钙离子通道阻滞剂对L

钙离子通道阻滞剂对L 经典论文 博硕论文 工, , , , , 、 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属 本学位论文是在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。 ,繇四惮劬色二一签章圈 博 硕 , , 论 文 ,年占具’,, 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特另,，，,,:,以标注等内容外，文中不包含其他人已发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名: 导师签章:，锄 ,,口年‖月, 日 经典论文 博硕论文 (,’ ’,,( ‘,， ‘ ? “ 博 硕 论 文 经典论文 博硕论文中文摘要…………………………………………………………………………,英文摘要…………………………………………………………………………,研究论文钙离子通道阻滞剂对,(型钙离子通道失活作用机制的相关研究 刖舌…………………………………………………………………………萏 前言…………………………………………………………………………, 材料与方法…………………………一………………………………一, 结 果………………………………………………………………………?,, 附 , 附图………………………………………………………………………?,表…………………………………,……………………………………,, 讨论………………………………………………………………………?,, 结论………………………………………………………………………?,, 参考文献……………………………………………………………………,, 博 硕综述高阈值电压门控型钙离子通道失活机制的研究进展……………??,, 论 文致谢……………………………………………………………………………,,个人简历…………………………………………………………………………??,,经典论文 博硕论文 博 硕 论 文 经典论文 博硕论文 中文摘要 钙离子通道阻滞剂对,(型钙离子通道失活 作用机制的相关研究 摘 要 目的:钙离子通道是一组跨越细胞膜的蛋白质大分子，它严格控制着钙离子进入细胞的过程，产生维持细胞生理必需的电化学信号，在细胞病生理学方面有很重要的作用。 钙离子通道阻滞药(,,,;,,, ,,,,,,, ,,,;,,,，,,,)可以选择性地抑制,,,，经细胞膜上的钙通道进入细胞内，具有松弛血管平滑肌，减少末梢血管阻力，从而降低血压的作用，但脑、冠状动脉和肾血流量不减少。同时，此类药物也存在负性肌力作用，可抑制心肌的收缩力及传导。 ,,,种类很多，主要选择性地作用于,。型钙离子通道(,(,,,, 博 ;,,;,,, 硕;,,,,,,,，,,,,)，结合部位在,;，;亚单位，并根据其具体结合点，又分 论 文为三个亚娄:二氢吡啶类、地尔硫卓类和苯烷胺类。 二氢吡啶类药物(,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,)具有广泛的应用范围，例如在血管舒张、支气管扩张、抗动脉硬化、抗糖尿病、抗基因诱变以及抗惊厥等方面均有明显的药理学作用。最初,,,,是作为心血管疾病的治疗药物而被广泛应用，目前已逐渐在其他方面发挥其药理作用。比如，尼莫地平作为抗局部缺血的药物应用于阿兹海默病的治疗中，除此 之外在治疗痴呆、偏头痛及脑出血后的血管痉挛等方面也均有作用。硝苯地平也可用于治疗偏头痛、肥厚性心肌病以及雷诺现象等。同时硝苯地平还可应用于糖尿病性神经病变的治疗。 如何在利用此类药物最大功效的同时尽可能降低其副作用，对于临床治疗有着极其重要的意义。因此，钙离子通道的内部转化机制以及钙离子通道阻滞剂的作用机制成为本课的研究重点。 一般,,,,包括三种状态，即开放状态(,,,, ,,,,,， ,)，失活状态 (,,,;,,,,,,,, ,,,,,，，)以及关闭状态(;,,,, ,,,,,，,)。其中失活过程又包括电压依存性失活(,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,，,,，)及钙离子依存性失活(;,,;,,, ,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,。,,，)两种。通道动力学研究显示 经典论文 博硕论文 中文摘要,,,,类药物主要通过稳定通道的失活状态从而对通道发挥抑制作用，但其具体的机制尚不清楚。 ,,,,,,,综合征(,,,,,,, ,,,,,,,,，,,)是一类由钙离子通道损害导致的先天性疾病，有研究表明其,,,,的，(，， ,,,,,,部位的氨基端即,,;亚单位的第,,,位氨基酸一甘氨酸突变成了精氨酸(,,,,,)。这一突变型与野生型,,,,比较，主要差别在于,,，的速率显著减低。本课题主要以研究,(型钙离子通道失活状态的详细机制为突破口，通过使用基因突变型(,,,,,,, ,,,,,,,, ,—,,,, ;,,;,,, ;,,,,,,，,,—,,,,)通道与野生型(,, ,,,,,, ;,,;,,, ;,,,,,,，,,,,,,,),, ,,,, 通道进行对比，对通道的失活过程进行定性分析，并探讨二氢吡啶类药物对通道失活的具体作用机制。 