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病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用

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病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用 病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生 物技术应用 第21卷第2期 2O08年4月 山东科学 SHAND0NGSCIENCE V01.21No.2 Apr.2OO8 文章编号:loo2-4q26(2oo8)o2-(x)21—06 病毒编码的RNA沉默抑制子 的特征及其生物技术应用 孙燕霞,刘红梅 (1.山东省烟台市农业科学研究院,烟台265500; 2.山东农业大学生命科学学院,作物生物学国家重点实验室,泰安271018) 摘要:RNA沉默是一种依赖...
病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用
病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用 病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生 物技术应用 第21卷第2期 2O08年4月 山东科学 SHAND0NGSCIENCE V01.21No.2 Apr.2OO8 文章编号:loo2-4q26(2oo8)o2-(x)21—06 病毒编码的RNA沉默抑制子 的特征及其生物技术应用 孙燕霞,刘红梅 (1.山东省烟台市农业科学研究院,烟台265500; 2.山东农业大学生命科学学院,作物生物学国家重点,泰安271018) 摘要:RNA沉默是一种依赖核酸序列特异性的RNA降解过程,是动物,植物抵抗病毒等外源核酸的一种保守 防御机制.而针对寄主的这种防御机制,许多病毒演化出RNA沉默抑制子以克服这种防御反应.本文综述 了几种动物,植物病毒抑制子的结构和作用方式,讨论了病毒抑制子之间的交叉抑制功能,病毒运动和沉默抑 制子之间的关系,病毒RNA和亚病毒寄生物通过沉默抑制子而进行的自我保护原理,抑制子对于miRNA (microRNA)途径的影响以及病毒抑制子在生物技术方面的应用. 关键词:RNA沉默;病毒沉默抑制子;小分子干扰RNA;微RNA 中图分类号:$432.41文献标识码:A TheCharacteristicsandBiotechnologicalAppfications ofRNASilencingSuppressorsEncodedbyvjnlses SUNYan.xia,LIUHong-mei (1.YantaiAcademyofAgriculturalSciences,Yantai265500,China;2.SchoolofLifeScien ce, ShandongAgriculturalUniversity,StateKeyLaboratoryforCrop肋,271018,China;). j’j, ‘ Abstract:RNAsilencingisaconservativeeukaryoticdefensemechani. sm,which, isattachedtothe degradationofexogenousnucleicacidviaspecificF~quencesinteractions.Viruseshaveev olvedsuppressor proteinsthathelpthemsuccessfullyinfecttheirhoststocounteractit.Weperformasurveyof structures andeffectsofsomeviralsuppressorsfromseveralplantandanimalviruses.Wediscussthea bilityof cross-kingdomsuppressionofsuppressors,thelinkbetweenmovementandsilencingsupp ression,, the self-protectionprinciplesofviralRNAandsubviralparasitesbysilencingsuppressors,the effectsofviral silencingsuppressorsonthemicroRNApathway,andthebiotechnologiealapplicationsof silencing suppressors? Keywords:RNAsilencing;viralsilencingsuppressor;sh0ninterferingRNA;microRNA 收稿日期:2oo8-o1.17 基金项目:国家自然科学基金项目(30270875);山东省中青年科学家科研奖励基金(2oo5~p-oo7). 