【doc】HPLC测定阿卡波糖胶囊的含量及有关物质

【doc】HPLC测定阿卡波糖胶囊的含量及有关物质 HPLC测定阿卡波糖胶囊的含量及有关物 质 W 华西 C 药学 ~ J 杂 P 志 S2004,l9(1):58,59u,l,l,:Jo,J HPLC测定阿卡波糖胶囊的含量及有关物质 彭远松,魏承志 (四川宝光药业股份有限公司,四川泸州646l00) 摘要:目的建立测定阿卡波糖胶囊含量及有关物质的方法.方法采用HHc法,"chmspherNH2色谱柱(4.6mmX250 mm,5胛),以乙腈一磷酸盐缓冲液(72:28)为流动相,流速1.3rnl?min一,检测波长210肿.结果阿卡波糖在浓度为0.6, 1.2嘲?rnl范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为l00.63%,样品溶液在24h内稳定,最低检测限为0.08.结论 ,结果准确. 所用方法简便,重复性好 关键词:阿卡波糖;含量;有关物质;高效液相色谱法 中图分类号:R9l7文献标识码:A文章编号:l0o6—0103(2004)01—0058—02 ~rminafionofcon~ntandrelatedsI]IbstanOesofAcarbosec嗣qpsIllesbyHPLC PENGYuan—song,WEICheng—zhi (S~huan~guangPharrnace~,?打yco..,I21zhou646l00,China) Abslract:OB.IECI'IVET0esta1)lisharnet}lodtodete~nethecogentandrelatedsuancesofA carbosecaDes.M圈【lj日DDS唧C怕 眦 thodwasadopwit|l"chmsp}lerNH2column(5m,4.6mmX250mm);111emobilephasewasa cetommle—phosphate?ler(72:28). rheflowrote岫1.3rnl?min-..rhedet~tivewavele~wasat210nm.REsIJIThecaIibmtioncurvelinearintl1ec 0ncen砸ltion of0.6一1.2?1g?rnl一(r=0.9999).111eave~erec0very惴l00.63%.111e明mple~ludon惴st~lein24h.111eliofdet~fion is0.08.C0NaJIs10lN111emeth~issimple,mpid,aee~teandrelie. Keywords:Acarbose:Conte~;HPIC CLCllI?Ilber:R917Dl0clmx岫toDde:AAr6de?:1oo6一O1O3(2()o4)01一OO58一 阿卡波糖(Acarbose)是一种生物合成的假性四 糖,是近年来发展起来的a一葡萄糖苷酶抑制剂. 其对小肠壁细胞刷状缘的a一葡萄糖苷酶的活性具 有抑制作用,导致肠道内多糖,寡糖及双糖的降解, 使平均血糖水平降低和糖化血红蛋白,尿糖降低. 现据文献…,对阿卡波糖胶囊进行了测定. 1实验部分 1.1仪器与试药 }玎P一1l00型高效液相色谱仪,?紫外检测 器,}玎PCh蛐tati0n化学工作站(美国惠普公司).乙 腈为色谱纯;其余试剂均为纯;水为重蒸馏水; 阿卡波糖对照品(四川抗菌素工业研究所,含量为 99.4%);阿卡波糖胶囊(四川宝光药业股份有限公 司,批号:030301,03040l,030402). 1.2方法与结果 1.2.1色谱条件~chrospherNH2色谱柱(5, 4.6——帅X250——帅),流动相为乙腈一磷酸盐缓冲液 (72:28)(磷酸盐缓冲液:取磷酸二氢钾600呜,无 水磷酸氢二钠279哗,置l000nll量瓶中,加水溶解 并稀释至刻度);检测波长210m,流速1.3nll? rnin,,柱温35?.理论板数按阿卡波糖峰计不低 于2000. 1.2.2方法的专属性考察取阿卡波糖胶囊内容 ,置50nll量瓶中,分别加1啪l?nll盐酸 物200哗 溶液,0.1mol?nll氢氧化钠溶液,3%过氧化氢溶液 l0nll,置水浴(70?)中加热40rnin,加流动相至刻 度.结果经酸,碱,氧化剂破坏后,产生的杂质峰都 能得到有效分离,明该色谱系统能有效检测出杂 质(图1). 