方法: ,通道蛋白的制备 ,(, ,,,,的,,,及,,亚单位的制备 博 硕 ,(, ,,,,的,【,;亚单位的突变型,,,,,的制备 论 文,细胞及,,,,蛋白质表达的准备,(, ,,,,,,细胞的培养,(,制备,,,,的,甜及,,亚单位两者均稳定表达的细胞系,(,野生型及突变型,,,,的表达 ,应用膜片钳通道的各项数据,(,电极管的拉制,(,细胞内液及各种细胞外液配制,(,实验程序设定,(,全细胞模式下记录通道的各项数据,膜片钳获得数据的分析 (,(, ,,，的分析,(, ,,;,,,,,的分析,(, ,,,,,,,,,,的,,,,(,,,,,,,,曲线测定,统计学处理 结果: 经典论文 博硕论文 中文摘要 建立了同时表达,,,’及,,亚单位两种蛋白质的稳定细胞系。很大程度上减小了因多种蛋白质同时转染几率的不同而造成的误差，使得数据的来源更加可靠。通过使用此稳定细胞系，分别瞬时转染绿色荧光蛋白(,,,)与野生型,,,,或突变型,,,,，从而将,,,,的,个主要亚单位。【，;，,,,,及,,同时表达，得到完整的,型钙离子通道电流。此后，在膜片钳全细胞模式记录试验中得到的电流经过细胞外液改为钙通道阻断剂氯化镉之后完全消失，进一步验证实验所记录的电流正是,型钙离子通道的电流。 所记录数据的分析:所有数据均应用，,,,,(,分析软件进行的分析计算，结果如下:,失活(,,,;,,,,,,,,)的相关分析,(, ,,,(,) 时间常数以,来表示，代表通道失活的速率，其值越小，速率越快，反之亦然。,,,,有快失活及慢失活两种过秸～，两种通道的社,根据双指数函数(,,,,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,)条件经,,线拟合(,,,)后得出。其中野 博 硕生型,,,,的下,,,,为,,,(,, ,,，突变 型,,,,则为,,,,(,, ,,。野生型 论 文,,,,的, ,,,,为,,,,(,, ,,，突变型,,,,则为,,,,(, ,,。,(, ,,及,,, ,,及,,,分别代表通道失活开始, ,及,, ,后残余的未失活部分占总体电流量的比例。野生型,,,,的,,及,,,分别是,(,,和,(,,,，而突变型,,,,的,,及,,,则分别是,(,,和,(,,。,(, ,,,,,,,, ,,，,。，,, ,,,,,,,, ,,，,。及,分别代表在失活过程中快失活，慢失活以及未失活的部分所占整体的比例。野生型,,,,的,,,,,,,, ,,’,。及,分别为,(,,，,(,,及,(,,。突变型,,,,的,,,,,,,, ,,，,。及,,则分别为,(,,，,(,,及,(,,。,复活(,,;,,,,,)的相关分析,,,,复活过程也是由快复活及慢复活两种成分组成:,(, ,,,(,) 同上也是指时间常数。野生型,,,,的,同上根据双指数函数条件经曲线拟合后得出。其中, ,,,,为,(,,,，, ,,,,为,,(,,,。而突变型,,,, 经典论文 博硕论文 中文摘要的，;则是根据单指数函数(,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,;,,,,)条件经曲线拟合后得出的，仅有, ,,,,一项，其值为,,(,, ,。,(, ,,,,,,,, ,,及丸 ,,,,,,,, ,,及,。代表意义同上。经计算得出，野生型,,,,的,,,,,,,,,,及,分别是,(,,及,(,,。而突变型,,,,的,,,,,,,, ,。值为,(,,，,,,,,,,, ,,不存在。,硝苯地平的剂量反应关系曲线(,,,,(,,,,,,,, ,,,,,) 细胞外液成分加入硝苯地平，浓度分别为,(, ,,，, ,,，,, ,,，,,,,,，,州以及,,州每毫升。记录这些条件下,,,,的电流抑制率，最后得出硝苯地平对于野生型及变异型,,,,的浓度反应关系曲线。两条曲线的半数抑制浓度(，,,,)差别不大，均小于, ,,,,,,,。说明硝苯地平主要是通过作用于,,,,的慢失活状态而发挥作用的。 结论:,突变型,,,,与野生型,,,,相比较，快失活成分消失，慢失活成分仍 博 硕然残留。 论 文,突变型,,,,与野生型,,,,对硝苯地平的敏感性无显著差别。,硝苯地平主要通过作用于通道慢失活过程，达到抑制,,,,墓πА?关键词:,型钙离子通道;,,,,,,,综合征;,,,,,;电压依存性失活;钙离子通道阻滞剂;膜片钳 经典论文 博硕论文 英文摘要 ,,, ,,,,, ,, ,,,,;, ,, ,,,;,,, ,,,,,,, ,,,;,,, ,, ，,,;,,,,,,,, ,, ,?,,,,, ,,,;,,, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,:,,,;,,, ;,,,,,,, ,,, ;,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,, ;,,,,,, ,,, ,,,;,,, ,, ;,,;,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,;,,,,,,, ,,,,;,,,，,,, ;,, ,,,,,;, ,,,;,,,—;,,,,;,, ,,,,,,, ,,,;, ,,, ,,;,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ;,,,,( ,,,;,,, ,,,,,,, ,,,;,,,(,,,),,, , ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,;, ,,,;,,;,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,;,,,,,,, ,,, ;,,;,,, ;,,,,,,(,,,, ,,, ;,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,, ,,,;,,，,,;,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,;,,,, ,,,,,,,,;,，,,, ,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,(,,,,,,,,，,,, ,,,,,,, , ,,,,,,,, ,,,,,,,,;,,,,;, ,,,, ,,,,,,,, ;,,,,,;,,,,,, ,,, ;,,,,;,,,, ,, ;,,,,,; ,,,;,,,( 博 硕 ,,,,, ,,, ,,,,,,, ;,,,,,, ,, ,,,，,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,;, ,, 论 ,,,,,, 文;,,;,,, ;,,,,,,,(,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,, ,, ,,, ,【,; ,,,,,,, ,;;,,,,,, ,,,,,;, ,,, ,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,;,,,,,,:,,,,,,,,,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,( ,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,),,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,，,,, ,,,,,,,，,,,,,,,;,, ,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,;,,,;,,,,,，,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,，,,,,—,,,,,,,,，,,,,—,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,—;,,,,,,,,, ,,;( ,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ;,,,,,,,,;,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,，,,,,,,,,,,, ,,,, , ,,,,;,, ,,,,,;,,,,,,(,,, ,,,,,,,，,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,, ,,,,(,,;,,,,; ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,’, ,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,，,,,,,,,, ,,, ;,,,,,,, ,,,,,,,,,,; ,,,,,,,,,(,,,,,,,，,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,，,,,,,,,,,,,; ;,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,’, ,,,,,,,,,,;,, ;,,,, ,,,, ,, ,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,( , ,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,,,,,, ;,,,,,,, ,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,, ,,,,;,,(,,,,,,,,,(,,,,, ,,,,,,,,,; ,, ;,,;,,,;,,,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,, ,,;,,, ,,,,,,;, ,,,,,,,,,,( , 经典论文 博硕论文 英文摘要 ,,,,,,,,,，,?, ,,, ,,,,, ,,,,,,:,,,,(,)，,,,;,,,,,,,,(，),,, ;,,,,(,),,,,,(，,,;,,,,,,,, ;,,,,,,, ,,,,,,,—,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,(,,，),,,;,,;,,,(,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,(,,，)(,,,,,,;, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,，(,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,,, ,,,(,