维生素C注射液细菌内毒素检查方法探讨

维生素C注射液细菌内毒素检查方法探讨 维生素C注射液细菌内毒素检查方法探讨 - 98?}缶床合理用药2011年8月第4卷第8A期ChinJofclinicRati0na1DmgUseAust2011,Vo1.4No.8A 维生素C注射液细菌内毒素检查方法探讨 柴振平,段江涛,郑淑艳 ? 药物检测? 【摘要】目的建立定量检测维生素c注射液细菌内毒素实验方法.方法采用《中国药典))2oo5版(二)部 附录检测细菌内毒素的动态浊度法.结果维生素c注射液用细菌内毒素定量法检测无干扰因素影响,内毒素回收 率在50%200%范围内.结论使用动态浊度法定量检测维生素C注射液的细菌内毒素是可行的. 【关键词】维生素c注射液;细菌内毒素;动态浊度法;干扰实验 【中图分类号】R927.11【文献标识码】A【文章编号】1674—3296(2011)08A一0098—02 维生素C又名抗坏血酸,它是一种水溶性维生素,主要用 于预防和治疗因维生素C缺乏而致的各种坏血病.对维生素 C注射液的热原检查,《中国药典》1995年版二部…规定用家 兔法检查,但该方法繁琐,实验条件要求较高,不适用于该药品 的中间品及成品的大规模热原检测,笔者对该注射液试验 方法进行了如下探讨和可行性研究. 1仪器与试剂 FZQ一2型漩涡混合器(江苏太县医疗器械厂生产);DK一98 ?型热恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司);0604-0113箱 式电阻炉(上海阳光实验仪器有限公司);BET.16M细菌内毒 素测定仪(天津大学生物精密仪器厂);细菌内毒素工作 品(效价(150EU/m1),中国药品生物制品检定所生产,批号: 150601-200861);鲎试剂(TAL)(灵敏度为0.03EU/ml湛江博 康海洋生物有限公司生产,批号:0812062);细菌内毒素检查用 水(湛江博康海洋生物有限公司生产,批号:081024);维生素C 注射液(石家庄以岭药业股份有限公司生产,批号10060302—1, 10060302-2,10060302—3). 2方法与结果 2.1标准曲线的可靠性实验配制细菌内毒素工作标准品溶 液,依据标准分别将其稀释成0.5,0.25,0.125,0.06EU/ml的 4个浓度的标准品溶液进行标准曲线的可靠性实验.阴性对 照的反应时间大于标准曲线最低浓度的反应时间,将全部的数 据进行线性回归,根据线性回归分析,得出标准曲线方程 lgT=2r98903+(一0.422421gC).标准曲线的相关系数r= 0.9975>0.9800,说明实验有效.结果见1. 表1标准曲线的可靠性实验结果 样品名称夕专翥原液含量 阴性对照 内毒素标准品 内毒素标准品 内毒素标准品 O.5 0.5 O.5 0.25 O.25 O.25 0.125 O.125 O.125 当:0.03EU/ml时,供试品最大有效稀释倍数MVD=CL/ =1.0ml/ml×2.OEU/ml/O.03EU/ml=66.7倍. 2.2.2制备细菌内毒素工作标准品溶液:同标准曲线的可靠 性实验中标准品的稀释,得到浓度为1.0,0.5与0.25EU/ml的 系列溶液. 2.2.3制备供试品阳性对照溶液:用细菌内毒素检查用水稀 释原液(100mg/m1),得到2倍稀释液(浓度50mg/m1),4倍稀 释液(浓度25mg/m1),8倍稀释液(12.5mg/m1),16倍稀释液 (浓度6.25mg/m1),32倍稀释液(浓度3.125rag/m1),64倍稀 释液(1.56mg/m1),取0.5EU/ml细菌内毒素工作标准品溶液 0.5ml,与等量的2,4,8,16,32,64倍稀释的供试品溶液混合制 成含供试品的内毒素标准品溶液,在旋涡混合器上混合30s. 