作者简介:孙燕霞(198o一),女,硕士,主要研究方向为分子生物学.E-mail:44439010@sina.c0nl 山东科学2008年 lRNA沉默与病毒编码RNA沉默抑制子 RNA沉默是针对寄生RNA以一种高度序列特异性方式进行的RNA降解过程,在植物中称为转录后基 因沉默,在动物中称为RNA干涉.绝大多数真核生物中都存在这一高度保守的防御机制[J]. 植物中RNA沉默途径分为阶段和保持两个阶段.在侵入阶段,寄主细胞将入侵的双链RNA(double strandedRNA,dsRNA)视为不正常双链,并利用一种dsRNA特异性的RNA酶一Dicer将这些dsRNA切割成为 21,24nt的小干涉RNA(smallinterferencingRNA,sim).这些siRNA随后以解旋方式整合进入一种RNA诱 发的沉默复合体(m.inducingsilencingcomplex,RISC)中,通过RISC的介导实现对同源RNA的降解.在保持 阶段,同源RNA通过siRNA扩增,在没有dsRNA触发子的情况下发生持续降解,这一过程中寄主的依赖RNA 的RNA聚合酶(mJA.dependingRNAPolymerase,RdRP)利用siRNA作为引物,同源胞内RNA作为模板,不断合 成新的dsRNA【4].植物中RNA沉默发生的标志性特征是在最初侵染区域能产生一种序列特异性信号,并随 之进行整株植物的系统性传播J. 植物病毒为克服RNA沉默实现成功侵染,能够编码一些具有沉默抑制功能的蛋白质,称为RNA沉默抑 制子.最新研究发现沉默抑制子在调节动物病毒侵染过程中也具有重要作用.目前,从植物中已鉴定出了 包括马铃薯Y病毒的HC.Pro,马铃薯x病毒的P25,黄瓜花叶病毒的2b蛋白和番茄丛矮病毒的P19在内许 多种病毒沉默抑制子,从动物和人体内也利用植物体系发现了几种抑制子【2].不同抑制子的氨基酸序列 和蛋白质结构是不同的,这可能是因为沉默抑制子本身在病毒侵染过程中是具有不同功能的蛋白质.它们 除了能够抑制RNA沉默,许多抑制子还是引发疾病和发育缺陷的致病因子【7].这些来自结构蛋白和非结构 蛋白的抑制子能够针对RNA沉默的不同阶段根据不同需要而起作用. 2病毒编码RNA沉默抑制子的作用方式 截至到目前为止,已知的不同病毒家族或病毒组之间不存在明显相似的序列或结构,唯一的共同特点是 它们通常是作为致病因子或寄主范围决定因子而被鉴定出来.一组特定病毒蛋白通过进化,逐渐具有沉默 抑制子的功能,但与它们在病毒生长循环过程中的最初首要功能不太相关.从结构蛋白和非结构蛋白中鉴 定出来的具有抑制子功能的蛋白包括病毒的许多功能蛋白,如运动蛋白,病毒复制酶,复制增强子及转录激 活因子等[8].具有抑制子的病毒大多是单链RNA病毒,当然也有双链RNA病毒【9和单链环状DNA病毒H. 2.1马铃薯Y病毒属(Potyvinases)病毒编码的PI/HC—Pro蛋白 PI/HC—Pro蛋白是第一个鉴定得到的植物病毒RNA沉默抑制子,它能够参与蚜虫传毒和病毒在植物体 内的长距离移动,影响多聚蛋白的加工和基因组的复制等[J...在沉默抑制的过程中,它并不阻止沉默信号 的产生和系统传导,而是在沉默保持阶段影响靶标RISC的组装,其中FRNKbox这一高度保守区域是siRNA 与miRNA的关键链接因子,能够影响miRNA的累积,从而抑制miRNA介导的靶标mRNA的降解,最终导致 病症的形成?.Mallory发现PI/HC.P_m能够改变Dicer酶的活性,Anandalakshmi 等利用酵母双杂交技术鉴定 出烟草编码的rgs.caln基因产物能与PI/HC—Pro互作从而抑制基因沉默,这是第一个与RNA沉默有关的细胞 因子,它是一种钙调蛋白.研究还发现R帮.cain自身的过量达也能够抑制RNA沉默u引. 2.2黄瓜花叶病毒(Cucumbermosa/cvirus.CMV)编码的2b蛋白 与PI/HC.Pro同期发现的还有CMV编码的2b蛋白,它能够以依赖寄主的方式加强CMV的长距离运输, 对于RNA沉默的抑制作用只发生在生长点新生的尚未形成基因沉默的组织,而对于已形成沉默的组织并没 有作用.因此,它可能是通过直接干扰可移动沉默信号的活性从而阻止信号的系统性传播来抑制沉默的. 