MMP14与卡波氏肉瘤相关性的研究

MMP14与卡波氏肉瘤相关性的研究 石河子大学 硕士学位论文MMP14与卡波氏肉瘤相关性的研究 姓名:罗先道 申请学位级别:硕士 专业:生物化学与分子生物学 指导教师:杨磊黄瑾 20090601 摘 要且盟:本研究旨在利用分子生物学和细胞生物学检测,,,,,基因在卡波氏肉瘤(,,,,,,’, ,,,,,,,，,,)？,的表达水平，初步研究其在,,发病中的作用及与,,,,感染的关系，明确其在,,发病中的可能。友法:收集,,侈,〕新疆,,患者肿瘤组织、以及,,例非,,患者的正常皮肤组织样本作为对照。分别采用,,,,,,,,, ,,,和免疫组化技术，从,,,,和蛋白水平检测样本中,,,,,表达情况;利用基因重组技术构建,,,,,真核表达载体，通过脂质体转染人脐静脉内皮细胞(,,,,,)，用,,,,,,,,,,,,鉴定转染,,,”时后含外源性,,,,,的细胞株。并观察转染后细胞的形态变化，用,,,法检测转染后细胞的增殖率等生物学特征变化:通过,,,,,,,,,检测,,,,,对细胞迁移的影响:使用,,,,,的抑制剂,,,,,,抑制,,,,,的表达，检测,,,,感染的,,,,,细胞中,,,,,蛋白与,,,,蛋白表达变化的关系。结墨: (,),例,,患者组织中,,,,,基因的,,,,表达水平的最高值是,(,,,,，最低值是,(,,,,,，平均表达水平为,(,,,,,。,,,，而,例正常皮肤组织中,,,,的表达水平最高值为,(,,,,，最低值为,(,,,,,，平均表达水平为,(,,,,,,(,,,，经方差齐性检验，方差组间不齐，进行近似,检验，,,,(,,,，,,,(,,,，,,,(,,，差异无统计学意义。(,)免疫组化结果显示,,,,,蛋白在,,患者组织中阳性表达明显高于正常皮肤组织，差异有显著性意义睁,,(,,，,,,(,,)，,,,,,蛋白阳性反应程度在两组中有统计学意义(,,,(,,,，,,,(,,)。(,)成功构建了,,,,,基因的真核表达载体，将构建的重组体转染入脐静脉内皮细胞,,,,,细胞,,,后，检测有外源性,,,,,蛋白的表达，增殖率检测结果显示不同转染时间和不同转染浓度转染,,,,,重组体组与其他对照组相比增殖率明显增高，结果有统计学意义(,,,(,,)。(,)转染,,,,,重组体后，与转染空载体和未转染组相比，,,,,,明显促进,,,,,细胞的迁移(,,。,?,。,，,,(,,,,，,，,,(,,,,(,)。(,)抑,〕,,,,,的表达(可以弓,起,,,,感染的,,,,,细胞里的,,,,蛋白的表达下调。结论:(,)，,,,,,基因在,,组织和正常皮肤组织,,,,表达水平无差异和蛋白表达水平增高。(,)，,,,,,基因过表达能促进,,,,,细胞的增殖和迁移。(,)(,,,,,基因在,,,,感染的细胞中调节与肿瘤血管生成有关的血管内皮因子,,,,的表达。关键词:,,,,,;卡波氏肉瘤;细胞增殖;细胞迁移;血管生成论文类型:,(基础研究)资助基金项目:国际合作项目《新疆卡波氏肉瘤的相关基因筛选及其在发病机制中作用的研究》(,,,,,,,,,,,,) ,,,,,,;, ,,,,;,,,,:,,, ,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,, ,, ,, ,,,,, ,,,, ,,, ,,,;,,,, ,, ,??,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,， ,,, ,,, ,,,,,,,, ,,;,,,,,, ,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,, ;,欤?,,,,,,, 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,,,,,,, ,,,,, 