原液的阳性对照液参照标准品稀释方法. 2.2.4准备鲎试剂:(1)细菌内毒素工作标准品系列:取鲎试 剂6支,分别加入0.6ml细菌内毒素检查用水复溶,取2支内 毒素平行管分别加入0.1mlBET水作为阴性对照,再另取27 支分别加入浓度为0.5,0:25与0.125EU/ml的内毒素标准品 表2干扰实验结果. IN 腑 (mi 时 n)懈(%) 维生素C阴性对照>368010060302-l10060302-210060302-3 注射液 一 阴性对照 O.51420.5142 8 0.23630.2363 1《 0.128601286 2.2干扰实验 2.2.1计算最大有效稀释倍数:本品细菌内毒素限值L为 0.020EU/mg,限值L=lOOmg/ml×0.020EU/mg=2.OEU/ml 作者单位:050035石家庄以岭药业股份有限公司 O.25 0.25 loo 0O01l29982O0790O66OO?30002O008姗啪渤m瑚姗姗m姒姒抛姗姗 >>>>>>>>>>>>> ???卯"挖"" 临床合理用药2011年8月第4卷第8A期ChinJofClinicalRationalDrugUse,August2011.Vo1.4No.8A 溶液0.1ml各3支,然后将33支平行管分别加入0.1ml的鲎 试剂,用封口膜将瓶口封严,将各管中溶液轻轻混匀,放置于细 菌内毒素检测仪中反应.(2)供试品系列:取鲎试剂21支,加 入0.6ml的细菌内毒素检查用水复溶,其中2支平行管分别加 入0.1ml的细菌内毒素检查用水,作为阴性对照,42支平行管 分别加入各倍数稀释液0.1ml各2支,作为供试品阴性对照. 其余42支加入各稀释倍数供试品阳性对照液0.1ml各2只, 作为供试品阳性对照,将105支平行管各加入0.1ml鲎试剂, 用封口膜将管口封严,将各管中溶液轻轻混匀,放置于细菌内 毒素检测仪中反应. 2.2.5结果观察:通过细菌内毒素干扰实验检查,使用灵敏度 0.03EU/ml鲎试剂对供试品进行细菌内毒素检查,样品在原液 至64倍稀释时不存在干扰.见表2. ? 99- 3讨论 通过上述试验,维生素C注射液在细菌内毒素限值L< 0.020EU/mg时,用灵敏度0.03EU/ml鲎试剂,供试品原液可 进行细菌内毒素检查.利用定量测定法的优点在于能够正确 显示样品中的真实含量,且结果准确,灵敏度高.使用定量仪 器进行测试时还可观测到反应曲线,因此动态浊度测量法值得 广泛推广,且3批维生素c注射液进行了兔法热原检查,结果 均符合规定. 参考文献 1中华人民共和国卫生部.中国药典[S].2005—07一叭. 2张效蓬.影响维生素C注射液质量的因素探讨[J].安徽医药, 2002,6(4):70. (收稿日期:2011—03—25) 卵巢硬化性间质瘤1例 袁媛,李芹,马汝禅 【关键词】间质瘤,卵巢硬化性;良性肿瘤 【中图分类号】R711.75【文献标识码】B【文章编号】1674—3296(2011)08A一 0099一O1 患者,38岁,因月经紊乱2年,发现盆腔包块3个月入院. 既往月经7/30d,近2年月经2—3/10,15d,经量无明显改变, 曾经用药物调理无效果.生育史:1-0—2—1.