在双侵染烟草中,CMV的2b蛋白还能够辅助马铃薯Y病毒(PotatoYvirus,PvY) 的系统性传播,使原本在 PVY单侵染中只存在于外生韧皮部的PVY也能够分布于木质部薄壁组织和内生韧皮部细胞中.2b蛋白具 有一功能性的富含精氨酸的核定位信号,沉默被抑制的同时DNA甲基化也明显减少,这表明一种病毒抑制 :病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用23 第2期孙燕霞,等 子可针对RNA沉默途径的多个阶段起作用l1引. 2.3番茄丛矮病毒(TomatobushyStlUltvirus,TBSV)编码的P19蛋白 由11BSV编码的P19蛋白是第一个能直接与siRNA相结合从而阻碍siRNA整合进入RISC复合物,并因 此抑制沉默信号传导的抑制子蛋白.通过体外凝胶阻滞分析表明,P19蛋白能通过2nt长的3’一粘性末端与 化学合成的长21nt的dsRNA结合.相反,该蛋白对于21nt长的dsRNA的平齐末端,大分子量的dsRNA或单 链RNA(single—strandedRNA,ssRNA)的亲和力却很弱.这一特异性表明,与siRNA的结合有助于P19在体内 实现对RNA沉默的抑制.Calabrese等人分离得到了小鼠胚胎干细胞中P19与siRNAs的选择性免疫沉淀 物,这进一步表明P19的siRNA结合能力H. 2.4柑橘速衰病毒(Citustristezavirus,CTV)编码的P20,P23和CP蛋白 最近研究发现,具有20kb正义RNA基因组的CTV编码的三种蛋白质P20,P23和CP均具有沉默抑制活 性,其中P20和P23能够在农杆菌瞬时表达中抑制RNA沉默,而且能够反转已建立的RNA沉默;而P20和 CP还能够阻止RNA沉默信号的胞间传播.值得注意的是CP能够在不干涉胞内沉默的情况下抑制沉默信 号的胞间传播u. 2.5水稻矮缩病毒(Ricedwarfphytorevirus,RDV)编码的PnslO蛋白 上述均为ssRNA病毒中鉴定出来的抑制因子,曹雪松等人l9于2005年首次报道了从植物双链RNA病 毒中鉴定出来的RNA沉默抑制子——P璐10,由RDV中的S10编码.Pnsl0能够抑制由正义RNA链引起的 局部或系统RNA沉默,却不能干涉由dsRNA引发的沉默.Pnsl0还能同时加强基因的瞬时和稳定性表达,在 PVX异源体系中也是一种致病性决定因子.通过进一步研究表明,Pnsl0能针对沉默的上游途径——ds 的形成起作用,同时还能阻止沉默信号在源发区域和受体组织间的传播,而这些信号必须是由ssRNA触发 产生. 2.6非洲木薯花叶病毒(Africancassavamosaicvirus,ACMV)编码的AC2蛋白 环状单链DNA基因组病毒也能引发转录后基因沉默的典型代表是ACMV编码的AC2,它既是一种致病 因子,也是一种转录激活因子,定位于核内,能够调节病毒外壳蛋白和核穿梭蛋白的表达n.该蛋白与锌的 结合对于其沉默抑制特性来说是不可缺少的.能够同时抑制胞质内的转录后基因沉默和RNA指导的DNA 甲基化过程H引.在拟南芥原生质体中,ACMV的AC2能够激活30多种植物转录因子. 2.7几种动物病毒编码的RNA沉默抑制子 有趣的是,病毒学家们利用植物体系发现动物病毒也能编码产生具有沉默抑制活性的蛋白.但已报道 的具有抑制子活性的动物病毒蛋白明显比植物病毒抑制子少.首个动物病毒RNA沉默抑制子是由一种能 够侵染植物的动物病毒——兽棚病毒(Flockhousevirus,r-~v)编码的B2蛋白l1.接着又发现了一些dsRNA 结合蛋白,如牛痘病毒编码的BL3蛋白和流感病毒编码的NS1蛋白均能抑制RNA沉默.它们也是通过植物 农杆菌渗入法或昆虫细胞培养物发现的].特别是最近发现反转录病毒——灵长类泡沫病毒(Primate foamyvirustype1,PFv一1)能够编码一种潜在的沉默抑制子——,I,在人类细胞和植物拟南芥中均能发挥抑制 功能.由哺乳动物呼肠病毒编码的蛋白是一种能与dsRNA结合的沉默抑制子,同时也是一种外壳蛋 白l9.这些少量的例子对于进一步研究动物病毒基因组中具有沉默抑制活性的蛋白有很大帮助. 其它已知的植物RNA沉默抑制子还有:马铃薯x病毒(PotatovirusX,PVX)编码的P25运动蛋白,它能在 RdRP的帮助下干涉RISC的组装,从而在不影响siRNA的产生的情况下抑制了沉默的传播;芜菁皱缩病毒 (Turnipcrinklevirus,TCV)编码的结构蛋白CP则能够干涉dsRNA的产生过程,在沉默起始的下游起到抑制作 用.它能够同时抑制局部沉默和系统性沉默,但不能反转已建立的沉默;甜菜西方黄化病毒(Beetwestern yellowvirus,BWYV)编码的P0蛋白虽然能够强烈抑制侵染细胞内的RNA沉默并能有效增加病毒累积量,但 却不能控制起始侵染区域以外沉默状态的传递],这是沉默抑制与病毒移动不一定相关的典型例子. 