1.2.3线性范围精密称取置减压干燥器(P205) 中干燥的阿卡波糖对照品适量,加流动相超声溶解, 制成4.0哗?nll的溶液;分别精密量取1.5,2.0, 2.5,3.0,3.5nll,置l0nll量瓶中,加流动相定容至 刻度,摇匀.精密吸取20注入液相色谱仪,记录 峰面积.阿卡波糖在0.6,1.2哗?nll范围内,色 谱峰面积(A)与浓度(C)呈良好的线性关系,回归方 程::4.273Xl03C+l9.67(r:0.9999). 作者简介:彭远松,男,四川犍为,助理师,从事药品检验与质量分析工作. 第1期彭远松,等.HPLC测定阿卡波糖胶囊的含量及有关物质59 AI/..人 5 』\ 图1酸(A),碱(B)和氧化(C)破坏后的HPLC方法专属性考察图谱 1SpedfmtyexanlinatioltlofHPLCmethodafh~tAtarlmsedeeomlmsedbyacm(a),byakaU( B)andbyoxidatioll(C) 1.阿卡波糖(Acarb0se);2,8.分解产物(deofedsubstances) 1.2.4最低检测限在选定的色谱条件下,按信噪 比为3对最低检测限进行测定.结果浓度为0.4× 10I4nag?ml,,进样20l时,主成分的峰高约为噪 音的3倍,即最低检测限量为0.08. 1.2.5重复性和稳定性实验精密称取同一批样 品5份,照"1.3.1"项下方法进行测定,结果含量平 均值为99.40%(n=5),RSD=0.86%.另取该批样 品制备的供试品溶液在室温下放置2,4,6,8,10, 24垢测定,峰面积的RSD=1.6%(n=6),说明供 试品溶液在24h内稳定. 1.2.6加样回收试验分别精密称取已知含量的 样品(批号:030401)适量,共5份,分别置5Oml量瓶 中,精密加入阿卡波糖对照品25nag,按"1.3.1"项下 方法测定,测得平均回收率为100.63%,RSD= 1.14%(n=5). 1.3结果 1.3.1含量的测定取阿卡波糖胶囊装量差异项 下的内容物,混匀,取约200nag(相当于阿卡波糖5O mg),精密称定,置5Oml量瓶中,加流动相45ml,超 声处理20min,放冷,用流动相定容至刻度,摇匀,过 滤.精密吸取续滤液20l注入液相色谱仪,记录色 谱图;另精密称取阿卡波糖对照品适量,制备成1.0 nag?ml的对照品溶液,同法测定,其tR=20.17min (图2).按外标法以峰面积计算(表1). 2 皇 A鲁 《 J?_J 皇 B 鲁 《 J,.,一 u102001020 I/mln 图2阿卡波糖对照品(A)和样品(B)的高效液相色谱图 2ILC~hrmmtogmmsofAtarlmse(A)andsam#e(B) 1.3.2有关物质的测定取"1.3.1"项下的供试品 溶液,作为有关物质测定的供试品溶液.精密量取 此溶液lml于25ml量瓶中,加流动相稀释成O.04 nag?ml..的溶液作为对照溶液.照上述色谱条件测 定,精密吸取对照溶液20l注入液相色谱仪,调检 测灵敏度,使主成分峰的峰高约为记录仪满量程的 10%,15%;再吸取上述两种溶液各2O分别进 样,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍,供试品 溶液的色谱图中如显杂质峰,量取各杂质峰面积的 总和,用自身对照法计算,结果见表1. 表1含量及有关物质的测定结果 TaMe1Theresultsofassayandrelatedsulmtamamdetenlfilmt~ 2讨论 实验曾选用水作溶剂,但在本色谱条件下水在 主峰后有一负峰出现,影响杂质的检出,改用流动相 即可消除负峰干扰. 为确定检测波长,对溶液进行紫外光谱扫描,吸 收范围为193,250nm,在流动相中系末端吸收,最 大吸收波长约为194nm,由于受流动相中洗脱剂的 限制,不宜采用此波长,经试验,在210nm处阿卡波 糖有较大的响应值,也利于各个杂质的检出,故确定 此波长为检测波长. 由于阿卡波糖含有多个羟基,在ODS柱上峰形 差,甚至出现双峰.当理论板数大于20O0时,采用 氨基柱能保证邻近杂质峰的分离度,文中氨基柱的 理论板数为3450,分离度1.68,峰形较对称,专属性 好.经试验,流动相的比例可适当调节,处方所含辅 料不干扰含量及有关物质的测定,文中所用方法适 用于该产品的质量控制. 参考文献: [1]国家药品监督管理局(试行).ws一277(x一236)一20o2 收稿日期:2003—06