍(9.6g生药 /kg),5倍(2.4g生药/kg)的化瘀散结片混悬液灌 胃,1次/d.正常对照组,模型对照组以中药等容量 的0.5羧甲基纤维素灌胃,1次/d.阳性对照组则 玻璃体腔内注入5g(0.1mI)浓度为0.05mg/mI 的道诺霉素,共1次,再以中药等容量的0.5羧甲 基纤维素灌胃,1次/d.造模后第3天开始给药,共 28d. 1.5标本采集和Ki一67表达检测方法给药28d 后处死动物,立即摘除眼球,模型对照组,阳性对照 组和低剂量治疗组每组随机选取6只眼球,其余两 组均为6只眼球,4多聚甲醛固定l周.沿角膜,视 神经水平面切开,冲洗,逐级酒精脱水,二甲苯透明, 浸蜡,石蜡包埋,矢状面平行视神经连续4m切 片,采有SP法检测增生膜Ki一67的表达. 1.6染色结果判断和评定增生膜内Ki一67抗原 阳性细胞胞核内棕黄色至棕褐色,颗粒状或小块状 染色,采用Mias一2000计算机图象分析系统测定每 张切片至少5个400倍视野增生膜Ki一67抗原阳性 着色面积,积分光密度,平均黑度以及Ki,67抗原阳 胃溃疡和炎症的愈复.笔者选用足三里穴位封闭以 辅助活血化瘀药物治疗胃炎,就是建立在以上研究 结果基础上,为了维持和延长足三里穴的刺激作用, 笔者选用具有调节神经,增强食欲和预防呋哺唑酮 所产生的末稍神经炎等副作用的维生素B穴位注 射,I临床观察表明是有益的.由于近年来认为幽门 螺旋杆菌是胃溃疡和胃炎的生物学致病因素之一, 因此,又选用对幽门螺旋杆菌有强力杀伤作用的呋 喃唑酮口服.从初步观察的疗效看,采用以上联合 治疗慢性胃炎,从药理作用,病理机制和治疗 方法上都是相互配合,相互补充的,因此,笔者认 为这种联合方案是治疗慢性胃炎的有效方法之 一 D (收稿日期:2008—08,10) 化瘀散结片对实验性PVR家兔Ki一67表达的影响俞洋?45? 性细胞数,取其平均值进行统计. 1.7统计分析方法采用SPSS11.0forwindows 统计软件包处理,多组间计量比较采用单因素 方差(one—wayANOVA)分析,多组间两两比较采 用q检验(S—N—K法)以及ISD(方差齐)或 Tamhane(方差不齐). 2结果 见表1,表2,表3. 表1化瘀散结片对增生膜内Ki一67阳性细胞 数量的影响(?s) 注:与模型对照组比较,**P<0.01;与阳性 对照组比较,?P<0.05,??P<0.O1;与低剂量治 疗组比较;?P<0.05. 表2化瘀散结片对增生膜Ki一67表达的 影响(?s)单位:m 注:与模型对照组比较,**P<0.01;与阳性 对照组比较,?P<0.05,??P<0.O1;与低剂量治 疗组比较,?P<0.05. 表3化瘀散结片对增生膜Ki一67表达的影响(7~s) 注:与模型对照组比较,**尸<0.01;与阳性对照组比较,?P<0.05,??尸 <0.01,???P> 0.05;与低剂量治疗组比较,?P<O.05. 由表1可知,模型对照组增生膜内Ki一67阳性特点,治疗多采用消法,使之缓慢消 散.Ki一67抗原是 细胞数量明显高于各用药组,与各用药组相比有极一种敏感而特异的增殖期细胞标记物,可直接,敏感 显着差异(P<0.01),与高,低剂量治疗组相比,阳地反映细胞的增殖活性,是应用最广泛的增殖细胞标 性对照组Ki一67阳性细胞数量明显减少,有显着或记物之一[2矗].检测结果显示PVR处在一种高增殖 极显着差异(P<0.05或P<0.01).高,低剂量治疗状态,道诺霉素和化瘀散结片都能有效抑制增生膜内 组之间比较有显着性差异(P<0.05).细胞的增殖,表明两药具有一定的抗增生能力,化瘀 表2,表3显示,模型对照组截面积总和,积分散结片的抗增生作用虽不如道诺霉素明显,但从实验 光密度,平均黑度明显高于各用药组,同各用药组相中可以看到高,低治疗组存在着一定的量效关系,因 比有极显着差异(P<0.01),高,低剂量治疗组截面此两药的治疗效果可能与不同的给药途径.,局部所 积总和与积分光密度同阳性对照组比较有显着或极含有效成分多少有关,这一作用与其活血化瘀,软坚 显着性差异(尸<O.05或P<O.01),高,低剂量治疗散结,消积导滞的功效密切相关. 组之间比较有显着性差异(P<O.05);阳性对照组,参考文献: 高剂量治疗组平均黑度明显低于低剂量治疗组,且[1-1白禹诗.增殖性玻璃体视网膜病变(PVR):发病机理和 有显着性差异(P<O.05),阳性对照组,高剂量治疗治疗的研究历程[J]_中国实用眼科杂志,1996,14(8): 组之间比较无显着性差异(P>0.o5).509-512. 以上结果表明,道诺霉素与化瘀散结片均可抑 []Miller,Gmg"TM,Dhb.gs,eta1.Prog"osti. 制增生膜内细胞有丝分裂,减少细胞增殖.significncofh . .o , ci . at . edprner:ve 3讨论antig …enineG 中医古代文献中没有与PVR相对应的病名,其[3]Gerd.J,S.hwabu,L.mk.H,et1.Poductionofa 表述都只限于对症状的描述上,缺乏对其病机的阐0.m0o.lonaltib0dcti.withhm 述.现代中医学根据PVR的发病特点及病理表 现,nuc1earantigenassociatedwithce11proliferati0n.IntJ 认为这种增生性病变属中医眼科血证范畴,是眼科血Cancer,1983,31:13. 证的晚期表现,痰,瘀互结,虚,瘀互为因果为其病机(收稿日期:2008-06—23)
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