事实上,病毒既然是专性寄生物,其成功侵染必须依赖于寄主的防御与病毒的反防御之间的严谨平 山东科学2O08年 衡.因此,病毒抑制子蛋白很可能就是为了尽可能适应寄主而演化来的,同时也存在一些情况使得病毒自身 降低沉默抑制子的表达量从而有利于病毒的成功侵染,如B唧的Po蛋白]. 3病毒编码RNA沉默抑制子的共同特征? 3.1病毒抑制子对RNA沉默的交叉抑制 已知的病毒沉默抑制子的一个共同特征是它们能在动物和植物细胞中抑制RNA沉默而不管它们的原 始寄主是什么.像之前提到的FHV的B2,流感病毒的NS1,牛痘病毒的E3L和PFV.1的Tas等均能有效抑制 植物系统中的RNA沉默.一些植物病毒起源的沉默抑制子像TRSV的P19,TCV的CP以及花生丛簇病毒 (Peanutclumpvires,PCV)的P15等在动物细胞中进行实验,只有PVX的P25不能正常发挥抑制子功能[25]. 鉴于RNA沉默在动物,植物中是一种保守的防御机制,那么可以推断抑制子在各自途径中是针对一些保守 的成分起作用的.但已知的抑制子蛋白大都具有较低的氨基酸序列一致性,只有在几个特别重要的功能域, 如dsRNA结合域和PAZ区域具有一些保守的氨基酸残基.虽然不能完全排除这些区域是沉默抑制子的目 标物,但抑制子通常是选择针对途径中的RNA组分,如dsRNA或siRNA起作用].典型例子是,TBSV的 P19能够直接与siRNA相结合,TCV的CP,牛痘病毒的E3L能够与dsRNA结合;绿萝潜隐病毒(Pothoslatent virus,PoLV)编码的P14能够与长,短ds(21,23nt,24,26nt)包括siRNA相结合,从而阻止发夹结构转录 物起源的siRNA的累积;FHV的B2也能够与长,短dsRNA相结合,这进一步证明了dsRNA和siRNA才是 沉默抑制子的目标物. 3.2沉默抑制子的抑制功能与病毒运动之间的关系 在植物中RNA沉默信号是通过韧皮部运输卸载从而进行胞间传播的,与之相应的,许多抑制子也是在 病毒长距离传播过程中实现其抑制功能.但是一些缺失了寄主特异性抑制子的植物病毒突变体在病毒长距 离运动的表型上却表现出相似性.既然这些基因的沉默抑制子活性已为人知,那么就有必要了解这些寄主 依赖型运动表型是否是沉默受到抑制的一种特征或者是与这些蛋白有关的其它一些功能.对于TEv来说, 病毒的长距离运动和PI/Hc.Pro的沉默抑制活动之间存在紧密联系],在TBSV的P19中也存在相似的联 系.因此,研究CP和P25的胞间运动功能与沉默抑制功能之间的联系是很有意义的,可以尝试用其它的沉 默抑制子来补偿胞间运动缺陷.例如CMV株系PePo的2b蛋白能够克服寄主防御机制中限制P,株系Tol 系统性传播的缺陷,使PVY能够分布于整株植株,包括外生韧皮部,木质部薄壁组织和内生韧皮部[1引. 3.3沉默抑制子能够针对miRNA途径起作用 由另一类小分子RNA家族——miRNA介导的RNA沉默途径在动物,植物体内能够调控发育型基因的 表达].在大多数真核生物中,miRNA是Dicer将一些大的发夹结构RNA切割加工而来,与siRNA的大小和 作用方式相似,也通过类似的复合体介导序列特异性降解互补的目标mRNA的 转录水平沉默,不同之处是 miRNA的主要目标物是各种发育过程中的关键因子.不同病毒的抑制子抑制miRNA途径的能力也各不相 同,它们能不同程度地影响miRNA的累积水平或功能,从而直接导致与miRNA作用有关的发育畸形[9],这表 明干扰miRNA介导的过程可能是许多病毒具有致病性的一个普遍特征.在抑制 Pro,P21和P19 子PI/HC— 的存在下可检测到miRNA合成或RISC合成途径中有一种正常表达的不稳定中间物——Hli的特异性 累积,而且P21和P19还能与miRNMmiRNA复合体和siRNA在体内相互作用.另外,P21能够在体外与虚 拟的miRNMmiRNA和siRNA相结合].总之,病毒沉默抑制子是研究siRNA和miRNA介导途径的有力 工具,还可以同时探究各种miRNA的功能. 3.4沉默抑制子对于病毒RNA和亚病毒寄生物的保护 Pruss首先发现了TEV的PI/HC-Pro蛋白有利于增加负链RNA病毒PVX的累积,这说明负链病毒RNA 对于RNA沉默的寄主防御更加敏感,而正链病毒RNA却不易被降解.同时还发现该抑制子能够引起CMV 基因组RNA累积水平的增加,但不影响其卫星RNA,这说明卫星RNA对于RNA沉默也具有较强的抵抗性, 第2期孙燕霞,等:病毒编码的RNA沉默抑制子的特征及其生物技术应用25 在TBSV的缺陷性干涉RNA中也存在有相似的结果.