开放读码框,,, ,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,, 聚合酶链反应，盯 ,,,,,,,,,,,,;,,,, 逆转录，,, , ,,,,,,,,,,;,,,,,,,, 免疫组织化学,,, ,，,’,,,,,,,,,,,,,,,,, ,，,’一二氨基联苯胺?,,,, ,,,,，,,,,，,,,,，,,,, 三磷酸脱氧核苷酸,, ,,,,,,,, , ,,,,,, 溴化乙锭,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,—,;,,,; ,;,, 乙二胺四乙酸,, ,,,,;,, ,,,,,,, 光密度,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,, 每分钟转速,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,培养基,,, ,,,,;,,,,, 氨苄青霉素,,, ,,,,,, ,,,,;,, ,,,,,,, 十二烷基硫酸钠,,,, ,,,,,;,,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,,,,,, 聚丙烯酰胺凝胶电泳,,,, ,,,,(,,,,,,,,,,,,,,),,,,,,,,,,,,三羟甲基氨基甲烷,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, 磷酸盐缓冲液、?, ,,,,,,, ,,,, 蛋白质免疫印迹,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, 辣根过氧化物酶,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, 二甲基亚砜,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,, 胎牛血清 ,,, 石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明 学位论文独创性声明 本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果(对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确的说明并表示谢意( 研究生张罗当遗 帆删年循，,日 使用授权声明 本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据进行检索(有权将学位论文的标和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。 研究生馘黝涵, 时圊:,,，哼年占目(, , 锄始杪 时间驯年歹月;,日 ,～，,,,与卡波氏肉瘤相关性的研究 —，,?,?一 月，, 吾 (，,,,,,,;,,,,) 卡波氏肉瘤(,,,,,,’, ,,,;,,,，,,)是一种罕见的软组织恶性多发色素性血管肉瘤，以感染皮肤形成血管瘤样结节或斑片组织为特征，也可累及内脏器官。,,,,年，由维也纳皮肤科学家,,,,,, ,,,,,,命名。根据不同临床特征，,,被分为,个类型:艾滋病相关型(,，,,—,,,,;,,,,, ,,,,,,’,,,;,,,，,，,,(,,)、非洲地方型(,,,,,,; ,,,,,,’,,,,;,,,)、 免疫抑制,器官移植相关型(,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,;,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,;,,,,, ,,,,,, ,,,;,,,)和经典型(;,,,,,; ,,,,,,’, ,,,;,,,)【?。