维生素类药物的分析

维生素类药物的 第九章 维生素类药物的分析 [基本要求] 一、掌握维生素类药物的结构特点与分析方法之间的关系。 二、掌握维生素类药物的鉴别原理与方法。 三、掌握三点校正法测定维生素A的原理、测定方法与计算方法。 四、掌握维生素D的HPLC含量测定法和维生素E的GC含量测定法。 五、掌握维生素B非水溶液滴定法与维生素C碘量法的测定原理、方法与1 注意事项。 六、熟悉本类药物其他的含量测定方法。 七、熟悉本类药物杂质检查方法。 八、了解维生素A三点校正法的推导过程。 [重点、难点、基本概念] 一、结构特点与分析方法之间的关系 (一)维生素A CH CH 33 CH3 CHOR 2 CH 3 CH 3 1(共轭多烯结构:具有紫外吸收，可采用紫外吸收光谱法进行鉴别，采用紫外分光光度法进行含量测定。天然维生素A是全反式维生素A。 2(结构式中R的不同，可以形成维生素A醇或其酯。临床上多用其醋酸酯和棕榈酸酯。 (二)维生素D CH3CH3 H CH3 H CH3 H HCH3CHCH33CH3 CH3H CH2CH2 HHHOHOHH 维生素D 维生素D 2 3 1(开环的甾体:具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。 2(手性碳原子:具有旋光性，可用于鉴别。 3(多烯:可进行紫外检测。 (三)维生素E CH3 CHCHCH333OCH3CH3CH3 CCHO3 CHO3 维生素E 1(芳环:具紫外吸收，可用于鉴别。 2(乙酰化的酚羟基:水解后生成生育酚，可发生三氯化铁反应和氧化还原反应，用于鉴别。 (四)维生素B 1 HCN3SNH3OH NN+Cl,HClCH3 维生素B 1 1(氨基嘧啶环和噻唑环:具有硫色素反应，此反应专属性强，用于鉴别和含量测定。具杂环的沉淀反应，与生物碱沉淀剂反应，产生沉淀，用于鉴别与含量测定。 2(共轭体系:具紫外吸收，用于含量测定。 3(盐酸根:呈氯化物的反应，用于鉴别。 (五)维生素C H OHHOO O OHOH 维生素C 1(烯二醇结构:具有强环原性，可发生氧化还原反应，用于鉴别和含量测定。 2(与糖类似的结构:具有糖类似的性质和反应，可用于鉴别。 二、鉴别方法 (一)化学鉴别法 药物 反应名称 试剂 现象 维生素A 三氯化锑反应 饱和无水三氯化锑 即显蓝色，渐变紫红 (Carr-Price反应) 的无醇氯仿溶液 维生素D 醋酐-浓硫酸 醋酐、硫酸 D黄 红 紫 绿。 2 反应 D黄 红 紫、蓝绿 绿 3 三氯化锑反应 三氯化锑试液 即橙红色，渐变粉红 三氯化铁反应 三氯化铁试剂 橙黄 维生素E 硝酸反应 硝酸 橙红 水解后的三氯 2，2-联砒啶 血红 化铁反应 三氯化铁 维生素B 硫色素反应 铁氰化钾试液 强烈的蓝色荧光，酸化后 1 荧光消失， 再碱化后，荧光复现 沉淀反应 碘化汞钾 淡黄色沉淀 碘 红色沉淀 硅钨酸 白色沉淀 苦酮酸 扇形白色结晶 氯化物反应 硝酸铅反应 氢氧化钠、硝酸铅 黑色沉淀 维生素C 硝酸银反应 硝酸银试液 黑色沉淀 2，6。二氯 2，6。二氯靛酚 试液颜色消失 靛酚反应 试液 其他氧化剂 亚甲蓝或高锰酸钾 试剂褪色 的反应 碱性酒石酸铜 砖红色沉淀 磷钼酸 钼蓝 糖类的反应 三氯醋酸、吡咯 50?产生蓝色 (二)紫外-可见吸收光谱法: 药物 溶剂 浓度 判断 维生素A 无水乙醇-盐酸 在300,400nm范围内扫描，应 仅在326nm初有单一吸收峰;经 水浴加热30秒，应在348、367、 389nm处有三个尖锐的吸收峰 维生素E 无水乙醇 1% 在284nm处有最大吸收，254nm 处有最小吸收 维生素C 0.01mol/L盐酸 在243nm处有唯一的最大吸收 维生素D 96%乙醇 加乙醇和85%硫酸，D显红色，在 570nm处有最大吸收，D显黄色， 在495nm处有最大吸收 (三)TLC法 1(维生素A:比较供试品溶液和对照品溶液所显蓝色斑点的位置。 