宫颈癌前病变中与p16INK4A蛋白表达的意义

宫颈癌中p16INK4A蛋白表达的意义 杨胜利 陕西省渭南市妇幼医院 【摘要】　目的　检测宫颈癌组织中p16NK4A蛋白表达状况, 探讨p16NK4A蛋白与宫颈癌发生发展以及临床病理指标的关系。；采用免疫组化法检测宫颈鳞癌组织中40例, 宫颈上皮内瘤病变（CIN）30例，宫颈癌旁正常宫颈组织25例中的p16NK4A表达。结果　p16INK4A在宫颈上皮内瘤病变中阳性率86.6%，宫颈鳞癌组织中阳性率均呈100%表达。正常宫颈组织中为阴性。p16NK4A阳性反应为细胞核及细胞质呈棕黄色。结论；p16基因在宫颈癌组织中缺失和突变导致其表达降低,使p16抑癌功能丧失, 特别是在DNA没有被修复前过早进入Ｓ期,造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控,使宫颈上皮内瘤病变细胞阳性逐渐增多。导致p16INK4A在子宫颈癌上皮组织全层表达。所以p16INK4A 作为一种免疫组织化学标志物，应用于宫颈癌及其上皮内瘤病变（CIN）的诊断是很有应用前景的。 【关键词】　宫颈鳞癌；p16NK4A蛋白；免疫组化 宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤。严重威胁着妇女的健康和生命，尤其是年轻妇女的宫颈癌的患病率逐年上升的趋势。许多研究表明[1、2], 认为宫颈癌变与高危型人类乳头瘤病毒的持续感染密切相关。p16NK4A基因产物是细胞周期素依赖性激酶抑制物,参与了HPV感染引起的宫颈病变持续性发展。通过免疫组化法p16NK4A蛋白在宫颈癌及其宫颈癌旁正常宫颈组织的表达,以探讨它们与宫颈癌发生发展的关系。 材料与方法 1 材料:收集本院及渭南市中心医院2005年1月～2008年12月的宫颈标本，宫颈鳞癌40例, 宫颈上皮内瘤（CIN）30例，宫颈癌旁正常宫颈组织25例, 病理分期按WHO(2003)女性生殖系统肿瘤分类进行。患者年龄在25～67岁, 中位年龄为41岁。 2 方法: 免疫组化染色采用常规枸橼酸缓冲液-微波抗原修复-SP法，p16NK4A鼠抗人单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，购自北京中杉金桥生物技术有限公司,实验操作严格按照试剂说明书进行。 3 结果判定: p16NK4A以细胞核和(或)细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞。以每个高倍视野下阳性染色的癌细胞数<5%为阴性(-),6%～25%为弱阳性(+),26%～50%为明显阳性(++),>50%为强阳性(+++ )。 4统计学 用SPSS1310软件包分析数据,用V2检验。 结  果 表1　 p16NK4A在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌组织中表达                             表 达 程 度                          病变类型      总例数--------------------------------------------------------------------------------------------------阳性率 -      +      ++      +++            (%) ——————————————————————————————————————— 正常宫颈组织    25        25    0      0        0              0 宫颈上皮内瘤变  30        4      4      8        14            86.6 宫颈鳞癌组织    40        0      2      9        29  　        100 —————————————————————————————————————— 3　讨论 p16基因定位于人染色体9p21区，所编码的p16蛋白有132个氨基酸残基组成，分子量为13.9kDa。其产物p16INK4A蛋白可与cycinD1竞争性结合细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4），特异性地抑制CDK4活性, 当p16INK4A基因发生突变时,致使细胞过度增殖,特别是在DNA没有被修复前过早进入Ｓ期。造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控,在宫颈癌前病变组织中均存在p16INK4A蛋白异常表达。其失活机制以纯合子缺失或异常甲基化为主。     宫颈癌的发生与HPV感染密切相关[2,3] ,p16INK4A与pRb之间存在负反馈调节,即pRb限制p16INK4A产物在细胞内浓缩,而HPV E7蛋白使pRb失活,使其对p16INK4A的负反馈调节作用丧失,从而,导致p16INK4A在宫颈癌前病变和宫颈癌中过度表达。本实验中, p16INK4A在宫颈上皮内瘤中阳性率86.6%，宫颈鳞癌、原位癌组织中阳性率均呈100%表达。正常组织(细胞)中无阳性表达,p16的表达升高与HPV的感染有关。除宫颈癌外,在与HPV感染有关的其他部位的肿瘤中,同样存在p16的高表达[4-5],所以推测肿瘤细胞中p16的高表达可能与HPV的感染有关。研究结果表明；p16INK4A表达的强度越高,提示在宫颈病变中, HPV16、18感染与p16INK4A的过度表达呈正相关关系。 p16INK4A在宫颈上皮内瘤病变、宫颈癌的阳性表达表明; p16基因在宫颈癌组织中缺失和突变导致其表达降低,使p16抑癌功能丧失, 特别是在DNA没有被修复前过早进入Ｓ期,造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控, 最终与其他致癌因素一起导致宫颈癌的发生。使宫颈上皮内瘤病变细胞阳性逐渐增多。 因此p16INK4A在子宫颈上皮组织全层表达。所以p16INK4A 作为一种生物标志物应用于宫颈癌及其癌前病变的筛查和诊断是很有应用前景的。 参考文献 1  Kalof  A N, Cooper K. p16INK4A immunoexpression: surrogate marker of high risk HPV and high grade cervical intraepithelial aphasia[J].AdvAnatPathol,2006,13(4):190-194. 