由于,，,,(,,是,，,,最主要的并发症，因此人们对,,的研究引起了重视。在我国，,,的发生具有鲜明的地方民族特点，主要发生于新疆维吾尔族和哈萨克族，其它地区和民族的,,病例罕见【,】。新疆,,与国外的经典,,相比，除生长期长，主要发生于老年男性外，另有一定的特点，如国外报道的经典,,患者，第二原发肿瘤的发生率高达,,,，尤其是淋巴瘤和白血病，而新疆,,患者至今并无第二原发肿瘤的报道，内脏损害也相对较少。由此可见，新疆,,具有一定的特殊性【,】。故通过研究新疆经典型,,对艾滋病型,,的防治具有重要意义。 ,,的病因和发病机制目前尚未明确，而人疱疹病毒,型(,,,,, ,,,,,,,,,,, ,，,,,,,)感染是目前比较公认的致病因素。我们前期对,,病因学的研究中，采用套式,,,技术 检测了,,例新疆经典型,,患者血清中,,,,,感染的情况【,,，阳性检出率为,,(,,，提示,,,,,病毒感染是,,发病的重要因素。采用酶联免疫法检测了新疆,,例经典型,,患者和,,例对照组的血清细胞因子水平，发现,,患者某些细胞因子水平异制,,，推测经典型,,患者可能存在免疫激活状态。同时我们利用收集到的调查问卷资料，从流行病学及分子生物学角度，阐明新疆地区,,发病的流行病学特点，前期的流行病学调查资料没有发现,,患病与环境及生活方式的相关性，但单因素与多因素分析均显示,,,,,是新疆地区经典型,,独立的危险因素【,】。本课题组前期研究通过,,,、基因芯片方法及生物信息学分析筛选到,,多条表达差异基因，其中基质金属蛋白酶,,(,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,)包括在表达差异的基因中，提示可能在,,的发病过程中发挥一定的作用。 基质金属蛋白酶是一族锌离子依赖性蛋白水解酶，它们是参与细胞外基质(,,,,,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,)代谢的最主要的酶类。膜型基质金属蛋白酶(,,(,,,,)是,,,,的一个亚家族，其亚家族中已发现膜型基质金属蛋白酶(,(,,,(,,)、膜型基质金属蛋白酶(,(,,,,,,)、膜型基质金属蛋白酶(,(,,,(,,)、膜型基质金属蛋白酶(,(,,,(,,)、膜型基质金属蛋白酶(,(,,,(,,)、膜型基质金属蛋白酶(,(,,,(,,)六种成员。而,,,,,是,,,,年由,,,,〔,】等首先从人胚胎;,,,文库中筛选出的一条新基因(约,(,,,，编码含,,,个氨基酸的蛋白质，分子量约,,,,,。研究发驯引，,,, ,,除在成纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞表达外，在许多肿瘤如皮肤、肺、胃、结肠、肝、肾、 姗,,,与卡波氏肉瘤相关性的研究乳房、膀胱、脑部肿瘤等，均发现有表达，并在肿瘤的? ?构 讨蟹?硬煌 墓δ堋?,,,,,本身是一类胶原酶，除可以细胞表面激活基质金属蛋白酶,(明胶酶,)酶原(,,,(,,,(,)降解,,,外，也可自身降解,,,的成分，活化的,,,,,可降解各种,,,大分子，包括，、，，和?型胶原(;,,,,,,,)、纤连蛋白(,,,,,,,;,,,)、层粘连蛋白(,(,,,,,,,(,)和层粘连蛋白(,(,,,,,,,(,)、纤维蛋白(,,,,,,)、玻璃粘连蛋白等。,,,;,,〕等的研究表明,,,,,的自身催化降解产物是细胞表面,,,,,的片段(,,,,,,,,,,,,,)其外功能区只有铰链区，血红蛋白,区和在跨膜序列前的茎片段构成。在胶原酶上，血红蛋白样,区结合，型原胶原，产生解螺旋活性，从而使三链胶原解螺旋，使，型胶原上的,,,,，，,或,,,,,,,肽腱断裂，产生典型的,,,和,,,胶原片段，从而使，型胶原降解。