2(维生素E:在的条件下进行试验，α-生育酚、α-生育酚醋酸酯、α-生育醌的R值分别为0.5、0.7、0.9。 f (四)旋光法--维生素D比旋度的测定 药物 溶剂 浓度 比旋度值 注意事项 维生素D 无水乙醇 40mg/ml +102.5?,+107.5? 应于容器开启 2 维生素D 无水乙醇 5mg/ml +105?,+112? 30分钟内取样， 3 在溶液配制后 30分钟内测定 三、杂质检查 1(中杂质的检查 药物 检查项目 检查方法 维生素E 酸度 以NaOH滴定液(0.1mol/L)体积控制 游离生育酚 硫酸铈滴定法 维生素C 有色杂质 分光光度法 四、含量测定方法 (一) 维生素A的测定 维生素A含量测定方法有紫外分光光度法和三氯化锑比色法，前者是法定方法，后者多用于食品或饲料中的维生素A的测定。中国药典采用三点校正法。 1(为何要采用三点校正法, 维生素A原料药中常混有杂质，如维生素A、维生素A、维生素A的氧化产23 物、鲸醇以及维生素A的异构体，这些杂质在维生素A的最大吸收波长附近 有吸收，干扰维生素A的测定。采用三点校正法可以消除这些杂质的干扰。 2(测定原理 该法基于两点: 1)在310,340nm范围内，杂质吸收呈一直线，且随波长的增大吸收度下降。 2)物质对光吸收呈加和性 波长的选择:一点选在维生素A的最大吸收波长处(λ)，其它两点选在λ11的两侧。第一法(等波长差法)的三个波长为λ=328nm、λ=316nm、λ=340nm;123第二法(等吸收比法)，使A=A=6/7A，则三个波长为λ=325nm、λ=310nm、λ2λ3λ112λ=334nm。 3 3(测定方法 首先判断用哪个吸收度进行含量计算。 第一法:供试液浓度为9,15IU/ml，溶剂为环己烷，在300、316、328、340、360nm五个波长处测定吸收度。 1)最大吸收波长在326,329nm之间，计算吸收度比值A/A，并与规定值i 328相减，差值不超过?0.02，则用A计算含量: 328 1%A1%E,IU/g,E，1900cm1cm1CL IU/丸,IU/g，g/丸,IU/g，W IU/丸标示量%,，100%示量 A，D，1900，W标示量%, 或: W，100，L，标示量 2)如果最大吸收波长在326,329nm之间，5个波长下的差值有一个或几个超过?0.02，这时先计算A(校正): 328 A(校正),3.52(2A,A,A) 328328326340 A(校正),A328328再计算 A328 若所得的数值在?3%，则仍用A计算含量; 328 若所得的数值在-15%,-3%之间，则需用A(校正)计算含量; 328 若所得的数值小于-15%或大于+3%，或最大吸收波长不在326,329nm之 间，则应采用第二法(皂化法)测定。 4(讨论 1)维生素A醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法(即代数法)推导而来:维生素A醇的吸收度校正公式是用相似三角形法(几何法或6/7定位法)推导而来。 2)在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。如果仪器波长精度不准确时，会产生较大误差。因此，在测定前务必要校正波长，并可用全反式维生素A进行测定，比较测定结果和比值是否与对照品相符合，以进一步核对仪器波长是否准确。测定的样品应不得少于两份。 3)中国药典(2000年版)收载的维生素A胶丸、维生素AD滴剂、维生素AD胶丸等均采用三点校正法测定。 (二)维生素D 中国药典(2000年版)采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。 第一法:用于无维生素A醇及其它杂质的干扰的情况，步骤如下: 1(系统适用性试验:测定重复性和分离度。 