【doc】肿瘤及肿瘤化疗患者外周血单个核细胞诱生γ干扰素的测定

【doc】肿瘤及肿瘤化疗患者外周血单个核细胞诱生γ干扰素的测定 肿瘤及肿瘤化疗患者外周血单个核细胞诱 生γ干扰素的测定 43fl , 文,,.辱扰毫中华医学杂志】993年第73卷第7期 肿瘤及肿瘤化疗患者外周血单个核细胞 诱生干扰素的测定5I 颉东旭于兰婆蓬琼肖永良张辉周虹梅——— ,—— —, 一 干扰素(interferon-gamma,IFNy)是高活性, 多功能的诱生蛋白,检测各种肿瘤患者外周血个核 细胞诱生的IFN7对探讨肿瘤发病机制及临床诊治 具有疆要作用我们利H]国内已有的IFN)'单克隆抗 体,建立丁人IFN7的免疫放射量度分析,并检测了 丁E常人,肿瘤及肿瘤化疗患者的外周血单个桉细胞诱 生IFN),的量.现报道如F ? ,资料和方法 [:海第一二 1人重组IFN~'及其单克隆抗体A,系 军医大学微生物教研室赠.A的中和活性为4× 10IU/mg.IFN7比话惟为2×107IU/m纯度大 于99%.29例正常对照系体检的健康人;34倒来化 疗的肿瘤患者及化疗在3个疗程以上肿瘤患者19 例,均有病理所证实. 2免疫放射量度分析:在试管中顺序加入 A51*g;500#CiI,50#g氯铵T,2分钟后,加^ 50g偏重旺硫酸钠,搅动2分钟然后用GI25柱 洗脱纯化,收集第一峰.加入1%苯磺酸 3测定及数据处理:将A倍比稀释,包被96孔 板,4C过夜,加人不同含量的重蛆IFN一,孵育 后.加入不同稀释度的,1一A3,反应后用计数器铡 定鼻孔计数,选择最适T作滴度.然后铡定标本,每 组均做复孔,井设空白对照,以浓度为自变量,计数 为因变量.进行曲线回归优选,用优选函数,计算标 本巾的IFN含量. 4方法学考核i(1)I利用率及标记蛋白活性判 定:取来』:柱前标记混合物2#1及第一峰最高管 101d,各加入10%三氯醋酸lm[,充分摇匀,离心测 总盐射性及沉淀的放射性(2)将高含量样品作不问倍 数稀释,添加标准品,计算回收率,批内及批间变异 系数.交_殳反应选用IFN—!bf美国Schering公司产 品,IFN/3来自中国医学科学院1. 5.IFN7诱生:空腹抽取肝素抗凝血2m1.用 Ficoll剂分离单个核细胞,加入10%甲基二硫代氨基 }P酸铵,PRMI1640,调细胞数目至1×10/ml,培 养液内含25U/mI的PHA(找科自制1,37"C培养72 ,J埘.收集I:清液冻存 6主要化疗药物及用量:l9侧肿瘤化疗患者包括 手术后和束手术患者,主要化疗药物为环磷酰胺600 , 800mg;阿霉素20,40rag,甲基苄肼50-- 100rag;强的橙20mg,8,10天为一疗程,所选化疗 患者均为3个疗程以上34例未化疗的肿瘤患者,没 有服片]上述任何_一种药物. ___:结果及计论 IFN免疫放射量度分析优选函数为: [ny:BlnX+A(A,B为常数1,优选时由计算机给 出,标准曲线相关系数:=0985I利用率为 67%,纯化后三氯醋酸沉淀率为96%,符合故免测定 A3比放射活性2.38MBq/mg.线性回收 要求.I— 试验符合优选函数,回收率为1?017平均批内变 异系数为740%,批间变异系数为173%.检测范围 为1×10,2.5×10IU/L,与IFN,IFN口均不交 叉目前国外常用的IFN-/固相免疫放射分析检羽I盒 用聚苯乙烯小球作圆相载体,最低可检测2× 1021u/L.批内变异系数为713%,回收率为1? 0.18,我们的结果与此相近 检铡人外周血单个核细胞诱生1FN7量表明,29 例正常人为?s):(276?105)×10IU/L;34侧未 化疗的肿瘤病人为(3.1l?l33)x10IU/L;19侧化 疗病人为074=335)×l们U/L正常人和未化疗的肿 瘤病人外周血单个核细胞诱生IFNy量相近(P>Oo5), 肿瘤病人的外周血单个核细胞诱生IFN7的能力并无异 常Commes等pClinImmunol,1989,9:651~多发性骨髓唐 患者的研究表明,这类患者与正常人相比,外周血单个 核细胞诱生1FN~,的能力也无异常. 多次化疗患者单个核细胞产生IFNy的量显着低 <005),已知IFN 于正常人及未化疗的肿瘤患者(尸 主要生产细胞为CD3,cD;,多次放疗和化疗的患者 血液中的白细胞显着下降,因此,化疗可能使得 CD;,CD;细胞受到严重破坏. (收稿:1992--08—05修心:1993—03—28) (本文编辑:李群1 作者单位:730050州部队总医院实验科