,,,,,活化,,,(,酶原的过程是其在酶原激活水平上调控,,,降解的重要途径。这一激活过程需要金属蛋白酶组织抑制子,(,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,，,,(,)的参与，,，,,(,的,端抑制区域结合在,,,,,的催化区域，其,端则与,,,(,酶原结合。在形成,,,,,,,，,,(,,,,,(,,,(,,,”分子复合物的过程中，,，,,(,起着连接体的作用，通过三分子复合物的形成，,,,(,被募集到有,,,,,存在的细胞表面，然而，构成复合物的,,,,,并不能激活,,,(,酶原，因为其被,，,,(,抑制，所以，其复合物临近的,,,,,不得不充当,,,,酶原的激活剂，因此，至少有两分 子的,,,,,,彼此靠近，参与细胞表面的,,,(,酶原的活化反应，也只有两个,,,,,分子保持适当的空间距离才能介导其同型低聚物的形成，而,,,,,的多个功能结构域，像血红素样结构区，跨膜区，胞浆尾区在维持两个,,,,,分子保持适当的空间距离上发挥重要作用。近来,,州,,,,,，,,,【,】等的研究表明，,,,,,介导的,,,,,酶原的活化过程在降解，型胶原时可以被,,,,,整合素抑制。 肿瘤细胞的迁移在肿瘤扩散过程中发挥重要的协同作用，包括细胞在,,,上的运动，这一过程与细胞(细胞基质间的黏附和去黏附的交替循环过程相关。,,,,,可以通过与不同的细胞间因子作用影响细胞在,,,上的迁移。去除,,,,,(,端胞浆区域的突变体和野生型,,,,,样具有诱导细胞迁移的作用，而且其导致细胞迁移作用既不依赖于细胞类型，也不依赖于,,,的成分，迁移细胞包括乳腺癌细胞系(,，,,,,，,,,(,和,,,(,,一,,,)，前列腺癌细胞系(,,,,,)等;细胞迁移底物包括，纤维蛋白，层粘连蛋白，明胶等【,,】。,,,,,,,,,,,,,,】等的 (,,,,,,,,,,, ;,,,, ,研究表明，,,,,,可以与内皮细胞 ,,)表面的,,和,, ,,整合素结合，从而促进,,,在,,,的不同成分上迁移。,,,,,,,【,,】等也报道了主要是,,,,,的表达促进细胞在层粘连蛋白(,(,,(,)上迁移，而由其活化的,,,(,可能是扩大,,,,,的效应，起着次要作用。非癌肝内皮细胞(,,,)在,,(,上的迁移依赖,,,,,和,,,(,的作用，而肠癌内皮细胞(,,(,,)的迁移则只依赖,,,,,的作用，其可能的机制是,,,,,切害,,〕,,(,,，，，功能区的丫,链形成,,’链使,,(,翻转，导致细胞迁移。,,,,,也可以通过血红素样功能域与,,,,结合，形成单层足板样结构，与肌动蛋白连接，导致肌动蛋白收缩促进细胞迁移【, ,,。 目前，恶性肿瘤最主要的死亡原因是肿瘤的侵袭和转移。肿瘤的侵袭和转移是一个复杂的过程，在这一过程中，,,,,,发挥着至关重要的作用。最近研究显示，,,,,, , ,,,,,与卡波氏肉瘤相关性的研究在大多数恶性肿瘤如肝细胞癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，肺癌，皮肤癌，神经胶质瘤，黑色素瘤等中过度表达，并与肿瘤的病理分型，恶性程度，侵袭性和转移等都有相关性。,,,,(,,,,,】等用免疫组织化学技术检测肝细胞癌样本显示，,,,,,在肿瘤组织及非肿瘤组织肝周静脉中都有异常表达，这提示,,,,,在肿瘤细胞侵袭过程的不同阶段有决定性作用，为进一步明确,,,,,是如何影响肿瘤细胞的侵袭过程，他利用体外基因重组技术实验证明，,,,,,过度表达的转染子可以促进肝癌细胞生长，增加癌细胞侵袭性，黏附性以及细胞迁移能力;体内实验也显示，把,,,,,过度表达的转染子植入裸鼠肝内，可以增强癌细胞的生长率和增加癌细胞肝内转移机率。