高效液相色谱法测定活力源片中 人参皂苷rg1、re含量

高效液相色谱法测定活力源片中 人参皂苷rg1、re含量 高效液相色谱法测定活力源片中 人参皂苷Rg1、Re含量 * 崔旭光 杜立娟 徐茂伟 陈艳红 (吉林华康药业股份有限公司，吉林 敦化 133700) [摘要] 目的:建立高效液相色谱法测定活力源片中人参皂苷Rg1、Re的含量。方 法:采用Agilent TC C(250mm×4.6 mm×5µm),流动相:乙腈-水(20:80);18 -1流速:0.8mlmin，检测波长203nm。结果:人参皂苷Rg在0.120,2.040μg呈1 良好线性关系，r=0.9996,平均回收率为97.1%，RSD=0.7(n=6);人参皂苷Re 在0.297,5.049μg呈良好线性关系，r=0.9998,平均回收率为97.4%，RSD=0.3 (n=6)。结论:本方法分离效果好、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。 ,关键词,高效液相色谱法;人参皂苷Rg1;人参皂苷Re;活力源片 HPLC Determination of Ginsenoside Rg1and Ginsenoside Re in Huoliyuan tablet Cui Xuguang, Du Lijuan (JiLin Huakang Pharmceutical Co., LTD, JiLin DunHua 133700, China) [Abstract] Objective:To establish method for HPLC determination of Ginsenoside Rg1and Ginsenoside Re in Huoliyuan tablet.Method:The Agilent tc-c18 column ( 4.6 mm x 250 mm, 5 μm),Acetonitrile -Water ( 20 ?80) as the mobile phase. Flow rate 0.8ml/min, the detection wavelength was 203nm..Result:Ginsenoside Rg1 on 0.120,2.040μg showed good linear relationship, r=0.9996, the average recovery was 97.1%,RSD=0.7(n=6 ); Ginsenoside Re in 0.297,5.049μg showed good linear relationship, r=0.9998, the average recovery was 97.4%,RSD=0.3(n=6).Conclusion: This method is good in separation effect,accurate,with good reproducibility, can be used for the quality control. [Key words] HPLC;Ginsenoside Rg1and Ginsenoside Re;Huoliyuan tablet [1]活力源片收载于卫生部颁药品标准。活力源片是由人参茎叶皂苷、黄芪、 麦冬等中药组成的复方制剂，具有益气养阴、强心益肾的功效。方中人参茎叶皂 苷为君药，原方法采用高效液相色谱测定中人参皂苷Re(CHO)，要求每片不488218 得少于5.0mg。 1 仪器与试药 LC-2010 A HT高效液相色谱仪、 LC solution色谱工作站;Sartorius BP211D 电子天平;CQX25-06型超声波清洗器(250W;50kHz)。 人参皂苷Rg对照品(批号:110703-200322)、人参皂苷Re对照品(批号:1 110754-200421)，含量测定用，购于中国食品药品检定研究所。活力源片(天津和治药业有限公司，批号:080101、080102、080103)。乙腈为色谱纯;水为经SG型超纯水器制备的纯化水;其他试剂均为分析醇。 2 方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱:Agilent TC C18(250mm×4.6mm×5µm);流动相:乙腈-水(20: ,180);流速:0.8mlmin;柱温:35?;检测波长:203nm;进样量5μL。理论板数按人参皂苷Re计算应不低于2500。 2.2溶液的制备 2.2.1供试品溶液的制备 取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取细粉约0.5g，精密称定，置容量瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理(250W，25kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得。 2.2.2对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg对照品、人参皂苷Re对照1 品适量，加甲醇制成每1mL含人参皂苷Rg0.1mg、人参皂苷Re0.3mg的混合溶1 液，即得。 2.2.3阴性对照溶液的制备 按照处方配比投入无人参茎叶总皂苷的其余中药和辅料，制成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备。 2.3 检测波长的选择 分别取人参皂苷Rg1、Re对照品的甲醇溶液，经紫外分光光度计在190,400nm扫描，人参皂苷Rg1与Re均在204nm波长处有最大吸收，并参照中国药典2010年版一部中收载的人参与人参叶含量测定项下方法，选择203nm波长处，作为测定波长。 2.4阴性干扰试验 在2.1色谱条件下，分别取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各5μL注入色谱仪，记录色谱图，结果见图1,由测定结果可见，阴性对照溶液及空白 溶剂溶液对测定无干扰。 