以上研究说明了它们比辅助病毒基因组成分更能抵抗 RNA沉默,也正是由于这些亚病毒RNA的高级结构限制了siRNA与RISC的整合,才导致了更多的高级结构 小分子RNA的累积.最近研究证明,与dsRNA的结合是抑制子实现沉默抑制功能所采取的普遍策 略. 4沉默抑制子的生物技术应用 4.1与扩增子的结合 生物技术的应用需要蛋白质的高效表达,这是研究目标产物的先决条件,但转基因的表达往往受染色体 位置效应的影响而不能达到最优化.因此尝试构建携带有目的基因复制型RNA病毒载体的转基因株系,这 一 技术称为”扩增子”].原理就是扩增子转基因的转录物能够起始病毒RNA复制和基因表达从而产生大 量目的产物.但由于所有转化突变型均发生了扩增子转基因的RNA沉默导致了该方法的失败,原因可能是 转基因植株细胞中所产生的复制中间物成为沉默防御机制潜在的触发子,从而引发了沉默现象的发生. 基于上述发现,可以推测与病毒抑制子的共表达有可能遏制转基因的沉默以达 到最初目的.为验证这 一 推测,Mallory等人将表达聊HC.Pro的转基因烟草植株与含有构建好的表达来自于Pvx基因组GUS报 告基因的扩增子植株进行杂交,抑制子与扩增子的结合显着提高了病毒累积量和基因表达量.在成熟植株 ,尽管病毒累积量增多,但 中,GUS蛋白的累积量达到总的可溶性蛋白的3%.而且 它们并不影响植株,不会 造成任何发病现象. 4.2农杆菌介导的瞬时表达系统的增强 与稳定表达相反,瞬时转基因表达是一种方便快捷,可重复性良好的目的蛋白表达方法.在植物中,重 组的根癌农杆菌可以用来瞬时表达已插入双元载体T-DNA区域的目的基因.将细菌培养液通过真空渗入 法导人叶片中,在T-DNA的逆转作用下,目的基因在植物细胞中得以进行异位表达.原则上这一体系可以 得到基因的高效表达,但实际上在渗入的2,3天后,这种蛋白异位表达便终止了,其主要原因还是发生了 RNA沉默.因此考虑通过农杆菌培养液与沉默抑制子共渗入来增加目的基因的表达量.利用TBSV的P19 蛋白与GFP,马铃薯Y病毒的NIa蛋白酶等多种蛋白共渗入,发现外源蛋白表达量能增加5O倍以上,当GFP 与P19共渗入时,GFP蛋白积累量高达总可溶性蛋白的7%].由于该方法简便有效,P19增强表达体系目 前已被应用于工业生产及鉴定大量蛋白质的生化特征而不再需要耗时的稳定性转化植株. 5结语 在过去的几年中,科学家们鉴定出了包括植物RNA病毒,DNA病毒和少量动物病毒在内的一些RNA沉 默抑制子,但对于其分子机制还不甚了解,在这方面还有很多工作有待进一步的研究,包括:阐明已发现的多 种类型抑制子对于病毒介导的沉默抑制作用的机制,鉴定出RNA沉默防御体系中潜在的作用因子,弄清楚 作为防御机制起作用的RNA沉默与植物自身抗病蛋白介导的防御反应是否存在内在的联系,建立起共同的 实验体系对沉默抑制子在抑制沉默的不同阶段进行定位和比较等. 参考文献: [1]TOMARIY,ZAMOREPD.Perspective:machinesfor[J].Genes,2OO5,19:517—529 [2]KAASNOOTJ,WF~rERHOUTEM,BERKHOUTB.RNAInterferenceagainstVirus es:StrikeandCounterstrike[J].NatBiotechno1. 2OO7,25(12):1435—1443. [3]HIRAIK,TANAIA,HAGIWARA-KOMODAY,eta1.TheImpactofRNASilencingo nSystemicInfectionofPlantViruses[J]. TanpakushitsuKahlsanKoso,2OO7,52(10supp1):1248—1253. [4]PADMANABHANC,RAMACHANDRANV,FRANCISO,eta1.EffectofTemperatureonGeminivin~InducedRNASilencinginPlants 山东科学2OO8年 1841. [J].Plant~ysiology,2OO5,138:1828— [5]VOINNETO.NON-~HAutonomousRNASilencing[J].FEBSLetter,2O05,579(26):5858—5871. [6]VANCEV.ReplieallionofPotatoVirusXRNAisAlteredinCoinfectionswithPotatoV/msV[J].Virology,1991,182:486—494. [7JCHAPMANEJ,PROKHNEVSKYAI,GOPINATHK,eta1.ViralRNASilenc~SuppressorsInhibittheMicroRNAPathwayat