2(测定校正因子:f =(Am-fmA)/(Am) 2Sr1Sr1r1S 3(含量测定:m=(f A+ f A)m /A i1i12i2SS 第二法:用于有杂质的干扰的情况，步骤如下: 1(皂化处理:皂化、乙醚提取、洗涤提取液、蒸除乙醚、制备供试液A。 2(净化:供试液A经液相色谱分离，准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液，制备成供试液B。 3(含量测定:取供试液B按第一法测定。 第三法:用于经第二法处理后仍有杂质的干扰的情况，步骤如下: 1(制备供试液C。 2(含量测定:在第一法的色谱条件下，交替精密进样对照液和供试液C，按外标法定量。 (三)维生素E 测定维生素E的法定方法是GC法，另外还有HPLC法、铈量法、比色法和荧光法。 1(采用GC的优点:GC法具有高度选择性，可分离维生素E及其异构体，可选择性地测定维生素E。 2(测定步骤: 系统适用性试验:测定理论塔板数(按维生素E计算) 测定维生素E与内标物(正三十二烷)的分离度 Asmsf,测定校正因子: Axmx Axm,f， 测定含量: Asms (四)维生素B1 维生素B及其制剂的测定方法有非水溶液滴定法、紫外分光光度法、硅钨酸1 重量法和硫色素荧光法。中国药典(2000年版)采用非水溶液滴定法测定原料药，采用紫外分光光度法测定片剂和注射液。 1(非水溶液滴定法:分子中有两碱性基团，均可与高氯酸作用，其摩尔比为1?2，分子量为337.27，滴定度为16.86mg/ml。 2(紫外分光光度法:用盐酸溶液(9?1000)将维生素B片粉中的维生素1 B溶出，经过滤、稀释后于246nm测定吸收度，计算含量。 1 A，D，W 标示量%,1%E，100，W，标示量cm1 (五)维生素C 维生素C可采用碘量法、2，6-二氯靛酚法、比色法、紫外分光光度法和HPLC法。其中碘量法是维生素C原料及其制剂的法定方法。 1(碘量法 原理:维生素C具有较强的还原性，在醋酸性条件下，可被碘定量的氧化。 讨论: 醋酸的作用:维生素C再酸性介质中受空气中氧的氧化速度减慢。加新沸过的冷水:减少水中溶解的氧对测定的影响。 2( 2，6-二氯靛酚滴定法 原理:维生素C具有较强的还原性，在酸性条件下，可被2，6-二氯靛酚氧化。 指示终点方法的特点:在酸性溶液中，氧化型的2，6-二氯靛酚为红色，当与维生素C反应后，即转变为无色的酚亚胺(还原型)，因此，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定至溶液显玫瑰红色时，即为终点，无需另加指示剂。 [及答案] 一、练习题 [A型题] 1. 维生素B的鉴别方法是 1 A.三氯化铁反应 B. 硫色素反应 C. 柯柏反应 D.与碱性酒石酸铜试液反应 E. 双缩脲反应 2. 维生素E《中国药典》规定的含量测定方法为 A.非水溶液滴定法 B. 旋光法 C.HPLC法 D.紫外分光法 E. GC法 [B型题] A. 亚消基铁氰化钠反应 B. 硫色素反应 C.硝酸反应 D. 三氯化锑反应 E. 硝酸银试液的反应 1. 维生素C 2. 维生素E 3. 维生素B 1 4. 维生素A [X型题] 1. 用碘量法测定的药物有 A. 醋酸地塞米松 B. 丙酸睾酮 C. 维生素C D. 硫酸阿托品 E. 维生素C注射液 2. 可用紫外分光光度法测定含量的药物有 A. 维生素A丸剂 B. 丙酸睾酮 C. 维生素A D. 硫酸阿托品 E. 维生素B片 1 二、答案精讲 [A型题] 1. B 硫色素反应是维生素B的特殊反应, 可用于鉴别。故选B。 1 2( E 维生素类药物的含量测定，《中国药典》只规定维生素E的含量测定， 采用GC法。故选E。 [B型题] 1.E 2.C 3.B 4.D [X型题] 1. C E 维生素C及其注射剂的含量测定方法均采用碘量法，故选C，E。 2( A C E 维生素A及其制剂和维生素B片的含量测定均采用紫外分光光度法，故选1 A，C，E。