,,,,,,,,,,,】等把经,,,,,转染的,,,细胞植入裸鼠胃粘膜层，六周后，形成胃肿瘤，组织学检查发现，在胃粘膜下层发现有肿瘤的淋巴结转移，而且在转移的淋巴结和胃肿瘤中都有,,,,,转染的,,,细胞存在(在其胞膜和胞浆内,,,,,都具有免疫反应性。,,,,,介导的肿瘤侵袭作用在人体内由多种途径调节的，,,,,,,〔,,】等的实验表明，溶血性磷脂酸(,,,)是,,,,,介导肿瘤细胞在三维胶原基质上的侵袭的重要的激动剂，相反，鞘磷脂磷酸盐(,,,)在多数肿瘤中表现出侵袭抑制作用，只在极少数肿瘤中起激动剂作用。,,,,,〔,‘,】 等认为，,,,,,的在侵袭结构上亚细胞定位，胞外囊泡运输过程是其使肿瘤细胞具有侵袭性的关键因素，而且,,,,,的这种促侵袭活性可以被,,,,,,,酶调节。体外实验证明，在成纤维细胞或肿瘤细胞中抑制,,,,,的表达，可以导致其溶胶原活性和侵袭活性丧失，同样，在纤维肉瘤或人类癌细胞中沉默,,,,,基因，也出现膜相关的溶胶原活性完全丧失和肿瘤细胞不能浸润到周围组织的现象。 肿瘤血管是组成肿瘤间质的重要成分，它对肿瘤的生长，侵袭与转移等都具有重要意义，而,,,,,近年来已成为研究肿瘤血管形成和抗肿瘤血管治疗的热点。,,,,,,〔,,】等将,,,,,的;,,,转入到既不表达,,,,,，也不表达,,,(,的乳腺癌细胞,,,,中，然后注入裸鼠体内，发现高表达,,,,,克隆的,,,,细胞可以诱导富含血管的肿瘤的迅速形成，并且在体外鼠动脉环分析实验中，高表达,,,,,克隆的,,,,细胞可以促进血管发芽，形成新的血管分支。,,,(,,,〔,,】等对体外血管生成模型的研究发现，在富含胶原的环境中既不是,,,(,，,,,(,的同系细胞受体(,,整合素，,,,,)也不是纤溶酶原促进溶胶原活性，内皮细胞侵袭以及新生血管形成，而是由,,,,,发挥着促进内皮细胞侵袭和血管形成的作用。在人和鼠的内皮细胞中，通过依赖,,,,,的形式间质细胞源性生长因子(,,,(,)和脂多糖(,,,)可以诱导毛细血管形成，这说明,,,,,在介导新生血管形成过程中有重要意义【,,,。 ,,,,,调节肿瘤血管的形成是通过不同的机制来完成的。,,,,,〔,,】等在神经胶质瘤的研究中，发现,,,,,通过上调血管内皮细胞生长因子(,,,,)来促进肿瘤血管形成;另外，使用,,,,,的抑制剂,,,,,,，则可使,,,,的表达下调，减少了血管的生成。,,,,,〔,,】等研究证明，在血管平滑肌细胞中，活化的,,,,,与血小板源性生长因子受体一,(,,,,,。,,)在胞膜上形成复合物，通过与血小板源性生长因子,,,(,,,,(,)结合有效诱导丝裂信号，调节微血管管壁结构的形成。已有证据表明人类多数肿瘤高表达信号素,,， ,删〔,,,与卡波氏肉瘤相关性的研究它可以通过刺激,,,表面的受体,,,,,, ,,促进新生血管形成，在此过程中，信号素,,必须以旁分泌形式从膜结合形式游离和释放出来才能发挥促血管形成功能。,,,,,则可以通过溶蛋白裂解控制信号素的释放，调节肿瘤诱导的血管生成，这一途径可能成为,,,,,调节肿瘤血管生成的新的分子机制【,,,。 目前研究报导了,,,,,与人类不同肿瘤的发生发展有密切关系，如肝细胞癌，乳腺癌，前列腺癌，胃癌，肺癌，皮肤癌，神经胶质瘤，黑色素瘤等。多数研究表明，从影响肿瘤细胞增殖，肿瘤生长，到引起,,,降解，肿瘤细胞迁移，肿瘤的浸润，侵袭和转移以及肿瘤血管形成，,,,,,的高表达贯穿着肿瘤发生发展的全过程，而且，在恶性肿瘤的研究中发现，,,,,,的高表达与恶性肿瘤的病理分型，恶性程度，是否有转而为,,的防治提供理论支持。 目前国内外均未见,,,,,与,,相关的文献报导，本课题从以下几方面进行了探讨。