AnintermediateStep[Jj.Genes,2004,18:1179,1186. [8]VOINNETO.InductionandSuppression0fRNASilencing:InsightsfirmViralInfections[J].NatureRev.Genet,2OO5,6:206—220. [9JCAOXuesong,ZHOUPeng,ZHANGXi~umlng,eta1.Identification0fanRNASilencingSuppressorfromaPlantDouble-StrandedRNA Vims[J].Journal0fVirology,2OO5,79:13018—13027 [10JKASSCHAI7KD,CRONINS,CARRINGTONJC.GenomeAmplificationandLong-DistanceMovementFunctiomAssociatedwitIltlle CentralDomain0fTobaccoEtchPotyvirusHelperComponent-proteinase[J].Virology,1997,228:251—262. [11JSHIBOLETHYM,HARONSKYE,I,EIBMAND,eta1.TheConservedFRNKBoxinHC-Pre,aPlantViralSuppressor0fGale Silencing,isRequiredforSmallRNABindingandMediatesSymptomDevelopment[J].JV,200r7;8l(23):13135一铝. [12]SIZOLWENKOSIM,STEPHENES,TRENTONHS,eta1.cDICER-LIKE1ExpressioninP1/HC.ProRescues PhenotypicAnomaliesbutNotDefectsinMicreRNAandSilencingPathways[J].PlaintCellPreview,2O05,9:725—734. [13]BO-SONGR,TAKASHIK,TADASHIM,eta1.CucumberMosaicVirus2bProteinCo~atesforRestricted姗ofPotato VirusYinDoublyInfectedTobacco[J].Journal0fGeneralVirology,2OO4,85:3405—341 4. [14]LAKATOSIAr~mt,SZ1TITAGy6rgy,SII./4AVYDaniel,eta1.MolecularMechanism0fRNASilencingSuppressionMediatedbyp19 Protein0fTombusvirmes[J].EMBOJournal,2OO4,23(4):876—884. [15]SEGERSGC,VANW吼 R,ZI-IANGX,eta1.HypovimsPapain-likePreteasep29SuppressesRNASilencingintheNaturalFungal HostandinaHeterologousPlantSystem[J].EukaryotCell,2006,5(6):896—904. [16]LUR,FOLOMONOVA,SHINTAKUM,eta1.ThreeDistinctSuppressors0fRNASilencingEncodedbya20-kbViralRNAGenome [J].ProcNailAcadSciUSA,2OO4,101:15742—15747. [17]RAJESWARANR,SUN1THAS,SHWAPRASADPV,eta1.TheMungheanYellow MosaicBegomovirusTranscriptionalActivator ProteinTransactivatestheViralPmnm~-DrivenTransgeneandCausesToxicityinTmnsgenicTobaccoPlants[J].MolPlantMicrobe Interact.2aDec;20(12):1545—54. [18]VANITHARANIR,CHALLAPPANP,FAUQUETC.GeminvimsandRNAsilencing[J].TrendsPlantSci,2OO5,10:144—151. [19]Uwx,UH,LUR,eta1.IHterferonAmagonistProteins0fInfluenzaandVacciIliaVirusesaIeSuppressors0fRNAS~ncing[J]. ProcNatlAcadSciUSA,2OO4,101:1350-1355. [20]DeI8adiIloMO,SaenzP,SalvadorB,eta1.HumanInfluenzaVirusNS1ProteinEnhancesViralPathogenicityandActsasanRNA