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, , ,,,,,,,; ,,,,,, ,,;,,,,,,, ;,,,,, ,,,,,,,,,,,,, , ,,,,,,,,(,,, ,,),, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,十;,,,,,,—,,, ,(,(,,, ,,， ,, ,,—,,,, ,, ,,,,,,,;,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,,,,, ,,,，,,,( ,, ,,,, , ,,,,,,,, ,,;,,,,,, ,, ,,，，,, ,,,,,,,, ,,, ;,,,,;,,,,,,,;, ,,,,， ,,, ,,,,,,,,,,,, , ,,,,,;,,,, ,,;,,,,,, ,, ,,, ,, ;,,,,,,,, ,,—,,〔’,,,,, ,,,,〕〔’,,( ,,,,,,,:, ,,,,,,,,,,, ,, ;,,,,,, ,,,,,,,,:,,,，,, ,,,,,,, ,,, , ,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,; 博 硕 ,,,,,, (,,, ,, 论, ,,,,,, ;,,,, ,,(((((((((((((— ,,, ,,;,,,,,, ,, 文 ,,匣, ;,,,,,,,,, , ,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,, , ,?,, ,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,(, ,,,,,, ;,,, ,,,, ,, ,,, ,,, ,, ,,,,,,, ,,, ;,,,,,,;,,, ,, ,,,,,,, ,,—,,,, ,,, ,,,,,;, ,;,,,,,,,(肝,,,, ,, ,,,;:;,,, ,,,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ;,,,,,,,(, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, , ,,;,, ,,,;,,,,, ,,, ,,,(，,,,,;,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,, ,,,,,(,,, ,,,,,;,, ,, ,, ,,,,,, ,,,,,(,,, ,,, ,,,, ,,,;, ;,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,, ,, , ,,,,,(;,,, ,,,,(, ,,，，,,;,,,,, ,, ,,,, ,,, , ,,,,—,,,,,,,, ;,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,;,,,,,, ,, ，,,,,(, ,,,,,,,,(, ,, ,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,, , ,(, ,,,,,,,,( ,,,,,,,: 阮,,,,,,,,,,, , ,,,,,, ;,,, ,,,, ,, ,,, ,,, ,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,,;,,,,,,,(,,,,, ,,,,,, ;,,, ,,,, ,,, ,,;,,,,,, ,,,,, ,, ,,,, ,, , ,,,,, ;,,,,,,(,,,,,;,,,,,,,;, ,, ,,,;,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,: , 经典论文 博硕论文 英文摘要。,?,,,,:,,,,,,(,,,,，,,,,,,,(,,,,，,,,,(,,，，也,,,(,,,，,,,,,,,, ,,,,(,,，,,,,,,,, ,,,,(,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,(,,( ,,—,,,,:,,,,,,,(, , ,,，,,,,,,,(, ,,，,,,,(, ,，,,,,,(,,，,,,,,,,, ,,,,(,,，,,,,,,,, ,,,,(,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,(,,( ,,,,,;,,,,,,,;, ,, ,,;,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,,,: ,,,,,,,:,,,,(,,,，,,,,,(,,,，，沁,,,,,, ,,,,(,,，,,,,,,,, ,,,,(,,( ,,—,,,,:,, ,,，,,,,,(,,,，,, ，沁,,,,,, ,,，,,,,,,,, ,,,,(,,( ,, ,,,,, ,,,,,,,,, ;,,;,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,，,,,,—,,,,,,,, ;,,,, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,(,,,,,,,,,,,,，,,, ,,,,,,, ,,,,,, ,, ，,,, ,,,, ,;？