2　 Dehn D，Torkko K C, Shroyer K. Human pap illomavirus testing and molecular markers of cervical dysphasia and carcinoma [J].Cancer,2007,111(1):1-14.     3　Paula Andrea Gabrielli Fregones,i Debora Barreto Teresa, Rober ta Aparecida D uarte, et al. p16INK4Aimmunohistochemical overexpression in premalignantandmalignantoral lesions infectedwith humanpapillomavirus [J].Histochem Cytochem, 2003, 51: 1291-7.   4　Lang JC, Borchers J, Danahey D,et al.Mutational status of overex pressed p16 in head and neck cancer: evidence forgerm linemutation ofp16 /p14ARF[J]. Int JOnco,l 2002, 21(2): 401-8.   5　TATIANA A,DAR AI A,LAR ISA E,et al.Up-regulation of ex2p ression and lack of 5′CpG island hypermethylation of p16 NIK4ain HPV-positive cervical carcinomas[J].BMC Cancer,2007,7:47. 宫颈癌中p16INK4A蛋白表达的意义 杨胜利 陕西省渭南市妇幼医院 【摘要】　目的　检测宫颈癌组织中p16NK4A蛋白表达状况, 探讨p16NK4A蛋白与宫颈癌发生发展以及临床病理指标的关系。方法；采用免疫组化法检测宫颈鳞癌组织中40例, 宫颈上皮内瘤病变（CIN）30例，宫颈癌旁正常宫颈组织25例中的p16NK4A表达。结果　p16INK4A在宫颈上皮内瘤病变中阳性率86.6%，宫颈鳞癌组织中阳性率均呈100%表达。正常宫颈组织中为阴性。p16NK4A阳性反应为细胞核及细胞质呈棕黄色。结论；p16基因在宫颈癌组织中缺失和突变导致其表达降低,使p16抑癌功能丧失, 特别是在DNA没有被修复前过早进入Ｓ期,造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控,使宫颈上皮内瘤病变细胞阳性逐渐增多。导致p16INK4A在子宫颈癌上皮组织全层表达。所以p16INK4A 作为一种免疫组织化学标志物，应用于宫颈癌及其上皮内瘤病变（CIN）的诊断是很有应用前景的。 【关键词】　宫颈鳞癌；p16NK4A蛋白；免疫组化 Significance of p16INK4A expression in cervical carcinoma YANG Sheng-Li (Dapartment of Pathology,Women and Children Hospital, Weinan City, Shaanxi Province 714000,China Abstract: Objective  To investigate the expression of the p16NK4A protein in cervical carcinoma, and discuss p16NK4A of cervical carcinogenesis and the relationship between clinicopathological parameters. Method: detected by immunohistochemistry in 40 cases of cervical squamous cell carcinoma, cervical intraepithelial lesion (CIN) 30 cases of cervical cancer and adjacent normal cervical tissue expression of 25 cases of p16NK4A. Results: The expression rate of p16INK4A in cervical intraepithelial lesions was 86.6%, positive rate of cervical squamous cell carcinoma showed the expression of 100%. Normal cervical tissue were negative. p16NK4A positive in the nuclei and cytoplasm stained in brown. Conclusion; p16 gene deletion and mutation in cervical carcinoma lead to reduced expression, so that loss of p16 tumor suppressor function, particularly in the DNA is not repaired before the premature entry into S phase, resulting in cervical epithelial cell proliferation and differentiation of out of control, so that the cervix intraepithelial lesion-positive cells gradually increased. Lead to p16INK4A in cervical epithelium expression of full thickness. So p16INK4A immunohistochemistry as a marker of cervical carcinoma and intraepithelial lesions (CIN) diagnosis is very promising. Key words: Cervical cancer; p16NK4A protein; Immunohistochemistry 宫颈癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤。严重威胁着妇女的健康和生命，尤其是年轻妇女的宫颈癌的患病率逐年上升的趋势。许多研究表明[1、2], 认为宫颈癌变与高危型人类乳头瘤病毒的持续感染密切相关。p16NK4A基因产物是细胞周期素依赖性激酶抑制物,参与了HPV感染引起的宫颈病变持续性发展。