体格检查:一般情 况良好,全身浅表淋巴结无肿大,肝脾无肿大,双下肢无水肿; 下腹部稍膨隆,无压痛,未叩及包块;移动性浊音阳性.妇科检 查:宫体正常大小,有一定的活动度,右侧附件区可叩及一直径 约7cm的肿块,质中,活动可,实性感,有压痛,表面尚光滑,与 子宫之间有界限.B型超声示肝前及脾肾隐窝均见液性暗区, 最深77mm右侧附件区见66mm×58mm不均质回声区,内见 丰富动静脉血流,子宫直肠陷凹见深27mm无回声区.: 右侧卵巢囊肿,腹腔积液.人院诊断:盆腔包块性质待查;卵巢 癌?人院后雌二醇(E2)876.9pmol/L;CA345.6U/ml,余常规 检查无异常.后于连续硬膜外麻醉下行剖腹探查术,术中见腹 腔有大量淡黄色液体,浆液性,约2000ml.子宫大小正常,右 侧卵巢增大约6cm×6cm×7cm,与周围组织无粘连,表面光 滑;卵巢门处见呈放射状分布粗大血管,质中,包膜完整,光滑, 质硬,切开呈多房性,切面有胶冻样物质.病理诊断结果为:右 侧卵巢硬化性间质瘤. 讨论 卵巢硬化性间质瘤是1973年Chalvardjian和Scully首先 报道的一种起源于卵巢问质并具有内分泌功能的良性肿瘤. 该肿瘤比较罕见,其发病率占卵巢性索间质肿瘤的1.5%, 7.0%,至今国内外文献报道仅百余例.它是一种主要发生在 年轻妇女的良性肿瘤,30岁以下发病者占75.8%,患者中位年 龄27岁.有文献报道',幼儿及绝经后妇女也可发生卵巢 硬化性间质瘤.本例患者年龄均不在此范围内.该病临床表 现可有性激素紊乱引起的月经异常,原发或继发性不育绝经 作者单位:224002江苏省盐城市妇幼保健院妇科 ? f临床于艮道? 后出血,男性化等症状,少数患者可有胸,腹水J.该肿瘤多 为单侧性,大体上为圆形或扁圆形肿物,有完整包膜,表面光 滑,略呈结节状或分叶状,偶尔为单房的囊性肿物.瘤体大小 不一,肿瘤大者盆腔检查可触及附件实性,光滑包快,直径多> 6cm;肿瘤小者往往于行其他腹部手术时发现,或切除卵巢常 规病理切片检查时发现镜下微小肿瘤存在.其切面多数实性, 灰白色,部分呈编织状,可有大小不等的囊腔形成,囊内有浆液 或黏液,个别病例有灶状钙化J.卵巢硬化性间质瘤镜下显 示:富有细胞区,致密胶原纤维组织及疏松水肿区等多种组织 并存.致密胶原,纤维及疏松水肿区分隔富有细胞区所形成的 结节或假小叶结构为本肿瘤的病变特点.结节或假小叶内的 瘤细胞多种多样,有圆形和多角形的上皮样细胞和卵圆形或梭 形细胞,这些细胞混杂形成巢或索,其间有丰富的薄壁血管. 圆形或多角形的上皮样瘤细胞偶见核仁,胞浆透明或空泡状, 泡沫状或颗粒状,多数细胞核位于细胞中央,少数偏于一侧,使 该细胞呈印戒状.因此瘤少见,临床诊断较困难,故凡年轻女 性,月经不调不孕患者,在排除多囊卵巢综合征并发盆腔肿瘤 后应及时检测雌激素,雄激素水平,如测定值升高,高度怀疑此 瘤.本病为良性肿瘤,以手术治疗为主,单纯瘤体切除后不复 发,预后佳. 参考文献 1周景,刘光.幼儿卵巢硬化性间质瘤1例[J].诊断病理学杂志, 1997,4(4):217—218. 2李莉,程静新.绝经后妇女卵巢硬化性间质瘤1例[J].中国肿瘤临 床,2002,29(4):304. 3中山医科大学病理学教研室,同济医科大学病理学教研室-夕科病 理学[M].武汉:湖北科技出版社,1999:850—851. 4田扬顺.妇科肿瘤临床病理学[M].北京:人民卫生出版社,2001: 286—289. (收稿日期:2011—02—23)