大孔吸附树脂比色法测定柴胡口服液中总皂苷的含量_138671

大孔吸附树脂比色法测定柴胡口服液中总皂苷的含量_138671 [标签:来源] 【摘要】 目的进一步完善柴胡口服液的质量，建立该制剂中总皂苷的含量测定方法。方法样品中的柴胡皂苷经大孔吸附树脂富集后，以柴胡皂苷a为对照品，采用对二甲氨 545 nm波长处测定总皂苷的含量。结果柴胡皂苷a在18.7,66.4μg?ml-1范围内与吸光度有良好线性关系，r= 0.999 6，平均加样回收率为98.06%，RSD= 1.1%。结论该方法稳定、准确、可靠，可作为柴胡口服液中皂苷类成分的质量控制方法。 【关键词】 柴胡口服液 柴胡总皂苷 大孔吸附树脂 比色法 柴胡口服液为柴胡药材经加工而制成的单味药制剂，具有退热解之功效，用于外感发热，症见身热面赤、头痛身楚、口干而渴,1,等，其主要成分为柴胡皂苷和挥发油。2005版《中国药典》中的柴胡口服液质量标准对该制剂中挥发油的含量进行了规定，而对另外一类有效成分——柴胡总皂苷仅进行了定性鉴别，这与柴胡总皂苷类成分具有解热、抗炎、抗病毒、调节内分泌及免疫系统等重要药理作用的事实极不相符,2,。同时，柴胡口服液中总皂苷的含量测定方法还未见报道。因此，柴胡口服液中皂苷类成分定量方法的建立，对于完善其质量标准，更好地控制制剂质量，提高制剂的安全性和有效性均具有重要意义。基于此，本文以柴胡口服液为研究对象，首次采用大孔吸附树脂-比色法建立其中总皂苷类成分含量测定的方法。现报道如下。 1 仪器与试药 1.1 仪器 UV2501PC型紫外可见分光光度计(日本岛津仪器公司)， METTLERAE240型电子天平(瑞士梅特勒公司)，RE52AA 型旋转蒸发仪(郑州长城科工贸有限公司)。 1.2 试药柴胡口服液(河南天方药业生产的柴胡口服液3批，批号为:070901，071004，071101)，柴胡皂苷a对照品(作者自制，HPLC面积归一法测定纯度,98%)，AB8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)，无水乙醇、磷酸、氢氧化钠、对二甲氨基苯甲醛均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 对照品溶液的制备 称取柴胡皂苷a对照品4 mg，置于10 ml量瓶中，精密称定， 加适量甲醇，超声溶解，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。 2.2 供试品溶液的制备,3，4,精密移取柴胡口服液3 ml，上样于装有10 ml已经处理好的AB8大孔吸附树脂的层析柱(内径1 cm)，进行动态吸附。待吸附完毕后，用质量-体积分数为5,的氢氧化钠水溶液洗脱至近无色，再用蒸馏水洗脱至中性，接着用体积分数为30,的乙醇洗脱至近无色，最后用体积分数为95,的乙醇50 ml进行洗脱，收集该部分洗脱液并浓缩蒸干，再用体积分数为50,的乙醇0.5 ml定量转移至10 ml具塞玻璃试管中，即得供试品溶液。 2.3 测定波长的选择精密吸取对照品溶液及供试品溶液各0.5 ml，分别置于不同10 ml具塞玻璃刻度试管中，加质量-体积分数为0.1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液0.5 ml，于70 ?水浴中加热10 min，然后取出放置至室温，加磷酸4.0 ml，摇匀，再置于70 ?水浴中加热5 min，放置至室温。在400,800 nm进行扫描。结果显示:标准品及样品均在545 nm处有最大吸收峰，故最终确定测定波长为545 nm。 2.4 线性关系考察精密吸取“2.1”中对照品溶液0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8 ml，分别置于不同10 ml具塞玻璃刻度试管，按照“2.3 为0.1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液0.5 ml，”开始，依法显色，于545 nm处测定吸光度。以对照品浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标进行线性回归，得回归方程A = 0.009 2C+ 0.040 9(r = 0.999 6)。结果表明，柴胡皂苷a在18.7,66.4 μg?ml-1浓度范围内与其吸光度呈良好线性关系。 2.5 精密度实验精密吸取同一供试品溶液0.5 ml，依法显色后，于545 nm处测定吸光度值，连续测定5次，RSD为0.60 %，表明仪器精密度良好。 2.6 加热时间及稳定性实验取同一批号样品5份，每份3 ml，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液5份，分别置于不同10 ml0.1%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液0.5 ml，摇匀，置于70 ?水浴，加热10 min，取出放置至室温，加磷酸4.0 ml，摇匀，再于70?水浴中加热不同时间(5，10，15，20，30 min)，取出后放置至室温，分别于5，10，30，60，90，120 min时间点处测定其吸光度。结果表明，加热5 min时样品吸光度值已达到最大，且样品显色后2 h内基本稳定，RSD为0.58%。 2.7 重复性实验 取同一批号样品6份，每份3.0 ml，按照“2.2”项下方法，制备供试品溶液，依法显色，采用外标两点法计算各供试品中总皂苷的含量。结果得总皂苷含量的平均值为61.79 μg?ml-1，RSD为2.0 %，表明重复性良好。 2.8 加样回收率实验 精密吸取“2.7”项下同一批号的柴胡口服液9份，每份1.5 ml，分别精密加入适量柴胡皂苷a对照品，依法制备样品、显色、测定含量，并计算回收率。结果见表1。 表1 回收率实验结果(略) 2.9 样品含量测定取河南天方药业生产的柴胡口服液3批，批号分别为:070901，071004，071101，每批3份，每份3.0 ml，依法制备供试品溶液，显色，并测定含量。结果见表2。 表2 柴胡口服液中总皂苷含量测定结果(略) 3 讨论 柴胡皂苷是柴胡中的主要活性物质，也是柴胡口服液发挥药效的主要成分，由于柴胡口服液中其它成分对含量测定的干扰，无法直接用比色法对其皂苷类成分进行测定，经过试验发现采用大孔吸附树脂柱层析，通过不同浓度溶剂对其进行洗脱，可有效地去除测定干扰，并对柴胡皂苷进行富集纯化，有利于含量测定。 确、可靠，可作为柴胡口服液的中总皂苷含量测定的方法，为进一步完善其质量标准提供了科学依据。 【参考文献】 ,1, 国家药典委员会.中国药典，?部,S,.北京:化学工业出版社，2005:562. ,2, 谢东浩，蔡宝昌，安益强，等.柴胡皂苷类化学成分及药理作用研究进展,J,.南京中医药大学学报，2007，23(1):63. ,3, 王胜春，李晓玮，王俊琴(反相高效液相色谱法测定柴胡及柴葛颗粒中柴胡皂苷D的含量,J,.时珍国医国药，2004，15(5):262. ,4, 刘 岱，杨立新，崔淑莲(高效液相色谱法测定柴贯冲剂中柴胡皂苷A的含量,J,.中国中药杂志，1998，23(2):92.