SilencingSuppressorinPh~[J].TheJournalofGeneralVirology,2OO4,85:993—999. [21]LECEIJ.W,RCH,DUNOYERP,AfarK,eta1.ACellularMicroRNAMediatesantivirulDefenseinHumanceus[J].Science,2OO5, 308:557,560. [22]BAYNEEH,RAKITINADV,MOROZOVSY,eta1.Cel1.to-CellMovement0fPotatoVirusXisdependentonsuppressionofRNA 3482. silencing[J].1:~ultJournal,2OO5,44:3471— [23]QUF,MORRISTJ.EfficientInfectionofN/cot/anaBentham/anabyTomatoBushyStuntVirusisFacilitatedbytheCoatProteinand Maintainedbyp19thm~hSuppressionofGeneSilencing[J].Plant-MicrobeInteract,2OO2,15:193—202. [24]PFEFFERS,DUNOYERP,HElMF,eta1.Po0fBeetWesternYe//o~V/msisasuppressorofposttranscriptionalgenesihncing[J]. Journey0fvirology,2OO2,13:6815—6824. [25]DUNOYERP,LECEIJJERCH,PAR1Z/YITOEA,eta1.P~bmstheMicroRNAandSmallInterferingRNAPathwayswithVirus- encodedSuppressors0fRNASilencing[J].PlantCell,2OO4,16:1235—1250. [26]KUNDUJK,BRIARDP,HILYJM,eta1.Role0fthe25-26ntsiRNAintheResistance0fTIarI8gcPrunu8DomesticaGI InoculatedwithHumPoxVirus[J].VirusGenes.2OO7,18:179,184.. [27]MERAIZ,KERFAVYIZ,MOLNARA,eta1.AureusvirusP14isanEfficientRNASilencingSuppressorthatBindsDouble-Stranded RNAswithoutSizespec~city[j].Journeyofvirology,2005,79:7217—7226.(下转第38 页) 38山东科学2O08年 4结论 本文针对K.均值算法初始点难以确定,聚类结果不稳定的问,提出了一种基于 密度方法选择初始中 心点的K.均值改进聚类算法,克服了传统K.均值算法的选点随机性对结果的影 响;另外,通过学习特征权值 改进聚类效果,克服了传统聚类算法中无关属性比较多,误差较大的问题[9],提 高了分类精度.并且本文将 改进的K.均值聚类算法应用在人事管理系统中,揭示了员工在不同指标下所取 得的成绩及其反映出来的所 具有的能力和知识水平之间的内在联系,对员工个体进行了合理分类和科学评 价,比原来的人事管理系统更 公正,更令人信服,对企业的人事管理也起到了更加有效的作用,有利于发现以及 提拔真正优秀的人才,促进 该企业更好地发展. 参考文献: ?P?罗宾斯.管理学[M].北京:人民大学出版社,1997:99—117. [1]斯蒂芬 [2]FAYYADU,REil~Ac,BRADLEYPS.InitializationofIterativeRefinementClusteringAlgorithms[R].MicrosoftResearchTechnical ReportMSR-TR-98-38,1998,23(9):84—95. [3]任江涛,施潇潇,孙婧吴,等.一种改进的基于特征赋权的K-均值聚类算法[J].计 算机科学,2OO6,33(7):186—187. [4]MITCHEILT1VI.MachineLeaming[~1].NewYork:McGraw-HillCompaniesIne,1997:230—247. [5]BASAKJ,DERK,PALSK.UnsupervisedFeatureSelectionUsingAneuro-FuzzyApproaeh[J].PattemRecognitionLetters,1998,19 (11):997—1006. [6]BASAKJ,DERK.PALSK.UmupervisedFeatureSelectionUsingaNeuro-FuzzyApproaeh[J].PattemRecognitionLetters,1998,19 (11):997—1006. [7]何坚勇.