韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究

韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究 韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究 作者: 黄锁义 林丹英 尤婷婷【摘要】 目的探讨韭菜总黄酮的提取、鉴别及对羟自由基的清除作用，以充分利用韭菜植物资源，避免资源的浪费。方法采用超声波乙醇浸提法从韭菜中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量，用韭菜总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.195 0 mg/ml，回收率为100%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取韭菜黄酮类物质的有效途径。韭菜总黄酮提取液对Fenton体系产生的?OH自由基有很好的清除作用。 【关键词】 超声波提取 韭菜 总黄酮 自由基 清除 Abstract: ObjectiveTo study the extraction of total flavanone of Chinese chives and its effect on hydroxyl radical. MethodsThe flavonoids were extracted from Chinese chives with ultrasonic wave and ethanol extraction.Spectrophotometry was used to determine the flavanone of Chinese chives. The effect of extracts from Chinese chives on hydroxyl radicals was studied( ResultsBy this method the content of the total flavanone of Chinese chives was C=0.1950 mg/ml and the rate of recovery was100%. Conclusion This text provides the extraction and purifying methods to get the oute and the purity of the flavanone is high .This method is a purely physical process and has no pollution. It is an Total flavanone from ideal way to extract the flavanone of Chinese chives. Chinese chives have scavenging effects on hydroxyl radicals. Key words: Ultrasonic wave treatment; Chinese chive; Total flavanone; Hydroxyl radical; Scavenging 韭菜Chinese chives又叫长生韭、扁菜等，自古以来就受到国人的喜爱。韭菜因营养丰富，又有温补肝肾、助阳固精作用，故在《中国药典》上有“起阳草”之称。韭菜作为药用，最早见于梁?陶弘景 《名医别录》，谓其能“安五脏，除胃中热”,1,。《食疗本草》说它能“利胸膈”。《本草拾遗》说它能“温中，下气，补虚，调和脏腑，令人能食，益阳，止泻白脓， 腹冷痛，并煮食之”。明代李时珍在《本草纲目》中写道，韭菜“补肝及命门，治小便频数，遗尿……”等 ,2,。韭菜味甘、辛，性温;有补肾助阳，温中开胃，散淤血等功效;药理研究发现其具有调节血脂、预防和治疗心血管疾病的作用，在肠内有消毒、灭菌的功能。临床上常用作治跌打损伤、噎膈、反胃、肠炎、吐血、鼻衄、 胸痛、阳痿、早泄、遗精、多尿、神经性皮炎等症。现代研究证明，韭菜含有挥发油硫化物、蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素、维生素B和C、纤维素、钙、磷、铁等,1,。 近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道,3，4,，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响,4,。但超声技术应用于提取韭菜中黄酮类物质的研究尚未见报道。为此，本文报道用超声波乙醇浸提法提取韭菜总黄酮、鉴别及提取物总黄酮对羟自由基的清除作用。 1 仪器与试剂 1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器(超声工作频率40KHz、江苏省昆山市超声仪器有限公司);UV-755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂);ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂);SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。 1.2 试剂95%乙醇AR;亚硝酸钠AR;硝酸铝AR;氢氧化钠AR;三氯化铝AR;盐酸AR;氨水AR;冰醋酸AR;醋酸乙酯AR;乙酸镁AR;甲醇AR;镁粉AR;正丁醇AR;芦丁品(中国药品生物制品检定所);双氧水AR;硫酸亚铁AR;水杨酸AR;新鲜韭菜采自广西百色市。 2 方法与结果 2.1 总黄酮成分提取取新鲜韭菜，烘干，粉碎。称取韭菜粉末6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。 2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定韭菜中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。 2.3 定量实验-总黄酮的含量测定 2.3.1 波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420,700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。 2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液(0.13 mg/ml)0.00，0.05， 1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min;再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min;再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白，于510 nm处测吸光度。吸光度测定结果见表1。表1 紫外可见分光光度计测定吸光度结果(略) 2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml，置10 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.124，根据回归方程: A=3.619×10-3+12.34C，计算样品中总黄酮的含量C=0.195 0 mg/ml。 2.3.4 回收率实验精密量取样品液2.00 ml，加入标准芦丁对照品2.00 ml(0.13 mg/ml)，同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为100% 。