,,,,,，,,,,, , ,,,,,,,(,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, , ,,, ;,,,,,,( ,,,;,,,,,,: ,,;,,,,,,,, ,, , ,,,,,,,, ,,,, ,,—，,,, ,,,;, ,,, 博 ,,, ,,,;,,,,,,,, ,,,,,—(,,, ,,,, 硕 ,,, ,,, ,,, ,,,, ,,,，,,—,,,, ,,,, ,,, , ,,,, ,,,;,,,,,,,,，,,, ,, 论 文 ,, ,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,( , ,, ,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,, ,,,，,?, ,,, ,,(，,,,( , ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,【’,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,;,,,,,,,, ,, ,,, ;,,,,,,( ,,, ,,,,:,—,,,, ,,,;,,, ,,,,,,,(,,,,);,,,,,,, ,,,,,,,,; ,,, ,,;,,,,,,, ,,,,,,,,, ，,,;,,,,,,,,?,，);,,,;,,, ,,,,,,, ,,,;,,, (,,,);,,,;, ,,,,, , 经典论文 博硕论文 研究论文 钙离子通道阻滞剂对,(型钙离子通道失活 作用机制的相关研究 ,?上,,,,。 刖 置 ,(型钙离子通道(,,,,)是一组由形成通道孔腔主体的仅,;亚单位以及辅助的,,和仪,,亚单位所构成的大分子通道蛋白质【,】，对于维持机体细胞正常功能有很重要的作用，目前为止有关研究也不计其数。其中对于钙离子通道阻滞剂(,,,)作用机制的研究已有很大的进展。钙离子通道阻滞剂主要选择性地作用于,(型钙离子通道，并根据其具体结合点，又分为三个亚类:二氢吡啶类，地尔硫卓类及苯烷胺类。这三类药物的主要结合位点均集中位于通道,【,。亚单位，，，，，,区域(,,,,,, ，，，，，,)的跨膜片段,,(,,,,,,, ,)上【,,。(,,,(,) ,(型钙离子通道在动作电位(,;,,,, ,,,,,,,,,，,,)过程中，先由 博 硕静息状态(,)转化为开放状态(,)，此后又转化为失活状态(，)。 论 文钙离子通道阻滞剂与这三种状态均可结合，但是一般在失活状态下的结合率远远高于其他两者【,,。(,,,(,),型钙离子通道包括两种失活状态一电压依存性失活(,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,，,,，)及钙离子依存性失活(;,,;,,, , ,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,，,,，)。钙离子通道阻滞剂主要通过影响前者而发挥作用。 动作电位是,,,,,(,,,,形曲线，,,,对于异常延长的,,的,,,,,和,,,,部分能产生均等抑制【,】。由于,,的,,,,,部分与兴奋收缩偶联密切相关，由此,,,存在一定负性肌力作用。因此如果应用钙离子通道阻滞剂时，能仅选择性地抑制,,的,,,,部分，把负效应最小化的同时有效缩短动作电位幅度就能达到最理想的治疗效果。而,,,对通道开放状态亲和力在这一过程中起着重要的作用。本研究应用影响,,，的突变型,,,,,钙离子通道【,〕(,,,(,,，与野生型钙离子通道对比计算，旨在得出对,,,与通道各状态的亲和力的评价，并最终建立一个合理的工作模型以阐释,,,作用的详细机制。 经典论文 博硕论文 研究论文 材料与方法,材料,(,细胞株和质粒,,, 本实验所用的,,,,,,细胞株为日本信夕十，大学神经可塑学实验室提供;,,,,野生型,,;亚单位质粒由美国华盛顿大学,(,(,,,,,,,,,教授提供。,,,,的突变型,。。亚单位，辅助的,,,及伐,,亚单位质粒均由本实验室制备。,(,主要试剂,,,及,,,,,,,,,,,反应引物见表,( ,,,,,,，日本反应催化酶及限制性内切酶见表,(,,,,,,，日本转染用试剂,,,,,,,;,,, ,,,(,,, ,,,，美国膜片钳用液配制用试剂 和光工业，日本培养用,,,,，,,,,,,,,,(, 博 ，,,,,,,,,,，美国 硕,,,,,,,,,, ,,,,，(, 新田,,,,,,，,，日本 论 文,,。鼠抗，,,抗体 ,,,,,,，台湾,;,,兔抗，,,抗体 ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,，美国质粒重组用,,;,,,:,,,,,一,，,;,,,,(,(，),,,,,,及,;,,,,(,((),,,, ，,,,,,,,,,，美国,,,,,,, ,,,,试剂盒 ,，,,,,，德国,,,,,,, ,,,,试剂盒 ,，,,,,，德国,,, ,,,,,,, ,,,,,试剂盒 ,，,,,,，德国,,, ,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,试剂盒 ,, ,,,,,,;,,,，英国,(,主要仪器设备,,,,,,;, ,,,,膜.