通过免疫组化法p16NK4A蛋白在宫颈癌及其宫颈癌旁正常宫颈组织的表达,以探讨它们与宫颈癌发生发展的关系。 材料与方法 1 材料:收集本院及渭南市中心医院2005年1月～2008年12月的宫颈标本，宫颈鳞癌40例, 宫颈上皮内瘤（CIN）30例，宫颈癌旁正常宫颈组织25例, 病理分期按WHO(2003)女性生殖系统肿瘤分类标准进行。患者年龄在25～67岁, 中位年龄为41岁。 2 方法: 免疫组化染色采用常规枸橼酸缓冲液-微波抗原修复-SP法，p16NK4A鼠抗人单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，购自北京中杉金桥生物技术有限公司,实验操作严格按照试剂说明书进行。 3 结果判定: p16NK4A以细胞核和(或)细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞。以每个高倍视野下阳性染色的癌细胞数<5%为阴性(-),6%～25%为弱阳性(+),26%～50%为明显阳性(++),>50%为强阳性(+++ )。 4统计学分析 用SPSS1310软件包分析数据,用V2检验。 结  果 表1　 p16NK4A在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌组织中表达                             表 达 程 度                          病变类型      总例数--------------------------------------------------------------------------------------------------阳性率 -      +      ++      +++            (%) ——————————————————————————————————————— 正常宫颈组织    25        25    0      0        0              0 宫颈上皮内瘤变  30        4      4      8        14            86.6 宫颈鳞癌组织    40        0      2      9        29  　        100 —————————————————————————————————————— 3　讨论 p16基因定位于人染色体9p21区，所编码的p16蛋白有132个氨基酸残基组成，分子量为13.9kDa。其产物p16INK4A蛋白可与cycinD1竞争性结合细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4），特异性地抑制CDK4活性, 当p16INK4A基因发生突变时,致使细胞过度增殖,特别是在DNA没有被修复前过早进入Ｓ期。造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控,在宫颈癌前病变组织中均存在p16INK4A蛋白异常表达。其失活机制以纯合子缺失或异常甲基化为主。     宫颈癌的发生与HPV感染密切相关[2,3] ,p16INK4A与pRb之间存在负反馈调节,即pRb限制p16INK4A产物在细胞内浓缩,而HPV E7蛋白使pRb失活,使其对p16INK4A的负反馈调节作用丧失,从而,导致p16INK4A在宫颈癌前病变和宫颈癌中过度表达。本实验中, p16INK4A在宫颈上皮内瘤中阳性率86.6%，宫颈鳞癌、原位癌组织中阳性率均呈100%表达。正常组织(细胞)中无阳性表达,p16的表达升高与HPV的感染有关。除宫颈癌外,在与HPV感染有关的其他部位的肿瘤中,同样存在p16的高表达[4-5],所以推测肿瘤细胞中p16的高表达可能与HPV的感染有关。研究结果表明；p16INK4A表达的强度越高,提示在宫颈病变中, HPV16、18感染与p16INK4A的过度表达呈正相关关系。 p16INK4A在宫颈上皮内瘤病变、宫颈癌的阳性表达表明; p16基因在宫颈癌组织中缺失和突变导致其表达降低,使p16抑癌功能丧失, 特别是在DNA没有被修复前过早进入Ｓ期,造成宫颈上皮细胞异常增殖和分化失控, 最终与其他致癌因素一起导致宫颈癌的发生。使宫颈上皮内瘤病变细胞阳性逐渐增多。 因此p16INK4A在子宫颈上皮组织全层表达。所以p16INK4A 作为一种生物标志物应用于宫颈癌及其癌前病变的筛查和诊断是很有应用前景的。 参考文献 1  Kalof  A N, Cooper K. p16INK4A immunoexpression: surrogate marker of high risk HPV and high grade cervical intraepithelial aphasia[J].AdvAnatPathol,2006,13(4):190-194. 2　 Dehn D，Torkko K C, Shroyer K. Human pap illomavirus testing and molecular markers of cervical dysphasia and carcinoma [J].Cancer,2007,111(1):1-14.     3　Paula Andrea Gabrielli Fregones,i Debora Barreto Teresa, Rober ta Aparecida D uarte, et al. p16INK4Aimmunohistochemical overexpression in premalignantandmalignantoral lesions infectedwith humanpapillomavirus [J].Histochem Cytochem, 2003, 51: 1291-7.   4　Lang JC, Borchers J, Danahey D,et al.Mutational status of overex pressed p16 in head and neck cancer: evidence forgerm linemutation ofp16 /p14ARF[J]. Int JOnco,l 2002, 21(2): 401-8.   5　TATIANA A,DAR AI A,LAR ISA E,et al.Up-regulation of ex2p ression and lack of 5′CpG island hypermethylation of p16 NIK4ain HPV-positive cervical carcinomas[J].BMC Cancer,2007,7:47.