本课题拟采用,,,,(,,,,,,,、免疫组化技术从,,,,水平和蛋白质水平检测在收集的所有,,,〕中瘤组织与正常皮肤组织,,,,,,的表达情况:并构建,,,,,的真核表达载体，转染至人脐静脉内皮(,,,,,)细胞株，观察转染后上述细胞形态结构、增殖率等生物学特征变化及对细胞迁移变化的影响，同时用,,,,,的抑制剂,,,,,,抑制感染,,,,的,,,,,细胞中,,,,,的 表达，检测抑制前后血管内皮生长因子,,,,的表达变化，从而探讨,,,,,基因对,,,,的作用。通过以上研究，明确,,,,,基因在,,发病中的作用，为揭示,,的发生机制提供新的线索。 , ,,,,,与卡波氏肉瘤相关性的研究 第一部分 ,,,,,基因在,,组织样本中的表达,(材料,(,组织样本,(,(,实时定量,,,标本 取,,,,,,(,,,,年间在新疆乌鲁木齐，喀什和伊犁地区的,例,,患者的肿瘤和正常皮肤组织，病例均经病理活检确诊为,,。石河子大学医学院第一附属医院门诊部收集非,,患者正常皮肤组织共,例作为对照组。,(,(,免疫组化标本 ,,例,,病理标本为,,,,年至,,,,年间取自乌鲁木齐解放军第四七四医院、友谊医院、自治区人民医院、伊犁洲友谊医院和石河子大学医学院第一附属医院病理明确诊断的,,患者的石蜡包埋组织标本,,例，白片,例。自伊犁州新华医院和石河子大学医学院第一附属医院门诊部收集非,,患者正常皮肤组织共,,例作为对照组，患者多为外伤及外科手术病人。,(,主要试剂 ,,,,,, ，,,,,,,,,,公司 二甲苯、无水乙醇、异丙醇 上海生工公司 氯仿、,,,,饱和酚、丙酮 上海生工公司 ,,,,,,,,二步法试剂盒 ,,,,公司 ,,,显色剂 ,,,,公司 鼠抗人,,,,,单克隆抗体 ,,, ,,,,,,,公司 抗体稀释液 福州迈新生物技术开发公司 ,,,, ,,,,,, ,, ,,？ ,,,,,,(宝生物)公司 ,,,,,,;,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,(宝生物)公司,(, ,,,(,,,缓冲液(,(,,，,,,(,):,,,常用试剂配制,(”， ,,,(,,,，浓,,,,,(,,,，双蒸水定容至,,,,,,。,(,,,缓冲液:,,,,,,,(,,,缓冲液,,,,,，,(,,,,,,,,,,,，双蒸水定容至,,,,,,。,(,(,,,枸橼酸盐缓冲液(,,,(,):,液,(,,枸橼酸溶液:,,,枸橼酸，蒸馏水定容至 ,,,,,,;,液,(,,枸橼酸钠:,,(,,,枸橼酸钠，蒸馏水定容至,,,,,,，,,,,液，,,,,,液 ，,,,,,蒸馏水(备注:此液不能重复使用),。,,,显色齐,:,,,,,,，加,,,此的,,,,(,,)，,,,,,,,过滤即可使用,(,,,,,(,,,, ,,,引物 ,,,,,与卡波氏肉瘤相关性的研究,(,(,引物序列(,,,，,,,,级),,,,,(,,,: ,’,,,,,,,,(、,,,,,,,,,,,,,,,,(,’,,, , ,(,,,(” ,’(,兀’,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,’,,,,,((,,,: ,’,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,’,,,,,(,,,: ,’,,,,,裕牵牵裕牵粒粒牵粒茫牵茫茫粒牵裕 场 ㄒ陨弦 镉纱罅 ι 锕こ逃邢薰 荆ǎ 裕幔耍幔遥幔?铣桑 保 矗 玻罚煳锵?停幔 诶涠忱胄幕 希础保茫 担埃埃埃颍穑恚 耄 猓欤恚椋睿 构以诠鼙诤凸芨巧系姆勰?胄挠诠艿祝猓 抗芊直鸺尤耄洌洌龋玻埃保埃埃保 蹋 浞只煸龋 渲瞥桑保埃埃穑恚铮蹋 欤 檀?嬉海悖 。荡耍欤希铮穑恚铮沾说拇?嬉海 停矗担穑蹋洌洌龋玻盎煸龋 渲瞥桑欤希穑恚铮眨穑坦ぷ饕海 矗保埃酰?工作液,(,主要仪器设备,,,,,(,电子天平 ,,,,,,,;公司实时荧光,,, ,,,,, ,,;,,,仪 美,垂，,,,,,,,公司,,,(,,,,,,,凝胶图像成像仪 .