运筹学基础[M].北京:清华大学出版社,2OOO,301—306. [8]KANJ1W,OTAPAS,~IOUNTD1VI,etal,AnEflleie~tk-MeamClusteringAtgorithm[J].AnalysisandImole,r,e.tation,20Q2,24(7):881—892. [9]ALSAI~K,tlANKAS,SINGHV.AnEfficientk-meansClusteringAIgorithm[J].Proc.FirstWorkshopHigfIPerformanceDataMining, PattemRecognition,1999,19(5):859—871. (上接第26页) [28]KASSCHA1IKD,CARR1NGTONJC.Long-distanceMovementandReplicationMaintenanceFunetiomCorrelatewithSilencing SuppressionActivityofPotyviralHC-l’ro[J].Virology,2001,285:71—81.’ [29]HEL,HANNONGJ.MieroRNAs:SmallRNAswithaBigRoleinCeneRegulation[J].NatureRev.C,enet,2OO4,5:522—531. [30]YUB,CHAPNANEJ,YANGZ,eta1.TramgenieallyE)【pr嘟 ViralRNASilencingSuppressorsInterferewithMieroRNA 1VIethylalloninArabidopsis[J].FEBSLetter,2OO6,58O(13):3117—3120. [31]1VIOLNARAttila,CSORBATd~or,IAKATOSLorantLakatos,eta1.PlantVirus-DerivedSmallInterferingRNAsOrigin~e PredominantlyfromHighlyStructuredSingle-StrandedViralRNAs[J].JournalofVirology,2OO5,79:7812—7818. [32]1VI~RAIZsIlzsaIlna,KER6NYIZolt6n,KERT~SZS(1ndor,eta1.Double-StrandedRNABindingNayBeaGeneralPlantRNAViral StrategyToSuppressRNASilenei.g[J].JournalofVirology,2OO6,80(12):5747—5756.. [33]CSORBAT,BOVIA,DALMAYT,eta1.Thep122SubunitofTobaccolVIosaieVirusRep~easeisaPotentSilencingSuppressorand CompromisesbothSmallInterferingRNA-andmicroRNA-mediatedPathways[J].JViro1.2OO7Nov;81(21):11768—80. [34]ANGEILS1VI,BAULCONBEDc.ConsistentCeneSilencinginTransgenicPlantsExpressingPotatoVirusXRNA[J].E1VIBOJourna1. , 3684. 1997,16:3675— 【35JblAILORYAc,PARKSG,PIIlJSSGJ,eta1.TheAmplieon-PlusSystemforttigh-LevdExpressionofTransgenesin[JJ. Naturebiotechnology,2OO2,20:622—625. 【36]VOINNEr0,ROVASS,NESTERP,eta1.AnEnhancedTransientExpressionSysteminPlantBasedonSuppressionofCeneSilencing byP19ProteinofTomatoBushyStuntVirus[J].PlantJournal,2003,33:949—956.
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