2.5线性关系考察 精密称量人参皂苷Rg对照品6.00mg、人参皂苷Re对照品14.85mg，分别1 置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得人参皂苷Rg对照品溶1 -1-1液(0.120mgmL)和人参皂苷Re对照品溶液(0.297mg ml)。分别精密吸取l,5,9,13,17µL，按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得人参皂苷Rg1回归方程为Y=427053X-3233.2，线性范围0.120—2.040μg，r=0.9996;人参皂苷Re回归方程Y=406812X-1847.5，线性范围0.297—5.049μg，r=0.9998。 2.6精密度试验 -1-1取0.103mgml的人参皂苷Rg对照品溶液和0.307mgmL的人参皂苷Re对照1 品溶液，分别重复进样6次，记录色谱图，结果人参皂苷Rg峰面积RSD=0.5%，1 人参皂苷Re峰面积RSD=0.1%，表明仪器精密度良好。 2(7稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于2,4,8,10,12h注入高效液相色谱仪，测定人参皂苷Rg和人参皂苷Re含量，计算人参皂苷RgRSD=0.6%(n=6)和人参皂苷Re11 的RSD=1.2%(n=6)，表明供试品在12h内稳定。 2(8重复性试验 精密称取同一批号的样品6份，按2.2供试品溶液制备方法制备，按2.1色谱条件测试，测定人参皂苷Rg峰面积的RSD=1.1%(n=6)，人参皂苷Re峰面1 积RSD=1.0%(n=6)，结果表明本法的重复性好。 2(9回收率试验 采用加样回收测定法，精密称取已知含量的样品(批号:080101)约0.25g，分别精密加入人参皂苷Rg对照品溶液、人参皂苷Re对照品溶液各10ml，依法1 测定，见表1，表明方法可靠，回收率符合要求。 序号 称样量/g 对照品加入量/mg 样品中含量/mg 测得总量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/% 1 0.2502 2.51 2.62 5.20 97.3 97.4 0.3 2 0.2511 2.58 1.23 2.61 1.13 5.27 2.40 97.0 96.9 3 0.2513 2.55 1.18 2.53 1.15 5.15 2.37 97.3 96.7 4 0.2509 2.43 1.15 2.66 1.21 5.15 2.39 97.6 97.5 5 0.2496 2.50 1.21 2.52 1.12 5.09 2.38 97.3 96.0 6 0.2506 2.57 1.23 2.58 1.18 5.21 2.44 97.7 97.6 2(9样品含量测定 分别精密称取3批活力源片，按供试品制备方法制备，精密吸取对照品溶液及供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定人参皂苷Rg1和人参皂苷Re含量，结果见表2。 表2 样品含量 含量(mg/片) 批号 Re Rg1 080101 5.16 2.17 080102 5.18 2.18 080103 5.17 2.22 3 讨论 [2][3]3.1流动相的选择 参考《中国药典2010年版一部》人参及人参叶项下的有关规定，分别选择(1)乙腈-水(20:80);(2)乙腈-0.05,磷酸溶液(20:80)为流动相，均可用于该含量测定，流动相(1)配制起来更为方便。 3.2供试品制备方法的选择:实验比较了两种方法:(1)供试品经甲醇超声提取，(2)供试品经甲醇回流提取，结果方法(1)与方法(2)无显著差异，但方法(1)更为快捷，简便，故选择方法(1)。 3.3流动相组成比例对检测的选择:分别选用(1) 乙腈,水(20:80); (2)乙腈-水(19:81); (3)乙腈-水(21:79)实验结果表明:当改变流动相组成比例时，增加水的比例，可使峰的保留时间延迟，分离度改善，减少水的比例，峰的保留时间提前，有时分离度会达不到要求。 3.4色谱柱对检测的选择:选择三种品牌的色谱柱试验，(1)Agilent TC-C18;(2)Diamonsil (R)钻石 C18;(3)Agilent ZORBAX Extend-C18。结果表明人参皂苷 Rg1与Re的结构相似，分离比较难，但还是能适用多种品牌的色谱柱，只是当色谱柱被较长时间使用后，色谱柱的柱效降低，使分离变得比较困难。 3.5柱箱温度对检测的选择:选择了三种柱箱温度，30? 、35?、45? 进行试验，结果当柱箱温度升高时，分离度会降低，不同的色谱柱所耐用的温度略有不同。 因此，我们采用高效液相色谱，采用Agilent TC C18(4.6×250mm×5µm), 流动相:乙腈-水(20:80);流速:0.8ml/min，检测波长203nm。柱温:30?时，分离度、重现性很好，且方法操作简便，测定准确，重现性好，可作为控制该制剂内在质量的方法。 图1 活力源片测定波长选择 图谱-2 活力源片含量测定专属性考察图谱 上图: 人参皂苷R和人参皂苷R对照品 g1e 中图: 供试品 下图: 阴性对照 参考文献: [1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.活力源片[S].中华人民共和国卫生部药品标准:中药成方制剂第十七册.北京:[出版者不详]1998.186。 [2] 国家药典委员会.人参[S] .中华人民共和国药典:2005年版一部.北京:中国医药科技出版社，2010.1:8 [3] 国家药典委员会..人参叶[S] ..中华人民共和国药典:2005年版一部.北 京:中国医药科技出版社，2010.1:8 4、邵春杰,王树华,徐景达;人参复方制剂的成分分析[J];吉林大学学报(医学版);1985年04期 5、刘飞,贺浪冲;人参质量控制的定性与定量方法研究[J];药物分析杂志;2002年03期 6、张小勇,许学哲,金星华;人参皂甙的高效液相色谱分析[J];延边大学学报(自然科学版);1999年02期